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离体培养滇重楼根茎中甾体皂苷类化学成分的研究

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中国中药杂志 2021年第19期46卷 4936-4944页

作者：张莹莹金琳吴钰颖李睿王开玲李海峰大理大学药学院云南大理671000 大理大学药物研究所云南大理671000 云南省滇西抗病原植物资源筛选研究重点实验室(培育) 云南大理671000 丽江市传染病医院云南丽江674100

该研究采用LC-MS与HPLC技术对离体培养条件下3种不同产地滇重楼根茎中甾体皂苷类化学成分进行定性、定量分析,探究在离体培养条件下滇重楼根茎中能否合成包含2020年版《中国药典》中质量控制指标性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ和Ⅶ在内的甾体皂... 详细信息

该研究采用LC-MS与HPLC技术对离体培养条件下3种不同产地滇重楼根茎中甾体皂苷类化学成分进行定性、定量分析,探究在离体培养条件下滇重楼根茎中能否合成包含2020年版《中国药典》中质量控制指标性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ和Ⅶ在内的甾体皂苷类化学成分。从3种不同产地云龙长新(S1)、大理凤仪(S2)和洱源牛街(S3)离体培养滇重楼根茎中鉴定出滇重楼皂苷A、D、E,原重楼皂苷Ⅱ,重楼皂苷G、H,重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ,薯蓣皂苷,纤细薯蓣皂苷,薯蓣次皂苷A,Tg, isomer of Th, saponin Th, reclinatoside, proto-paris D,pseudoproto-dioscin, 23-O-glc-(23S,25R)-spirost-5-en-3β,23α-diol-3-O-rha-(1→2)-[ara(1→4)]-glc或27-O-glc-(23S,25R)-spirost-5-en-3β,27α-diol-3-O-rha-(1→2)-[ara(1→4)]-glc共20个甾体皂苷类化学成分。其中,从离体培养S1滇重楼根茎中检测到重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ,质量分数分别为0.109 1%、0.165 2%、0.051 03%,总量为0.325 3%;从离体培养S2滇重楼根茎中检测到重楼皂苷Ⅱ、Ⅶ,质量分数分别为0.192 2%、0.074 23%,总量为0.266 5%;从离体培养S3滇重楼根茎中检测到重楼皂苷Ⅱ、Ⅶ,质量分数分别为0.207 7%、0.186 9%,总量为0.394 6%。上述结果表明在离体培养条件下滇重楼根茎中可以合成包含2020年版《中国药典》中质量控制指标性成分重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ在内的甾体皂苷类化学成分,但总量尚未达到2020年版《中国药典》不得少于0.60%的规定。因此,该研究滇重楼离体培养方案可行,但离体培养条件还需进一步改善。

关键词：滇重楼离体培养根茎液质联用甾体皂苷

离体培养条件下莱氏绿僵菌致病形态和非致病形态的转录组分析

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山东农业科学 2023年第11期55卷 49-56页

作者：刘守柱张希鹏郝轩卉任宪銮王世贤聂玉恒吴蕊聊城大学农学与农业工程学院山东聊城252059 山东农业大学植物保护学院山东泰安271018

莱氏绿僵菌[Metarhizium rileyi(Farlow)Kepler]是一种重要的昆虫病原真菌,在寄生过程中有致病和非致病两种形态,但只有致病形态能杀死寄主。为了解莱氏绿僵菌由非致病形态向致病形态转变的分子机制,本研究对这两种形态的菌体进行转录... 详细信息

莱氏绿僵菌[Metarhizium rileyi(Farlow)Kepler]是一种重要的昆虫病原真菌,在寄生过程中有致病和非致病两种形态,但只有致病形态能杀死寄主。为了解莱氏绿僵菌由非致病形态向致病形态转变的分子机制,本研究对这两种形态的菌体进行转录组分析。结果表明,两种形态的菌体共得到89498个Unigenes,GO注释中与“细胞组分”有关的基因占比最高;KOG注释中与“主要功能预测”有关的基因最多;KEGG注释的“代谢”子类中与“代谢通路”有关的基因最多,在“环境信息过程”子类中与“MAPK信号途径”有关的基因最多,在“细胞过程”子类中与“群体感应”有关的基因也有较高的表达,这初步为莱氏绿僵菌二型性转变的群体感应调节机制提供了基因证据。差异分析表明,莱氏绿僵菌形态转变过程中有3113个基因表达上调,3671个基因表达下调,但差异富集分析未得到有效的结果。综上,莱氏绿僵菌形态转变时基因表达有明显的变化,代谢旺盛、触发群体感应机制并激活细胞信号转导途径,最终完成非致病形态向致病形态的转变。本研究可为深入了解莱氏绿僵菌致病的分子机制提供有益的借鉴。

关键词：莱氏绿僵菌转录组分析致病形态非致病形态形态转变离体培养

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白蜡花粉最佳离体萌发培养基筛选

南京林业大学学报（自然科学版） 2023年第3期47卷 70-76页

作者：刘蓉吴德军王因花任飞李丽燕丽萍周晓锋山东省林业科学研究院山东省林木遗传改良重点实验室山东济南250014 中国农业大学烟台研究院山东烟台264670

【目的】筛选白蜡(Fraxinus sp.)花粉最适离体培养基,能够为后续的授粉受精和育种工作提供一定的参考依据。【方法】通过收集绒毛白蜡‘金箭’(F.velutina‘Jinjian’)和美国红梣‘鲁蜡5号’(F.pennsylvanica‘Lula 5’)的花粉,比较固... 详细信息

【目的】筛选白蜡(Fraxinus sp.)花粉最适离体培养基,能够为后续的授粉受精和育种工作提供一定的参考依据。【方法】通过收集绒毛白蜡‘金箭’(F.velutina‘Jinjian’)和美国红梣‘鲁蜡5号’(F.pennsylvanica‘Lula 5’)的花粉,比较固体培养基和液体培养基上花粉的萌发情况,选用适宜的离体培养法观察培养时间对花粉萌发情况的影响,设计正交试验,筛选最佳离体萌发培养基。【结果】(1)固体培养基上‘金箭’的花粉萌发率均显著高于液体培养基,02和03号固体培养基上‘鲁蜡5号’的花粉萌发率显著高于液体培养基。(2)培养2.5 h左右的花粉适宜进行生活力的观测。(3)正交试验表明:‘金箭’花粉的最适萌发培养基为150 g/L蔗糖+20 mg/L硼酸+30 mg/L氯化钙,‘鲁蜡5号’花粉的最适萌发培养基为150 g/L蔗糖+40 mg/L硼酸+30 mg/L氯化钙。【结论】采用150 g/L蔗糖+20 mg/L硼酸+30 mg/L氯化钙的固体培养基培养2.5 h后适宜统计两种白蜡花粉的萌发情况,但不同种的花粉萌发率与花粉管长度的相关性有差异。

关键词：白蜡花粉离体培养培养基

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广亲和砧木小果甜柿离体快繁技术建立及优化

果树学报 2023年第9期40卷 1980-1991页

作者：刘彬杜晓云陈文兴郭大勇徐莉清张青林罗正荣华中农业大学果蔬园艺作物种质创新与利用全国重点实验室武汉430070 山东省烟台市农业科学研究院山东烟台265599

【目的】近年来广亲和砧木类型小果甜柿已经在我国柿产业中广泛应用,但尚未建立起规模化无性系营养繁殖体系,尤其是离体培养的生根条件亟待优化,旨在建立小果甜柿组培快繁体系,并优化其生根条件。【方法】以小果甜柿为试材,重点探讨无... 详细信息

【目的】近年来广亲和砧木类型小果甜柿已经在我国柿产业中广泛应用,但尚未建立起规模化无性系营养繁殖体系,尤其是离体培养的生根条件亟待优化,旨在建立小果甜柿组培快繁体系,并优化其生根条件。【方法】以小果甜柿为试材,重点探讨无菌离体培养过程中的生长调节剂种类、处理时间,以及暗处理等因素对其试管苗生根的影响。【结果】(1)休眠芽经75%乙醇消毒30 s,再使用1%次氯酸钠消毒6 min,消毒效果最佳,消毒后的休眠芽接种到含MS(Murashige&Skoog)(含1/2 NH4NO3和1/2 KNO3)+1 mg·L^(-1)玉米素(zeatin,ZT)+0.1 mg·L^(-1)吲哚乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)+30 mg·L^(-1)蔗糖+7 g·L^(-1)琼脂+0.6 g·L^(-1)聚乙烯吡咯烷酮-40(polyvinylpyrrolidone-40,PVP-40)的初代培养基上,可获得62.56%的无根试管苗;(2)取初代培养试管苗侧芽接种于DKW+1 mg·L^(-1)ZT+0.1 mg·L^(-1)IAA+1000μmol·L^(-1)甜菜碱+30 mg·L^(-1)蔗糖+7 g·L^(-1)琼脂+0.6 g·L^(-1)PVP-40的培养基上,平均分蘖数1.59个,株高度3.30 cm,叶片数9.49片·株-1,茎节数7.40节·株-1,继代培养时可按照0.5 cm切取带芽茎段继续增殖培养,有效继代数目可达10.46个·代-1;(3)用100 mg·L^(-1)萘乙酸(1-naphthaleneacetic acid,NAA)浸蘸生根处理茎段基部10 min,转入1/2 MS培养基,生根率90.00%,平均总根长度23.17 cm,平均根系表面积6.73 cm^(2),平均根系体积0.19 cm3;(4)茎段在1/2 MS+0.5 mg·L^(-1)NAA+0.2 mg·L^(-1)IBA+5 mg·L^(-1)褪黑素(melatonin,MT)+30 mg·L^(-1)蔗糖+7 g·L^(-1)琼脂+0.6 g·L^(-1)PVP-40的培养基中暗处理10 d后,再接种至无激素1/2 MS培养基上,生根率71.50%,平均总根长度24.14 cm,平均根系表面积9.74 cm^(2),平均根系体积0.27 cm3;(5)生根后的组培苗经闭瓶和开盖炼苗后移栽,成苗率52.5%,移栽至大田8个月后平均株高度49.17 cm,茎粗6.0 mm,可用于接穗的嫁接繁殖。【结论】构建的小果甜柿高效离体快速繁殖体系,为优质甜柿苗木的规模化营养繁殖提供了科学依据。

关键词：小果甜柿离体培养生根驯化移栽

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马蔺幼胚高效再生体系的建立

植物研究 2023年第3期43卷 333-339页

作者：安文杰王银杰刘清泉杨永恒张婷范少茹张永侠原海燕山西林业职业技术学院太原030009 江苏省中国科学院植物研究所南京210014

以马蔺(Iris lacteal var.chinensis)幼胚为外植体,探究不同时期幼胚及不同植物生长调节剂对愈伤组织、体胚和不定芽诱导的影响。结果表明:在本试验条件下最佳取材时间为授粉后35~45 d,此时,幼胚发育完全但胚乳尚未完全硬化,幼胚剥取容... 详细信息

以马蔺(Iris lacteal var.chinensis)幼胚为外植体,探究不同时期幼胚及不同植物生长调节剂对愈伤组织、体胚和不定芽诱导的影响。结果表明:在本试验条件下最佳取材时间为授粉后35~45 d,此时,幼胚发育完全但胚乳尚未完全硬化,幼胚剥取容易;愈伤组织最适诱导培养基为MS+1.0 mg·L^(-1)2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.2 mg·L^(-1)6-苄氨基嘌呤(6-BA),诱导率为83.33%;最适体胚诱导培养基为MS+0.25 mg·L^(-1)2,4-D+0.05 mg·L^(-1)6-BA,诱导率71.67%;最佳不定芽诱导和增殖培养基为MS+1.0 mg·L^(-1)噻苯隆(TDZ)+0.2 mg·L^(-1)萘乙酸(NAA),诱导率为78.33%,增殖系数为3.65;在添加0.1 mg·L^(-1)NAA的MS培养基上诱导生根,4周后的生根率达95%以上;生根培养4周的植株清洗掉根部培养基后,移栽至经高温消毒的蛭石中培养,成活率达95%以上。该研究建立了高效的马蔺再生体系,可为马蔺的遗传改良和基因功能研究奠定基础。

关键词：马蔺幼胚离体培养愈伤诱导高效再生

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耐寒美国红枫‘秋火焰’离体培养技术研究

森林工程 2022年第4期38卷 26-33页

作者：杨一鹏刘芳杨凤军张文博于红李佶憓杨春辉杨菲红黑龙江八一农垦大学园艺园林学院黑龙江大庆163319

在北方寒冷地区的绿化公司建立耐寒美国红枫的快繁体系,以增加北方寒冷地区尤其是东北地区的彩叶树种的种类。该试验以美国红枫‘秋火焰’(Acer rubrum‘Autumn Blaze’)为研究对象,以腋芽茎段为外植体进行离体培养,对外植体消毒方式、... 详细信息

在北方寒冷地区的绿化公司建立耐寒美国红枫的快繁体系,以增加北方寒冷地区尤其是东北地区的彩叶树种的种类。该试验以美国红枫‘秋火焰’(Acer rubrum‘Autumn Blaze’)为研究对象,以腋芽茎段为外植体进行离体培养,对外植体消毒方式、启动培养、继代增殖培养、壮苗培养,以及生根培养的培养基配方进行正交试验以及双因素方差分析。通过初代培养、继代增殖培养、壮苗培养和生根培养4个阶段建立快繁体系。结果表明,当消毒组合为5%NaClO+0.1%HgCl_(2)时,平均污染率为33.15%,平均存活率为60.98%,死亡率为5.87%;最佳增殖培养基为改良MS+0.4 mg/L CPPU+0.1 mg/L IBA+1.0 mg/L 6-BA,增殖系数为6.45;最佳壮苗培养基为改良MS+1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L IBA,平均株高为6.15 cm,茎粗为21.41 mm;最佳生根诱导培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L IBA,生根率达100%。此快繁体系效率高并适合应用于生产。

关键词：美国红枫 ‘秋火焰’ 离体培养培养基筛选快繁

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芍药花药培养及植株再生体系的建立

植物生理学报 2022年第12期58卷 2379-2385页

作者：李艳敏高杰王慧娟符真珠袁欣赵大球张和臣河南省农业科学院园艺研究所郑州450002 扬州大学园艺与植物保护学院郑州450002

本文对芍药(Paeonia lactiflora)花药培养及植株再生影响因素进行研究,以期为芍药遗传理论研究及实际育种提供新材料和技术支持。以4个芍药品种为材料,研究了低温预处理时间、黑暗培养时间、2,4-D浓度对愈伤组织诱导的影响,并比较了4个... 详细信息

本文对芍药(Paeonia lactiflora)花药培养及植株再生影响因素进行研究,以期为芍药遗传理论研究及实际育种提供新材料和技术支持。以4个芍药品种为材料,研究了低温预处理时间、黑暗培养时间、2,4-D浓度对愈伤组织诱导的影响,并比较了4个品种愈伤组织诱导率、体胚发生率和成苗率差异。结果表明:低温预处理6~8 d及黑暗培养0~7 d能提高愈伤组织诱导率,不同品种对2,4-D浓度需求不同,‘鱼鳞红’和‘东海朝阳’以0.5 mg·L^(-1)为宜,‘大富贵’和‘粉玉奴’以1.5 mg·L^(-1)为宜;仅‘大富贵’和‘粉玉奴’获得再生植株,包括单倍体、二倍体、非整倍体植株,以及少量的三倍体和四倍体植株等多种类型。因此,选择合适低温预处理时间和黑暗培养时间有利于提高花药愈伤组织诱导率,不同品种对芍药花药离体培养效果不同。

关键词：芍药花药离体培养单倍体

离体培养条件下GA对烟草胚柄PCD的诱导研究

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生物技术通报 2017年第3期33卷 71-77页

作者：罗岸陈克强长江大学生命科学学院荆州434023 武汉大学生命科学学院武汉430072

细胞程序性死亡(PCD)对于植物的正常生长至关重要,涉及整个生命周期中的诸多发育事件,其中植物激素是植物细胞PCD的一种重要调控因子。本研究建立了有效的烟草胚珠和胚胎离体培养体系。通过设置不同的赤霉素(GA)浓度梯度和不同的培养天... 详细信息

细胞程序性死亡(PCD)对于植物的正常生长至关重要,涉及整个生命周期中的诸多发育事件,其中植物激素是植物细胞PCD的一种重要调控因子。本研究建立了有效的烟草胚珠和胚胎离体培养体系。通过设置不同的赤霉素(GA)浓度梯度和不同的培养天数进行比较,认为100μmol/L的GA浓度和不超过3 d的培养时间对于研究比较合适。胚胎离体培养表明外源GA能够有效诱导烟草胚柄细胞PCD的发生;且随着GA浓度的增加,胚柄细胞PCD的比例会逐步上升。但过高的GA浓度和过长的培养时间也会导致胚体细胞出现异常的PCD现象。

关键词：胚柄细胞 PCD 赤霉素离体培养

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造礁石珊瑚共生虫黄藻离体培养方法的优化

微生物学报 2023年第4期63卷 1658-1671页

作者：覃良云许勇前陈金妮牛天祎余克服梁甲元广西大学海洋学院广西南宁530004 广西大学、广西南海珊瑚礁研究重点实验室广西南宁530004 广西大学、珊瑚礁研究中心广西南宁530004

【目的】开发一种高效地从造礁石珊瑚中分离、培养共生虫黄藻的技术方法,为珊瑚共生虫黄藻藻种资源储备和生理功能研究积累基础。【方法】首先采用微孔滤网过滤法和密度梯度离心法从造礁石珊瑚组织中直接分离或富集共生虫黄藻细胞,然后... 详细信息

【目的】开发一种高效地从造礁石珊瑚中分离、培养共生虫黄藻的技术方法,为珊瑚共生虫黄藻藻种资源储备和生理功能研究积累基础。【方法】首先采用微孔滤网过滤法和密度梯度离心法从造礁石珊瑚组织中直接分离或富集共生虫黄藻细胞,然后用改良的L1培养基在96孔板上对所得细胞进行离体培养,最后进行单细胞分离、培养和(或)平板划线培养获得单克隆虫黄藻细胞系。对所得虫黄藻单克隆藻株进行聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(polymerase chainreaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析,结合内转录间隔区2(internal transcribed spacer2,ITS2)和大亚基(large subunit,LSU)测序进行物种鉴定及系统发育分析。【结果】采用上述方法从涠洲岛的霜鹿角珊瑚(Acropora pruinose)和西沙群岛的丛生盔形珊瑚(Galaxea fascicularis)及柔枝鹿角珊瑚(Acropora tenuis)中分离、培养得到3个虫黄藻株系,编号分别为AP21C1、GF21D1和AT21A113。3株藻的ITS2基因型分别鉴定为C1、D1及A113亚系群,系统发育特征分别与已命名的虫黄藻Cladocopium goreaui、Durusdinium trenchii及Symbiodinium natans基本一致。3株藻细胞在对数生长期均有自旋运动且具有贴壁性,其中AP21C1株系的虫黄藻细胞无法在琼脂平板上生长。【结论】本研究提供了一种高效地对珊瑚共生虫黄藻进行离体培养的方法,将对后续珊瑚共生虫黄藻物种资源的探索、利用、生理功能研究等提供有力的技术理论支持。

关键词：虫黄藻造礁石珊瑚离体培养 Cladocopium Durusdinium Symbiodinium