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海军军医大学学报 2022年第11期43卷 1339-1342页

作者：柯嘉伟任伟夫边琪孙婧梅小斌董睿海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院心血管内科上海200433 海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院肾内科上海200433

1病例资料患者男,47岁,因“反复水肿伴蛋白尿2年余”于2021年12月21日就诊于海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院肾内科。该患者既往有高血压病史4年、痛风病史2年。患者于2019年2月24日起无明显诱因出现双下肢水肿及晨起后眼睑水肿... 详细信息

1病例资料患者男,47岁,因“反复水肿伴蛋白尿2年余”于2021年12月21日就诊于海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院肾内科。该患者既往有高血压病史4年、痛风病史2年。患者于2019年2月24日起无明显诱因出现双下肢水肿及晨起后眼睑水肿,自觉尿泡沫增多,未重视。

关键词：膜性肾病新月体肾病综合征磷脂酶A2受体利妥昔单抗

磷脂酶A2受体基因多态性与特发性膜性肾病气阴两虚证的相关性研究

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中华中医药杂志 2022年第2期37卷 1145-1148页

作者：彭贵军胡影影吴迪河南中医药大学第一附属医院郑州450008 郑州市第九人民医院郑州450000 河南省中医院郑州450000

目的:探讨磷脂酶A2受体(PLa2R)相关基因位点(rs35771982、rs3828323)与特发性膜性肾病(IMN)气阴两虚证的相关性。方法:将IMN患者66例分为气阴两虚证、非气阴两虚证两组,每组随机抽取15例患者外周血进行PLa2R SNP rs35771982、rs3828323... 详细信息

目的:探讨磷脂酶A2受体(PLa2R)相关基因位点(rs35771982、rs3828323)与特发性膜性肾病(IMN)气阴两虚证的相关性。方法:将IMN患者66例分为气阴两虚证、非气阴两虚证两组,每组随机抽取15例患者外周血进行PLa2R SNP rs35771982、rs3828323基因型分析、基因突变位点序列、峰图位点测序等检测。结果:在两组患者中两基因位点基因型及其等位基因频率分布差异均有统计学意义(Pa2R SNP rs35771982位点CC基因型、C等位基因较CG基因型、G等位基因构成比高,PLa2R SNP rs3828323位点CC基因型、C等位基因较CT基因型、T等位基因构成比高。结论:PLa2R基因多态性与IMN中医证型之间存在联系,PLa2R SNP rs3828323位点CC基因型和C等位基因可能与IMN多表现为气阴两虚证密切相关。

关键词：磷脂酶A2受体基因多态性特发性膜性肾病中医证型

自制抗人磷脂酶A2受体抗体ELISA试剂盒的临床应用评价

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生物工程学报 2018年第5期34卷 743-751页

作者：黄莉敏张大准王艳张巧梁伟张永顶熊祖应北京大学深圳医院肾内科广东深圳518035 深圳市伯劳特生物制品有限公司广东深圳518054

旨在自制能够辅助诊断原发性膜性肾病的抗磷脂酶A2受体(PLa2R)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测试剂盒;通过包埋HEK293细胞表达的重组抗原、患者血清与抗原反应、酶的催化放大效应测定样本中抗PLa2R IgG滴度,通过临床数据分析、与... 详细信息

旨在自制能够辅助诊断原发性膜性肾病的抗磷脂酶A2受体(PLa2R)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测试剂盒;通过包埋HEK293细胞表达的重组抗原、患者血清与抗原反应、酶的催化放大效应测定样本中抗PLa2R IgG滴度,通过临床数据分析、与市售试剂盒的比对,评价该试剂盒的临床应用价值及性能。研究发现自制试剂盒与国外试剂盒检测阳性一致率97.2%,阴性一致率100%;检测限不高于2 RU/mL;准确度的测量相对偏差在±15%区间内;试剂盒线性范围在2–500 RU/mL,线性相关系数r值不低于0.990 0;重复性检测的变异系数(CV)小于15%;于37℃恒温箱放置1周后,2–8℃放置1年后,检测性能无明显改变。结果表明自制试剂盒对血清抗PLa2R抗体检测的敏感性、特异性均与德国欧蒙公司(E150522BD)试剂盒相近,诊断效能高,可用于原发性膜性肾病辅助诊断。

关键词：磷脂酶A2受体抗体酶联免疫吸附试验原发性膜性肾病血清

磷脂酶A2受体表位对特发性膜性肾病预后的影响

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磷脂酶A2受体表位对特发性膜性肾病预后的影响

作者：祝婉婷中国医科大学

学位级别：硕士

目的:通过检测特发性膜性肾病患者PLa2R表位表达的水平,联合临床指标,分析PLa2R表位与临床指标的关系,进一步探讨PLa2R表位对特发性膜性肾病预后的临床指导意义。方法:选取2016年9月-2019年12月盛京医院住院诊断为特发性膜性肾病患者116... 详细信息

目的:通过检测特发性膜性肾病患者PLa2R表位表达的水平,联合临床指标,分析PLa2R表位与临床指标的关系,进一步探讨PLa2R表位对特发性膜性肾病预后的临床指导意义。方法:选取2016年9月-2019年12月盛京医院住院诊断为特发性膜性肾病患者116人,收集患者的临床资料,并随访≥2年,记录治疗与转归。采用ELISA法检测血清抗PLa2R抗体水平。根据PLa2R蛋白的氨基酸序列,分析CysR、CTLD1和CTLD7抗原表位的相关信息,进行基因合成,克隆至表达载体,进行外源蛋白的诱导表达、纯化,应用ELISA方法检测IMN患者CysR、CTLD1和CTLD7抗原表位表达水平,应用健康组人群平均值+3SD界定阳性范围,根据表位表达水平分组,比较不同表达组之间临床指标的差异;分析不同抗原表位与临床指标的相关性;比较分析治疗有效组和无效组IMN患者临床基本特征,并结合CysR、CTLD1和CTLD7表位表达水平的差异,进一步探寻影响IMN患者预后的指标。结果:共收集诊断为特发性膜性肾病患者116例,年龄19-70岁,平均49.5岁,其中男性62例,女性54例,90例患者治疗有效,26例患者治疗无效。1、健康组与病例组三种抗原表位均存在差异性（P＜0.05）,其中病例组CysR阳性61例,阴性55例;CTLD1阳性49例,阴性67例;CTLD7阳性25例,阴性91例。2、CysR高表达组尿酸水平较高（P＜0.05）;CTLD1高表达组血Ig G水平较高,但是总胆固醇水平较低（P＜0.05）;CTLD7高表达组血Ig G水平较高（P＜0.05）。3、CysR与血Ig G相关（P＜0.05）;CTLD1与抗PLa2R抗体,血C3、胆固醇、尿比重存在相关性（P＜0.05）,但调整变量后CTLD1与血C3,胆固醇的相关性不存在统计学意义（P＞0.05）;CTLD7与血C3、血Ig G含量呈正相关（P＜0.05）。4、血Ig G在治疗无效组水平较高（P＜0.05）,其余临床指标未见明显的统计学差异。5、cox回归分析提示CTLD1是疾病缓解的不利因素（P＜0.05,HR=0.734）,CTLD1阳性预示着预后不良（P＜0.05,HR=0.628）,而CysR、CTLD7及其他临床指标对预后无影响（P＞0.05）。结论:1、CysR高表达的患者尿酸水平更高;CTLD1,CTLD7高表达的患者血Ig G水平更高。2、表位表达与抗PLa2R抗体存在相关性,CysR与血Ig G相关,CTLD1与尿比重相关,CTLD7与血C3、血Ig G相关。3、血Ig G在治疗无效组的水平较高。4、CTLD1表位表达水平与患者的预后相关,CTLD1表达水平高预示着预后不良（P＜0.05,HR=0.734）,CTLD1表位阳性是病情缓解的不利因素（P＜0.05,HR=0.628）。

关键词：特发性膜性肾病磷脂酶A2受体表位

M型磷脂酶A2受体及其抗体在乙肝病毒相关性膜性肾病中的临床意义

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中南大学学报（医学版） 2016年第10期41卷 1064-1068页

作者：许向青朱雪婧袁曙光姜文玲夏运成刘虹李军孙林彭佑铭刘伏友中南大学湘雅二医院肾内科长沙410011 中南大学肾脏病研究所长沙410011

目的:研究M型磷脂酶A2受体(phospholipase a2 receptor,PLa2R)在乙肝病毒相关性膜性肾病(hepatitis B virus-associated membranous nephropathy,HBV-MN)患者血液及肾组织中的表达情况,并探讨肾组织PLa2R阳性表达在乙型肝炎相关性肾小球肾炎(hepatitis B virus associated glomerulone nephritis,HBV-GN)患者中的临床和病理特点。方法:选取经肾活检确诊的49例HBV-MN患者。检测血清抗PLa2R抗体以及肾组织PLa2R的表达,将患者分为肾组织PLa2R表达阳性组和阴性组,比较两组间临床指标、病理改变、血抗PLa2R抗体表达水平的差异。结果:17例患者存在肾组织PLa2R阳性表达,其中10例患者血清抗PLa2R抗体阳性。肾组织阳性组较阴性组24 h尿蛋白水平升高,血白蛋白水平下降,血清Hbs Ag阳性比例更高(70.5%),肾组织Hbs Ag表达比例更高(71%)。结论:肾组织PLa2R以及血清抗PLa2R抗体在HBV-MN患者中有一定表达,其表达可能与HBV-MN患者血清以及肾组织中Hbs Ag沉积有关。肾组织PLa2R阳性患者肾小球慢性损伤可能相对更重。

关键词：乙肝病毒相关性膜性肾病磷脂酶A2受体 M型磷脂酶A2受体抗体

磷脂酶A2受体胞外CTLD结构域与多环芳烃相互作用研究

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磷脂酶A2受体胞外CTLD结构域与多环芳烃相互作用研究

作者：罗秀娜大连理工大学

学位级别：硕士

特发性膜性肾病(Idiopathic membranous nephropathy,IMN)是一种抗体介导的肾小球疾病,属于器官特异性自身免疫性疾病(Autoimmune diseases,AD)。80%IMN患者呈现抗磷脂酶A2受体(Phospholipase a2 receptor,PLa2R)抗体阳性,而健康人及其他肾病患者表现为阴性,目前抗PLa2R抗体已成为临床诊断IMN的血清学标志物。抗PLa2R抗体结合肾小球足细胞表面的PLa2R并在原位形成免疫复合物沉积,引发炎症,破坏肾小球过滤屏障最终引发IMN。同其它AD一样,IMN也受环境和遗传两大因素的影响。全基因组关联研究表明IMN与PLa2R和HLA复合物II类中的单核苷酸多态性(SNP)显著关联,当结合SNP的疾病相关基因时患IMN的风险增加。一直以来研究人员致力于阐明人体自身免疫与SPN在IMN发病机制中的角色,而忽略了环境风险如何影响IMN的发病机制。随着工业化水平的提高,环境污染越来越受到关注,有研究表明环境因素中PM2.5浓度与IMN的发病率呈正相关,在PM2.5大于70μg/m的地区,PM2.5浓度每增加10μg/m,IMN的患病率就会增加14%。多环芳烃(Polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)是PM2.5的重要有机组成成分,对肾脏具有毒性效应,易于累积在足细胞基底膜部位,在IMN患者的尿液中也已经检测到PAHs及PAHs的代谢物,因此PLa2R是PAHs潜在的毒性靶分子。为了探究PAHs与PLa2R胞外结构域的相互作用及其对肾小球足细胞上PLa2R的影响,本论文构建了人源PLa2R胞外CTLD单结构域的原核表达体系,我们首先探索了原核表达情况较好的CTLD1和CTLD2结构域同PAHs的相互作用。结合实验室现有条件,从美国环境保护署优先管控的9种PAHs中筛选出与CTLD单结构域相互作用最强的苯并[a]芘(Benzo[a]pyrene,Ba P)用于后续研究。随后探索细胞水平PAHs对于肾小球足细胞上PLa2R的影响及毒性效应。首先,将人源PLa2R(Ncbi:NM＿007366.5)基因密码子优化后连接到PET-28a载体上;将带有目的基因的重组质粒转化至表达宿主E.coli Shuffle T7低温诱导表达纯化,利用圆二色谱光谱分析CTLD1和CTLD2,两者圆二色光谱图均为β折叠结构,CTLD1和CTLD2变温圆二色分析,确定其TM值分别为52℃和67℃,荧光光谱化学稳定性分析表明CTLD1中点变性浓度为2.1×10mol/L Gdn HCl,CTLD2中点变性浓度为1.9×10mol/L Gdn HCl。其次,为探究环境因素-PAHs与潜在靶点PLa2R之间的相互作用,利用等温滴定量热法(Isothermal titration calorimetry,ITC)筛选出Ba P与CTLD2之间存在相互作用,结合实验室前期对于CTLD1与PAHs筛选的结果,进一步利用荧光光谱法分析CTLD1和CTLD2与Ba P相互作用机制,发现Ba P与CTLD1和CTLD2的K值分别为4.29×10L/mol和5.69×10L/mol;K值分别为1.39×10L/mol和4.54×10L/mol,n值分别为1.18和1.06,两者的结合位点约为1:1,CTLD1和CTLD2与Ba P孵育后两者的β折叠结构均有减少。最后,为探究细胞水平下Ba P对于IMN的毒性效应,成功分离原代小鼠淋巴细胞并模拟体内环境建立足细胞与淋巴细胞共同培养体系。流式细胞检测当足细胞暴露在1.0μg/m L Ba P时显示PLa2R与其抗体结合能力最强,表明Ba P在细胞层面影响了抗原与抗体之间的相互结合;炎症因子酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测发现当足细胞PLa2R与Ba P结合后,细胞因子表达水平上调。综上,论文研究实现了PLa2R部分胞外结构域在原核体系下的高效表达,通过荧光光谱法表征了与CTLD1和CTLD2蛋白相互作用的PAHs,同时从细胞水平探究了PAHs诱导的IMN的发病机制。

关键词：磷脂酶A2受体 CTLD结构域多环芳烃荧光光谱细胞共培养

免疫组织化学和免疫荧光染色在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体检测中的应用

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中国医学科学院学报 2015年第5期37卷 562-566页

作者：董鸿瑞王艳艳王国勤孙丽君程虹谌贻璞首都医科大学附属北京安贞医院肾内科北京100029

目的评估免疫组织化学和免疫荧光染色方法在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体（PLa2R）检测中的应用情况,寻找在肾组织中检测PLa2R准确、快捷的实验方法。方法对193例肾活检组织石蜡切片进行PLa2R免疫组织化学染色,抗原修复方法为高压锅... 详细信息

目的评估免疫组织化学和免疫荧光染色方法在肾活检组织石蜡切片磷脂酶A2受体（PLa2R）检测中的应用情况,寻找在肾组织中检测PLa2R准确、快捷的实验方法。方法对193例肾活检组织石蜡切片进行PLa2R免疫组织化学染色,抗原修复方法为高压锅热修复加胰蛋白酶双修复法,其中包括特发性膜性肾病（IMN）139例、膜型狼疮性肾炎15例、乙型肝炎病毒相关性膜性肾病8例、Ig A肾病18例和微小病变13例。将其中22例肾组织PLa2R阳性IMN患者的肾组织石蜡切片分别给予高压锅热修复、高压锅热修复加胰蛋白酶双修复、水浴热修复和水浴热修复加胰蛋白酶双修复等4种抗原修复法,然后行PLa2R免疫组织化学染色,对染色效果进行比较。再将其中15例肾组织PLa2R阳性IMN患者的肾组织石蜡切片分别给予水浴热修复加胰蛋白酶双修复、蛋白酶K修复、胃蛋白酶修复等3种抗原修复法,然后行PLa2R免疫荧光染色,对染色效果进行比较。结果 193例标本中,IMN患者PLa2R免疫组织化学染色结果阳性率为90.6%（126/139）;其他54例非IMN患者均为阴性。采用高压锅热修复加胰蛋白酶双修复法和水浴热修复加胰蛋白酶双修复时,22例患者的PLa2R免疫组织化学染色结果均为阳性;而采用高压锅热修复法或水浴热修复时,仅部分患者为阳性。采用水浴热修复加胰蛋白酶双修复、蛋白酶K修复和胃蛋白酶修复时,15例患者的PLa2R免疫荧光染色结果均为阳性,但水浴热修复加胰蛋白酶双修复为弥漫球性着色,荧光强度2＋～3＋,而蛋白酶K修复和胃蛋白酶修复为局灶节段性着色,荧光强度3＋～4＋。结论肾组织PLa2R免疫组织化学染色可有效鉴别IMN与继发性MN。行免疫组织化学染色和免疫荧光染色时,首选水浴热修复加胰蛋白酶双修复法。

关键词：肾组织磷脂酶A2受体免疫组织化学免疫荧光抗原修复

肾病综合征患者外周血单核细胞计数与血清抗磷脂酶A2受体抗体水平的相关性

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检验医学 2023年第7期38卷 647-652页

作者：唐晴琴乔龙威尹晶平张胜丰斌梁玉婷苏州大学附属第一医院临床检测中心江苏苏州215006 南京医科大学附属苏州市立医院生殖与遗传中心江苏苏州215000

目的探讨肾病综合征患者血清抗磷脂酶A2受体抗体(PLa2R-Ab)水平的影响因素及其临床意义。方法选取2019年8月—2021年9月苏州大学附属第一医院确诊为肾病综合征,且首次检测血清PLa2R-Ab阳性的患者108例,收集其临床资料和实验室检测结果(... 详细信息

目的探讨肾病综合征患者血清抗磷脂酶A2受体抗体(PLa2R-Ab)水平的影响因素及其临床意义。方法选取2019年8月—2021年9月苏州大学附属第一医院确诊为肾病综合征,且首次检测血清PLa2R-Ab阳性的患者108例,收集其临床资料和实验室检测结果(生化、免疫、血常规、血凝等51个项目)。采用线性回归分析评估各项指标与血清PLa2R-Ab水平的关系。根据血清PLa2R-Ab水平将患者分为低水平组(≤60 RU/mL)和高水平组(>60 RU/mL)。采用Logistic回归分析评估高水平PLa2R-Ab的影响因素。结果线性回归分析结果显示,PLa2R-Ab与肌酸激酶和纤维蛋白原呈正相关(β值分别为0.001、0.057),与血糖、天门冬氨酸氨基转移酶、血钾和单核细胞计数呈负相关(β值分别为-0.084、-0.007、-0.247、-0.662)。按单核细胞计数的四分位数将所有患者分为4组:≤0.35×10^(9)/L组(28例)、(0.36~0.45)×10^(9)/L组(26例)、(0.46~0.55)×10^(9)/L组(27例)和>0.55×10^(9)/L组(27例)。4组之间血清PLa2RAb水平差异均无统计学意义(P>0.05)。线性回归分析结果显示,调整混杂因素肌酸激酶、血糖、天门冬氨酸氨基转移酶、纤维蛋白原和血钾后,相对于单核细胞计数≤0.35×10^(9)/L组,其他3组lgPLa2R-Ab分别降低0.190、0.117、0.281(β值分别为-0.190、-0.117、-0.281,P=0.008),即血清lgPLa2R-Ab水平分别降低1.55、1.31、1.91 RU/mL。多元逐步Logistic回归分析结果显示,肌酸激酶可增加肾病综合征患者血清高水平PLa2R-Ab的发生风险[比值比(OR)=1.012,95%可信区间(CI)为1.003~1.021,P=0.007],单核细胞计数可降低肾病综合征患者血清高水平PLa2R-Ab的发生风险(OR=0.047,95%CI为0.004~0.602,P=0.019)。结论外周血单核细胞数量与血清PLa2R-Ab水平相关,提示单核细胞可能与膜性肾病的发病有关。

关键词：磷脂酶A2受体单核细胞计数肾病综合征膜性肾病

原发性膜性肾病患者血清25羟维生素D3与抗磷脂酶A2受体抗体滴度关系及联合检测意义探究

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临床肾脏病杂志 2023年第1期23卷 31-37页

作者：许静聂丽敏刘娜石家庄市第一医院肾内科石家庄050000

目的探讨原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy,PMN)患者血清25羟维生素D3[25-hydroxy vitamin D3,25-(OH)D3]、抗磷脂酶A2受体(phospholipase a2 receptor,PLa2R)抗体滴度预测治疗反应性的价值及临床意义。方法选取石家庄市第一医院肾内科100例PMN患者,检测血清25-(OH)D3水平,根据血清25-(OH)D3水平分为正常组、降低组、缺乏组,比较各组基线资料,分析血清25-(OH)D3与患者24 h尿蛋白、抗PLa2R抗体滴度的相关性,并比较不同治疗反应性患者血清25-(OH)D3水平、抗PLa2R抗体滴度,分析血清25-(OH)D3联合抗PLa2R抗体滴度预测治疗反应性的价值。结果缺乏组24 h尿蛋白[(8.07±1.81)g比(6.28±1.76)g、(4.95±1.10)g]、抗PLa2R抗体滴度[(30.25±5.76)RU/mL比(23.96±4.85)RU/mL、(18.43±4.05)RU/mL]高于降低组、正常组,降低组24 h尿蛋白[(6.28±1.76)g比(4.95±1.10)g]、抗PLa2R抗体滴度[(23.96±4.85)RU/mL比(18.43±4.05)RU/mL]高于正常组(P25-(OH)D3水平与24 h尿蛋白、抗PLa2R抗体滴度间存在负相关关系(P25-(OH)D3水平[(23.64±6.95)μg/L比(18.03±6.17)μg/L、(11.88±3.74)μg/L]高于部分缓解、未缓解患者,部分缓解患者血清25-(OH)D3水平[(18.03±6.17)μg/L比(11.88±3.74)μg/L]高于未缓解患者(Pa2R抗体滴度[(19.25±3.01)RU/mL比(24.86±3.25)RU/mL、(41.34±8.44)RU/mL]低于部分缓解、未缓解患者,部分缓解患者抗PLa2R抗体滴度[(24.86±3.25)RU/mL比(41.34±8.44)RU/mL]低于未缓解患者(P25-(OH)D3联合抗PLa2R抗体滴度预测PMN患者治疗反应性为完全缓解的曲线下面积为0.913(95%CI:0.855~0.970),敏感度为90.91%,特异度为79.10%。结论血清25-(OH)D3水平与PMN患者24 h尿蛋白、抗PLa2R抗体滴度呈负相关,且血清25-(OH)D3联合抗PLa2R抗体滴度在预测PMN患者治疗反应性方面具有一定价值。

关键词：原发性膜性肾病 25羟维生素D3 磷脂酶A2受体预测