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禽巴氏杆菌B_(26)-T_(1200)弱毒冻干苗的研究 Ⅰ.禽巴氏杆菌B_(26)- T_(1200)弱毒菌株的选育

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中国兽医学报 1998年第3期18卷 248-250页

作者：宁振华左婉顺谢芝勋黄媛刘加波庞耀珊郑永娇广西兽医研究所

从广西各地患禽巴氏杆菌病急性死亡的鸡、鸭肝脏分离出５６株禽巴氏杆菌强毒株，经培养特性和生化特性试验鉴定，从中选出１５株典型禽巴氏杆菌菌株。Ｃａｒｔｅｒ荚膜抗原分型鉴定，１５株菌均为荚膜Ａ型，间接血凝滴度为１∶１６０～... 详细信息

从广西各地患禽巴氏杆菌病急性死亡的鸡、鸭肝脏分离出５６株禽巴氏杆菌强毒株，经培养特性和生化特性试验鉴定，从中选出１５株典型禽巴氏杆菌菌株。Ｃａｒｔｅｒ荚膜抗原分型鉴定，１５株菌均为荚膜Ａ型，间接血凝滴度为１∶１６０～１∶６４０。通过毒力和免疫原性测定，从中选择毒力较强、免疫原性较好的Ｂ２５、Ｂ２６、Ｂ２７３菌株进行人工致弱，其中Ｂ２６菌株在０．１％裂解全血马丁汤中，通过物理诱变方法致弱，即在传代过程中，把培养温度由３７℃逐渐提高到４５℃，每１２ｈ传１代而成功致弱，传至１２００代时，毒力显著减弱，且仍保持其良好的免疫原性和培养特性。

关键词：禽巴氏杆菌弱毒菌株疫苗选育

禽巴氏杆菌C_(48-1)株成熟外膜蛋白H基因的原核融合表达

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 67-70页

作者：曹素芳黄青云韩先干陈红英邓宪方华南农业大学河南农业大学河南郑州450002

根据禽巴氏杆菌5:A C48-1株OmpH全长基因序列设计一对特异性引物,经PCR扩增获得成熟外膜蛋白H基因(OmpmH),将OmpmH片段非定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-OmpmH。转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白... 详细信息

根据禽巴氏杆菌5:A C48-1株OmpH全长基因序列设计一对特异性引物,经PCR扩增获得成熟外膜蛋白H基因(OmpmH),将OmpmH片段非定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-OmpmH。转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-OmpmH。SDS-PAGE结果显示,GST-OmpmH约为63 Ku,与预期的大小一致。Western blot检测结果表明,GST-OmpmH能与C48-1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应,证明C48-1 ompmH原核融合表达成功。其可溶性蛋白经亲和层析纯化,得到了纯度较高的目的蛋白OmpmH。为进一步研究禽巴氏杆菌C48-1 OmpmH的免疫原性奠定了基础。

关键词：禽巴氏杆菌 OmpmH SDS—PAGE westrn blot 原核表达

禽巴氏杆菌基因组的原核表达及感染血清的吸附

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禽巴氏杆菌基因组的原核表达及感染血清的吸附

作者：张爱国河南科技大学

学位级别：硕士

禽巴氏杆菌病又称为禽霍乱，是由禽巴氏杆菌引起的一种接触性的败血性传染病，该病具有突发性与流行性，给家禽养殖业造成巨大的经济损失，因此该病是重点防治的家禽类疾病之一。近年来接种疫苗成为预防禽巴氏杆菌病的一种有效措施，因... 详细信息

禽巴氏杆菌病又称为禽霍乱，是由禽巴氏杆菌引起的一种接触性的败血性传染病，该病具有突发性与流行性，给家禽养殖业造成巨大的经济损失，因此该病是重点防治的家禽类疾病之一。近年来接种疫苗成为预防禽巴氏杆菌病的一种有效措施，因此研制高效疫苗已成为研究工作的热点。引起禽巴氏杆菌病的病原菌是禽巴氏杆菌，又称为禽多杀性巴氏杆菌，寻找禽巴氏杆菌的致病基因，能够更好地了解其致病机理，对有效地防治禽巴氏杆菌病具有重要的意义。致病菌在宿主的体内表达而在体外不表达的功能基因称为“体内诱导基因”（in vivo-induced gene）。研究表明，这些体内诱导基因对病原菌在体内的生存和致病性有着十分重要的意义。在本研究中，构建了禽巴氏杆菌基因组表达文库，对重组质粒进行原核表达分析，然后利用体内诱导抗原技术（in vivo-induced antigen technology，IVIAT），通过感染了病原菌的宿主血清来筛选病原菌在宿主体内特异性表达的病原基因，为新疫苗和新型诊断方法研发提供新靶标，为进一步阐明该病的致病分子机理提供了理论依据，同时为深入研究的疫苗研制工作做了铺垫。本文首先构建禽巴氏杆菌CVCC474的基因组表达文库：提取禽巴氏杆菌的基因组，用限制性内切酶Sau3A I酶切，然后胶回收500-3000bp的基因组DNA片段。限制性内切酶BamH I酶切原核表达载体pET30a/b/c，胶回收线性载体片段，用碱性磷酸酶CIAP去磷酸化。将基因组酶切片段与载体pET30a/b/c连接后，转入大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，构建了禽巴氏杆菌CVCC474基因组表达文库，经计算文库容量为l.5×104，随机挑取9个克隆进行双酶切实验，结果显示随机挑选的9个克隆与所用的表达载体和目的基因片段大小相符，证明禽巴氏杆菌基因组表达文库构建的比较成功。然后用碱裂解法提取重组质粒，经IPTG诱导后，与原核表达载体pET30a/b/c对照，证明了表达产物为构建的重组质粒所表达的蛋白。血清的吸附及禽巴氏杆菌基因组表达文库的筛选：收集感染禽巴氏杆菌雏鸡的血清，分别用体外培养的大肠杆菌BL21（DE3）（含pET30a空载体）和禽巴氏杆菌对鸡血清进行吸附，目的是去除血清中针对体外表达的抗原的抗体，采用间接ELISA检测血清吸附过程中抗体的效价，结果显示血清经过吸附后，抗体滴度呈现明显下降，当血清经过第三次吸附后，抗体的OD值基本保持不变，证明吸附的效果较好，此时血清里只剩下了与禽巴氏杆菌在体内诱导表达的抗原相反应的抗体亚群。然后采用菌落原位免疫杂交的方法对基因组表达文库进行筛选，结果没有筛选到阳性克隆，其原因有待进一步研究。

关键词：禽巴氏杆菌基因组表达文库体内诱导抗原技术(IVIAT) 原核表达

禽巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因PCA10高效表达条件及产物分析

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中国兽医学报 1995年第4期15卷 403-404+370页

作者：孟锐奇姚湘燕朱平农牧大学军事兽医研究所

禽巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因ＰＣＡ１０高效表达条件及产物分析孟锐奇，姚湘燕，朱平（农牧大学军事兽医研究所长春１３００６２）禽多杀性巴氏杆菌的主要保护性抗原位于荚膜上￣［１］，部分保护性荚膜抗原基因已成功克隆，并且构建... 详细信息

禽巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因ＰＣＡ１０高效表达条件及产物分析孟锐奇，姚湘燕，朱平（农牧大学军事兽医研究所长春１３００６２）禽多杀性巴氏杆菌的主要保护性抗原位于荚膜上￣［１］，部分保护性荚膜抗原基因已成功克隆，并且构建了高效表达质粒￣［２，３］。本实验...

关键词：禽巴氏杆菌禽败血巴斯德氏菌荚膜抗原 PCA10 外源基因表达军事兽医研究所表达产物表达条件产物分析基因

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白头翁汤对鸡实验性禽巴氏杆菌的抗感染作用

动物医学进展 2019年第5期40卷 62-66页

作者：杨雪贞姚红艳马卫红刘济丹欧德渊贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 黔东南州动物卫生监督所贵州凯里556000

为确定禽巴氏杆菌活菌数较高范围的致病力及白头翁汤对禽巴氏杆菌的抗感染作用,综合应用分光光度法和平板计数法绘出禽巴氏杆菌生长曲线,确定禽巴氏杆菌活菌数较高的菌液OD600nm值范围。序贯法测定禽巴氏杆菌半数致死量(LD_(50)),急性... 详细信息

为确定禽巴氏杆菌活菌数较高范围的致病力及白头翁汤对禽巴氏杆菌的抗感染作用,综合应用分光光度法和平板计数法绘出禽巴氏杆菌生长曲线,确定禽巴氏杆菌活菌数较高的菌液OD600nm值范围。序贯法测定禽巴氏杆菌半数致死量(LD_(50)),急性毒试验检测白头翁汤中药方剂安全性,体外药敏试验检测白头翁汤对禽巴氏杆菌的抑菌作用。研究发现菌液OD600nm值与活菌数存在的相关性不高,仅在稳定期以前存在增长趋势的正相关。试验筛选出禽巴氏杆菌活菌数较高的OD600nm值范围是0.30～0.55。序贯法测出禽巴氏杆菌的LD_(50)值为5.0×10~7CFU/mL。急性毒试验发现白头翁汤中药方剂LD_(50)大于5 000 mg/kg,说明该中药方剂无毒。白头翁汤对禽巴氏杆菌体外最小抑菌浓度为3.91 mg/mL,表明禽巴氏杆菌对白头翁汤中药方剂高度敏感。

关键词：禽巴氏杆菌白头翁汤半数致死量生长曲线

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替米考星饮水剂治疗人工感染禽巴氏杆菌试验

中国兽医杂志 2005年第8期41卷 17-19页

作者：周绪正张继瑜李宏胜李金善李剑勇中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所新兽药重点工程实验室甘肃兰州730050

替米考星是泰乐菌素的合成衍生物，具有其类似的分子结构和抗菌谱，但对某些病原菌的抗菌活性比泰乐菌素更高，如鸡支原体，巴氏杆菌等。替米考星由于具有非常高的抗菌活性，在鸡上作为饮水剂预防和治疗呼吸道感染疾病，具有使用剂量比... 详细信息

替米考星是泰乐菌素的合成衍生物，具有其类似的分子结构和抗菌谱，但对某些病原菌的抗菌活性比泰乐菌素更高，如鸡支原体，巴氏杆菌等。替米考星由于具有非常高的抗菌活性，在鸡上作为饮水剂预防和治疗呼吸道感染疾病，具有使用剂量比泰乐菌素低得多的优势。近年来国内多家药厂已开始研制并生产出替米考星，[第一段]

关键词：禽巴氏杆菌替米考星饮水剂人工感染治疗试验泰乐菌素鸡支原体呼吸道感染

替米考星对雏鸡增重及预防人工感染禽巴氏杆菌的效果观察

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畜牧与兽医 2004年第12期36卷 10-12页

作者：李宏胜张继瑜周旭正李建勇李金善苗小楼许忠赞张占峰中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所甘肃兰州730050 甘肃省兰州市正丰制药有限责任公司甘肃兰州730046

将替米考星以 3个剂量 (10 0mg/L、 2 0 0mg/L、 30 0mg/L)和泰乐菌素以 50 0mg/L给雏鸡饮水给药 5d,结果 2种药物对雏鸡均有明显的增重效果 ,且替米考星给药量与增重效果呈正相关。人工感染试验结果显示 ,替米考星 3个剂量预防组及泰... 详细信息

将替米考星以 3个剂量 (10 0mg/L、 2 0 0mg/L、 30 0mg/L)和泰乐菌素以 50 0mg/L给雏鸡饮水给药 5d,结果 2种药物对雏鸡均有明显的增重效果 ,且替米考星给药量与增重效果呈正相关。人工感染试验结果显示 ,替米考星 3个剂量预防组及泰乐菌素预防组对抗御人工感染禽巴氏杆菌均有明显的效果 ,但替米考星 3个剂量预防组的抗感染效果均极显著高于泰乐菌素预防组 (P <0 0 1)。试验结果表明 ,替米考星饮水给药对雏鸡除具有增重作用外 ,还具有抗感染 ,降低发病率 ,减少病理损害 ,提高成活率的作用 ;

关键词：替米考星泰乐菌素增重禽巴氏杆菌

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广西禽巴氏杆菌的分离及其特性的测定

中国家禽 1999年第9期21卷 13-14页

作者：谢芝勋谢志勤刘加波庞耀珊邓显文广西兽医研究所南宁530001

1990～1997年间，本研究室从广西不同地区鸡场死于禽巴氏杆病菌的家禽中分离并鉴定13株禽巴氏杆菌（包括鸡源的12株，鸭源的1株）。菌株经中国兽药监察所进行Carter定型，结果为荚膜A型。13个分离菌株都100％致死本地三黄鸡。

关键词：禽巴氏杆菌分离鉴定生化特性毒力测定

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复方恩诺沙星对禽巴氏杆菌的抑菌效果

湖南农业大学学报（自然科学版） 2001年第5期27卷 396-397页

作者：许建平刘湘新何湘蓉范玉辉湖南农业大学动物科学技术学院湖南长沙410128

用试管法和杯碟法研究了复方恩诺沙星对禽巴氏杆菌的抑菌效果 .结果表明 ,恩诺沙星与阿普拉霉素组成的复方恩诺沙星制剂对禽巴氏杆菌的最低抑菌浓度为 2μg/ m L ,而单独使用恩诺沙星和阿普拉霉素对禽巴氏杆菌的最低抑菌浓度分别为 3 .2... 详细信息

用试管法和杯碟法研究了复方恩诺沙星对禽巴氏杆菌的抑菌效果 .结果表明 ,恩诺沙星与阿普拉霉素组成的复方恩诺沙星制剂对禽巴氏杆菌的最低抑菌浓度为 2μg/ m L ,而单独使用恩诺沙星和阿普拉霉素对禽巴氏杆菌的最低抑菌浓度分别为 3 .2μg/ m L和 2 .2 5 u/ m L ,表明二者制成复方后 ,表现为协同作用。

关键词：复方恩诺沙星禽巴氏杆菌抑菌效果