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环境与职业医学 2023年第11期40卷 1257-1263页

作者：吴静左翠云柯妍妍汪洁许雅萍杜薇石怡敏庄云扬伊雪福建医科大学公共卫生学院福建福州350122 厦门医学院基础医学部福建厦门361023 厦门医学院附属第二医院呼吸科福建厦门361021 厦门医学院附属第二医院胸心外科福建厦门361021 厦门医学院呼吸疾病研究所福建厦门361023

破骨细胞刺激性跨膜蛋白(OC-STAMP)参与二氧化硅(SiO_(2))暴露引起矽肺纤维化,其通过诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞铁死亡从而参与矽肺纤维化的作用及相关机制尚不明确。[目的]探讨SiO_(2)暴露下OC-STAMP调控肺泡Ⅱ型上皮细胞铁死亡参与大鼠矽... 详细信息

破骨细胞刺激性跨膜蛋白(OC-STAMP)参与二氧化硅(SiO_(2))暴露引起矽肺纤维化,其通过诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞铁死亡从而参与矽肺纤维化的作用及相关机制尚不明确。[目的]探讨SiO_(2)暴露下OC-STAMP调控肺泡Ⅱ型上皮细胞铁死亡参与大鼠矽肺纤维化的作用及可能机制。[方法]20只SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为2组,每组10只,分别为对照组(Sham组)、SiO_(2)组。SiO_(2)组大鼠通过气管非暴露法一次性给予1 mL 50 mg·L^(-1)的SiO_(2)混悬液建立矽肺动物模型,Sham组大鼠采用同样的方法给予1 mL0.9%氯化钠溶液,8周后处死大鼠。取左下肺固定于戊二醛或多聚甲醛,用透射电镜观察线粒体超微结构;用HE染色、Masson染色、VG染色及普鲁士蓝染色显示肺组织结构变化及铁沉积状况。通过免疫组化和免疫荧光评价OC-STAMP表达水平和肺纤维化程度。采用实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织OCSTAMP表达水平及验证OC-STAMP的转染效果。培养MLE-12细胞,通过转染OC-STAMP质粒或OC-STAMP小干扰RNA(siRNA)构建过表达(OCS组)和抑制表达(SI-OC组)模型。采用Western blotting法检测肺组织及MLE-12中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)等蛋白的相对表达量。[结果]SiO_(2)暴露8周后,HE、Masson和VG染色结果显示造模成功;组织免疫荧光结果显示,OC-STAMP与ATP结合盒亚家族A成员3(ABCA3)共定位于肺泡Ⅱ型上皮中;免疫组化结果显示,SiO_(2)组OC-STAMP、Ⅰ型胶原表达水平与Sham组相比升高(P性棕黄色颗粒;经透射电镜观察,Sham组线粒体结构正常,SiO_(2)组线粒体普遍肿胀,线粒体嵴溶解、消失;肺组织免疫印迹结果显示,在SiO_(2)组,SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低(P蛋白表达水平增加(P细胞中,与Sham组相比,OCS组SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低(P蛋白表达,从而促进SiO_(2)暴露导致的肺纤维化。

关键词：矽肺破骨细胞刺激性跨膜蛋白铁死亡纤维化

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过表达Ocstamp促进肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老的机制

过表达Ocstamp促进肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老的机制

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作者：李田华北理工大学

学位级别：硕士

目的研究过表达破骨细胞刺激性跨膜蛋白(Osteoclast stimulatory transmembrane protein,OC-STAMP)驱动肺泡上皮II型细胞(alveolar type II epithelial cells,AT2)MLE-12细胞衰老的机制。方法使用HOPE-MED8050动式染尘构建大鼠矽肺模型,并予以4-苯基丁酸(4-Phenylbutyric,4-PBA)治疗处理。体外培养MLE-12,分别给予Ocstamp过表达质粒、Si O、4-PBA等试剂处理。免疫印迹法及实时荧光定量PCR法检测大鼠肺内OC-STAMP表达,免疫印迹法检测大鼠肺内细胞衰老相关蛋白表达情况。免疫荧光染色法和免疫印迹法检测细胞衰老相关蛋白、上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)相关蛋白表达水平。β-半乳糖苷酶染色(β-galactosidase staining,β-gal)检测细胞衰老情况。免疫共沉淀法检测OC-STAMP与人非肌肉肌球蛋白重链IIA(myosin heavy chain 9,MYH9)是否具有相互作用。结果1在矽肺模型大鼠正常肺泡区域、巨噬细胞肺泡炎区域和细胞纤维性矽结节区域,ABCA3阳性细胞百分比在巨噬细胞肺泡炎区域中显著上调(P细胞肺泡炎区域和细胞纤维性矽结节区域VG染色面积百分比、PCNA和p21阳性细胞百分比逐渐上调(P细胞肺泡炎区域,巨噬细胞PCNA阳性百分比显著高于AT2细胞,而AT2细胞p21阳性细胞百分比显著高于巨噬细胞(P蛋白水平和m RNA表达水平在矽肺大鼠肺内上调(P细胞衰老、ER stress相关蛋白表达下调(P性,EMT、细胞衰老、ER stress相关信号蛋白表达水平上调(P细胞衰老相关蛋白表达水平下调(P细胞EMT、ER stress及细胞衰老。图28幅;表25个;参134篇

关键词：矽肺肺泡上皮Ⅱ型细胞破骨细胞刺激性跨膜蛋白细胞衰老

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高通量转录组测序研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响

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中国煤炭工业医学杂志 2023年第1期26卷 1-6页

作者：李田杨欣雨范宇杭杨宏昊杨方李世峰刘和亮徐洪华北理工大学基础医学院河北省唐山市063000 华北理工大学公共卫生学院河北省器官纤维化重点实验室

目的研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响。方法构建稳定过表达Ocstamp和空载对照(NC)的MLE-12细胞并进行高通量转录组测序和生物信息学分析。蛋白免疫印迹法检测p-毛细血管扩张性共济失调突变激酶(ATM)、p-毛细血管扩张性... 详细信息

目的研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响。方法构建稳定过表达Ocstamp和空载对照(NC)的MLE-12细胞并进行高通量转录组测序和生物信息学分析。蛋白免疫印迹法检测p-毛细血管扩张性共济失调突变激酶(ATM)、p-毛细血管扩张性共济失调(ATR)、p-p53、p21、p16、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、Ⅺ型胶原蛋白(Col Ⅺ)、己糖激酶2(HK2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸果糖激酶1(PFK1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表达,β半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老。结果高通量转录组测序结果显示,与NC组相比,过表达Ocstamp的MLE-12细胞中有2 794个差异基因,其中GO分析和KEGG分析显示衰老信号、糖酵解信号和胶原沉积信号出现了异常激活,蛋白免疫印迹结果显示,与NC组相比较,p-ATM、p-ATR、p-p53、p21、p16、Col Ⅰ、IColⅢ、Col Ⅺ、HK2、LDHA、PFK1、PKM2在Ocstamp过表达组中均上调(P性。结论过表达Ocstamp能介导MLE-12细胞衰老信号、糖酵解信号和胶原沉积等异常活化。

关键词：高通量转录组测序破骨细胞刺激性跨膜蛋白肺泡Ⅱ型上皮细胞

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高通量转录组测序研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响

高通量转录组测序研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响

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2022年度中国职业安全健康协会科技大会

作者：李田杨欣雨范宇杭杨宏昊杨方刘和亮徐洪华北理工大学基础医学院河北省器官纤维化重点实验室

[目的]研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响。[方法]构建稳定过表达Ocstamp和空载对照(NC)的MLE-12细胞并进行高通量转录组测序和生物信息学分析。蛋白免疫印迹法检测p-毛细血管扩张性共济失调突变激酶(ATM)、p-毛细血管扩张... 详细信息

[目的]研究过表达Ocstamp对MLE-12细胞基因表达的影响。[方法]构建稳定过表达Ocstamp和空载对照(NC)的MLE-12细胞并进行高通量转录组测序和生物信息学分析。蛋白免疫印迹法检测p-毛细血管扩张性共济失调突变激酶(ATM)、p-毛细血管扩张性共济失调(ATR)、p-p53、p21、p16、I型胶原蛋白(Col I)、III型胶原蛋白(Col III)、XI型胶原蛋白(Col XI)、己糖激酶2(HK2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、磷酸果糖激酶1(PFK1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)的表达,β半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老。[结果]高通量转录组测序结果显示,与NC组相比,过表达Ocstamp的MLE-12细胞中有2794个差异基因,其中GO分析和KEGG分析显示衰老信号、糖酵解信号和胶原沉积信号出现了异常激活,蛋白免疫印迹结果显示,与NC组相比较,p-ATM、p-ATR、p-p53、p21、p16、Col I、ICol III、Col XI、HK2、LDHA、PFK1、PKM2在Ocstamp过表达组中均上调,且β半乳糖苷酶染色阳性。[结论]过表达Ocstamp能介导MLE-12细胞衰老信号、糖酵解信号活和胶原沉积等异常活化。

关键词：高通量转录组测序破骨细胞刺激性跨膜蛋白肺泡Ⅱ型上皮细胞基因

来源： cnki会议评论

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