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硝酸盐还原酶测定血清和尿中硝酸盐浓度

中华医学检验杂志 1997年第3期20卷 156-158页

作者：王成彬童红莉沈文梅田亚平汪德清蒋赐恩谷峰解放军总医院生化科

目的建立一氧化氮间接测定方法。方法硝酸盐还原酶还原硝酸盐（ＮＯ－３）至亚硝酸盐（ＮＯ－２）过程中所消耗ＮＡＤＰＨ量与ＮＯ－３浓度呈正比，用３４０ｎｍ处ＮＡＤＰＨ吸光度下降值推算ＮＯ－３的存在量。结果血清ＮＯ－３浓度为... 详细信息

目的建立一氧化氮间接测定方法。方法硝酸盐还原酶还原硝酸盐（ＮＯ－３）至亚硝酸盐（ＮＯ－２）过程中所消耗ＮＡＤＰＨ量与ＮＯ－３浓度呈正比，用３４０ｎｍ处ＮＡＤＰＨ吸光度下降值推算ＮＯ－３的存在量。结果血清ＮＯ－３浓度为５７．４９±３．５７μｍｏｌ／Ｌ时，批内变异系数（ＣＶ）＝６．２１％，批间ＣＶ＝８．７５％。５０μｍｏｌ／Ｌ和１００μｍｏｌ／ＬＫＮＯ３标准其回收率分别为９７．０２％和８７．１４％。１８例正常人血清和１５例正常人不定时尿中ＮＯ－３浓度分别为３６．６４±１５．９１和６３３．３５±２６４．７５μｍｏｌ／Ｌ。结论用该方法测定血清及尿中ＮＯ－３浓度简便快速，特异性高，干扰因素少，不需要进行去蛋白等预处理。

关键词：硝酸盐测定血清尿液硝酸盐还原酶

高产硝酸盐还原酶Staphylococcus simulans ZSJ6的复合诱变选育及其酶学性质研究

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生物技术通报 2023年第4期39卷 103-113页

作者：赵赛赛张小丹贾晓妍陶大炜刘可玉宁喜斌上海海洋大学食品学院上海201306 农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室(上海) 上海201306 国家淡水水产品加工技术研发中心(上海) 上海201306

硝酸盐还原酶可以将天然肉制品中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,避免了直接添加亚硝酸盐导致其含量骤增,降低产生亚硝胺的概率,对天然肉制品的品质和安全非常重要。以腊肠中筛选出的模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans D14)为出发菌株,探... 详细信息

硝酸盐还原酶可以将天然肉制品中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,避免了直接添加亚硝酸盐导致其含量骤增,降低产生亚硝胺的概率,对天然肉制品的品质和安全非常重要。以腊肠中筛选出的模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans D14)为出发菌株,探究了单一诱变条件包括紫外、微波、氯化锂诱变,以及紫外-微波-氯化锂联合诱变的两种复合诱变方式对菌株的不同影响,以期获得硝酸盐还原酶高产菌株,并通过摇瓶发酵初步探究其酶学性质,以期为天然肉制品的发酵剂提供菌株选择。确定了紫外、微波和氯化锂诱变的最佳条件:紫外照射60 s,微波辐照80 s,氯化锂浓度1.5%。筛选出诱变菌株Staphylococcus simulans ZSJ6,菌株酶活力可达603.29 U/mg蛋白,是出发菌株酶活力的3.59倍,且突变菌株连续传代8次后,其酶活力并无显著变化(P>0.05),表明其遗传稳定性较好。酶学性质结果显示,其最适作用温度为30℃,最适作用pH为7.5,且稳定性良好,在pH 7.5下孵育2 h,酶活力仍保留90%以上。Mg^(2+)、Ca^(2+)、K^+均能促进酶活力,其中Ca^(2+)对酶活力的促进作用最大,相对于空白组酶活力提升了1.63倍。Cu^(2+)、Fe^(2+)、Hg^(2+)、Mn^(2+)均能抑制酶活,其中Cu^(2+)和Hg^(2+)对酶活力的抑制作用最大,酶活力均被抑制到30%以下。研究结果为天然肉制品中硝酸盐的转化,以及生产初期使用亚硝酸盐带来的亚硝酸盐浓度过高等问题提供了解决思路,具有研究价值和应用潜力。

关键词：模仿葡萄球菌硝酸盐还原酶天然肉制品复合诱变酶学性质亚硝酸盐硝酸盐

大肠杆菌JM105中硝酸盐还原酶的制备及其性质(英文)

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生态环境 2007年第3期16卷 958-963页

作者：柯欣吴虹姚连生中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海200032

近年来,硝酸盐和亚硝酸盐的污染已引起普遍关注。目前,蔬菜和粮食的NO3-含量过高主要由于农药和化肥的使用、工业废水或生活污水灌溉等,食品类主要来自腌制食品和食品添加剂或防腐剂等。另外,向乳制品或食品中参碱、食盐、化肥、脏水、... 详细信息

近年来,硝酸盐和亚硝酸盐的污染已引起普遍关注。目前,蔬菜和粮食的NO3-含量过高主要由于农药和化肥的使用、工业废水或生活污水灌溉等,食品类主要来自腌制食品和食品添加剂或防腐剂等。另外,向乳制品或食品中参碱、食盐、化肥、脏水、碱性水等也是硝酸盐污染的来源之一。因此,迫切需要快速、简便、可用于现场的硝酸盐检测方法。这就需仰赖生物酶方法,而生物酶方法的关键是酶制剂的制备和检测方法的建立。本研究通过筛选、厌氧和硝酸盐诱导培养、超声波细胞破碎和差速离心提取等方法,从大肠杆菌(Escherichia coli)JM105细胞膜中制备了硝酸盐还原酶并对其性质进行了研究。结果表明:从大肠杆菌JM105中制得的酶制剂活力很高,且在酶过量的情况下可将NO3-完全转化为NO2-,在用磷酸缓冲液清洗并冷冻保藏过夜后不含有亚硝酸盐还原酶。在加入黄素单核苷酸辅酶(FMN)后,该酶的活力可提高64%,比活力达0.42U·mg-1蛋白。该酶十分稳定,在40℃下24h活力无影响,在浓度为1mmol·L-1的Cu2+、Fe3+、Ca2+、Zn2+、Mg2+和Mo6+存在下,其活力亦不改变。因此,该酶可用于测定食品、蔬菜和环境中硝酸盐的含量。

关键词：大肠杆菌 JM105 硝酸盐还原酶硝酸盐检测酶制剂

腊样芽胞杆菌DNF409中硝酸盐还原酶基因敲除的研究

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华中农业大学学报 2009年第1期28卷 43-47页

作者：刘卿梁运祥葛向阳华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

在腊样芽胞杆菌DNF409中,narGHJI基因负责编码呼吸过程中硝酸盐还原酶基因nar的α、β、γ、δ四个亚基。通过基因同源重组的方法,利用一段带有终止序列和Ω环的链霉素抗性片段,取代nar中的部分基因片段,实现硝酸盐还原酶的基因敲除,从... 详细信息

在腊样芽胞杆菌DNF409中,narGHJI基因负责编码呼吸过程中硝酸盐还原酶基因nar的α、β、γ、δ四个亚基。通过基因同源重组的方法,利用一段带有终止序列和Ω环的链霉素抗性片段,取代nar中的部分基因片段,实现硝酸盐还原酶的基因敲除,从而得到专一降解亚硝酸盐的突变体菌株,其硝酸盐还原酶的活性降低了80%。该菌与DNF409共同使用,可解除DNF409单独使用时亚硝酸盐严重积累的现象。

关键词： DNF409 硝酸盐还原酶基因敲除同源重组

如皋火腿中肉糖葡萄球菌RG-10产硝酸盐还原酶条件的优化

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食品科技 2014年第11期39卷 130-138页

作者：汪淼徐铮铮郭明亮吴满刚葛庆丰徐宝才韩青青于海扬州大学食品科学与工程学院扬州225127 江苏雨润肉类产业集团有限公司南京210041 南通昊特食品有限公司南通226011

硝酸盐还原酶可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐,对肉制品色泽和风味形成尤为重要。分析从如皋火腿中分离得到的4株葡萄球菌的产硝酸盐还原酶特性,研究菌株产硝酸盐还原酶的影响因素。以高产硝酸盐还原酶肉糖葡萄球菌RG-10为研究对象,通过正... 详细信息

硝酸盐还原酶可以将硝酸盐还原为亚硝酸盐,对肉制品色泽和风味形成尤为重要。分析从如皋火腿中分离得到的4株葡萄球菌的产硝酸盐还原酶特性,研究菌株产硝酸盐还原酶的影响因素。以高产硝酸盐还原酶肉糖葡萄球菌RG-10为研究对象,通过正交试验对其产硝酸盐还原酶条件进行优化,并对优化条件进行验证,各因素对肉糖葡萄球菌RG-10产硝酸盐还原酶的影响程度顺序为Na Cl浓度>温度>时间>KNO3浓度。确定肉糖葡萄球菌发酵产硝酸盐还原酶的最佳发酵条件为时间18 h、Na Cl浓度2.5%、KNO3浓度0.2%、温度42℃,此条件下的硝酸盐还原酶酶活为482 U/mg蛋白。

关键词：葡萄球菌菌浓度硝酸盐还原酶单因素试验正交试验设计

杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变藻株的分离和初步鉴定

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郑州大学学报（医学版） 2005年第2期40卷 245-247页

作者：贾岩龙侯卫红李杰刘红涛陈华燕王建民薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

目的:分离制备杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变藻株并进行初步鉴定。方法:①杜氏盐藻经乙基亚硝基脲(ENU)诱变后,利用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长实验,获得NR 缺陷型突变藻株。②用磺胺比色法... 详细信息

目的:分离制备杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变藻株并进行初步鉴定。方法:①杜氏盐藻经乙基亚硝基脲(ENU)诱变后,利用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长实验,获得NR 缺陷型突变藻株。②用磺胺比色法测定酶反应生成的亚硝酸盐(NO-2)的浓度,从而计算出盐藻NR活性。比较突变藻株与野生型杜氏盐藻NR活性,作出初步鉴定。结果与结论:共获得30株NR缺陷型突变藻株,共有6株NR 活性显著降低。杜氏盐藻NR缺陷型突变藻株成功建立。

关键词：杜氏盐藻硝酸盐还原酶突变株

杜氏盐藻硝酸盐还原酶5’端cDNA片段的快速扩增

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郑州大学学报（医学版） 2004年第1期39卷 20-22页

作者：谢华许培荣姜国忠吕玉民郭玉忠薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

目的 :根据已扩增的杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA的部分序列 ,利用 5’RACE的方法扩增其 5’上游未知片段。方法 :根据盐藻硝酸盐还原酶cDNA已知的部分序列 ,设计一条磷酸化反转录引物、2对特异性反向PCR引物。提取盐藻细胞mRNA ,利用 5’R... 详细信息

目的 :根据已扩增的杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA的部分序列 ,利用 5’RACE的方法扩增其 5’上游未知片段。方法 :根据盐藻硝酸盐还原酶cDNA已知的部分序列 ,设计一条磷酸化反转录引物、2对特异性反向PCR引物。提取盐藻细胞mRNA ,利用 5’RACE的方法反转录成cDNA ,然后利用PCR方法扩增 5’上游序列 ,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM1 0 9中 ,经筛选后测序 ,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析。结果 :在盐藻中所获得的cDNA片段 ,核苷酸长度为 4 31bp ,编码 1 4 3个氨基酸。推导的氨基酸序列与下列物种的硝酸盐还原酶进行同源性比较 :Dunaliellatertiolecta为 83% ,衣藻为 6 8% ,团藻为 6 6 % ,小球藻为 6 4 %。结论

关键词：杜氏盐藻硝酸盐还原酶 cDNA RACE

杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与序列分析

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郑州大学学报（医学版） 2007年第2期42卷 219-222页

作者：李杰刘红涛鲁照明李慎柯宋贤瑞薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州大学第一附属医院郑州450052

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其进行测序和序列分析。方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamHI、EcoRI、HindⅢ、PstI、SalⅠ及XbalⅠ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL... 详细信息

目的:克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其进行测序和序列分析。方法:提取杜氏盐藻基因组DNA,经过BamHI、EcoRI、HindⅢ、PstI、SalⅠ及XbalⅠ限制性内切酶分别酶切后,再与相应接头连接,分别构建盐藻步行基因组文库BL、EL、HL、PL、SL和XL。采用巢式(LA)-PCR方法,从上述步行基因组文库中扩增杜氏盐藻NR基因5′上游序列,克隆至pMD18-T,对酶切鉴定正确的克隆进行测序。结果:从HL里扩出约1200bp特异性片断,回收此片段并进行T载体克隆,对阳性克隆测序。该序列的3′端与已知NR基因cDNA5′端序列完全一致。该序列含有多个与转录调控有关的保守序列(如CAAT-box和GAGA-box),含有与EBP、EFII、NF-E1、LV等转录因子以及广谱激活剂Oct-1结合位点相似的核苷酸序列。结论:采用LA-PCR基因组步行方法,从已知cDNA周围未知启动子或其他调控区域中克隆得到的NR基因的5′上游区序列,可能是一种新的杜氏盐藻启动子区序列。

关键词：杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因克隆

杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段的克隆与分析

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郑州大学学报（医学版） 2004年第1期39卷 6-8页

作者：谢华姜国忠吕玉民牛向丽许培荣王建民薛乐勋郑州大学细胞生物学研究室郑州450052

目的 :获得杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段。方法 :根据Dunaliellatertiolecta、衣藻、团藻等生物硝酸盐还原酶 (nitratereductase ,NR)高度保守序列EGWWFKP、WNVMGMM设计一对简并引物 ,以含硝酸盐培养基培养的的盐藻cDNA为模板 ,进行PC... 详细信息

目的 :获得杜氏盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段。方法 :根据Dunaliellatertiolecta、衣藻、团藻等生物硝酸盐还原酶 (nitratereductase ,NR)高度保守序列EGWWFKP、WNVMGMM设计一对简并引物 ,以含硝酸盐培养基培养的的盐藻cDNA为模板 ,进行PCR扩增 ,产物克隆至T载体后转化大肠杆菌JM1 0 9,经筛选后测序 ,将测序结果推导成氨基酸序列 ,并与Dunaliellatertiolecta、团藻、衣藻、小球藻等进行同源性分析。结果 :在盐藻中所获得的cDNA片段 ,核苷酸长度为 381bp ,编码 1 2 7个氨基酸。推导的氨基酸序列与下列物种的硝酸盐还原酶进行同源性比较 :Dunaliellatertiolecta为 88.2 %同源 ,团藻为 78% ,衣藻为 6 7% ,小球藻为 5 9%。结论 :所克隆的序列为盐藻硝酸盐还原酶cDNA片段。

关键词：杜氏盐藻硝酸盐还原酶 cDNA 简并引物