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中国植物病理学会2024年学术年会

作者：谢雨絮高文凯胡博宁孙修远张猛郭雅双河南农业大学植物保护学院

间座壳属(Diaporthe Nitschke)真菌是重要的植物病原菌、内生菌和腐生菌,在世界范围内均有分布且寄主广泛,可危害粮食、油料、果树及园艺植物等多种经济作物,造成严重的经济损失。其中,榆树间座壳菌(Diaporthe eres)是间座壳属模式种,... 详细信息

间座壳属(Diaporthe Nitschke)真菌是重要的植物病原菌、内生菌和腐生菌,在世界范围内均有分布且寄主广泛,可危害粮食、油料、果树及园艺植物等多种经济作物,造成严重的经济损失。其中,榆树间座壳菌(Diaporthe eres)是间座壳属模式种,更是中国境内的优势种,在我国分布广泛。真菌病毒是一类可以侵染各大类群的真菌和卵菌并能在其体内复制的病毒,具有潜在的生防价值。但目前间座壳菌中已报道的真菌病毒种类较少,对于真菌病毒的研究及资源挖掘较为匮乏。本研究对实验室前期分离保存的93株榆树间座壳(***)菌株进行高通量宏病毒组测序,结合检测验证分析榆树间座壳菌病毒种类多样性。结果显示这些菌株的混合样品中存在有9个科(或目)的19种病毒,+ssRNA病毒10种,dsRNA病毒3种,-ssRNA病毒5种和ssDNA病毒1种,其中有10种是新发现的病毒。基于序列比对和系统发育分析发现,这些病毒分别隶属于葡萄孢欧尔密病毒科(Botourmiaviridae)、布尼亚病毒目(Bunyavirales)、类双生病毒科(Genomoviridae)、低毒病毒科(Hypoviridae)、线粒体病毒科(Mitoviridae)、单分子负链RNA病毒目(Mononegavirales)、裸露RNA病毒科(Narnaviridae)、双分体病毒科(Partitiviridae)和四分体病毒科(Quadriviridae)。本研究利用宏转录组技术明确了榆树间座壳菌中的真菌病毒多样性,丰富了间座壳菌中真菌病毒资源,为进一步筛选具有弱毒特性的生防菌株提供材料。

关键词：间座壳属真菌真菌病毒宏转录组真菌病毒多样性

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烟草多主棒孢霉中携带真菌病毒的种类鉴定及特征分析

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烟草科技 2024年第7期57卷 48-56页

作者：杨萌萌胡利伟梁太波奚家勤黄磊李玉娥王桂瑶张超群管成伟宋纪真中国烟草总公司郑州烟草研究院郑州450001 广东中烟工业有限责任公司广州市510145 吉林烟草工业有限责任公司长春市130022 江西省烟草科学研究所南昌市330025

为发掘鉴定多主棒孢霉中的真菌病毒资源,利用高通量测序和宏病毒组分析技术,对来源于烟叶的11株多主棒孢霉菌株进行真菌病毒的发掘和鉴定。基于获得的病毒序列信息进行结构蛋白预测和系统发育分析,并明确了不同病毒在试验菌株中的侵染... 详细信息

为发掘鉴定多主棒孢霉中的真菌病毒资源,利用高通量测序和宏病毒组分析技术,对来源于烟叶的11株多主棒孢霉菌株进行真菌病毒的发掘和鉴定。基于获得的病毒序列信息进行结构蛋白预测和系统发育分析,并明确了不同病毒在试验菌株中的侵染分布情况。结果表明:①菌株中共携带有5种真菌病毒,包括3种双链RNA(dsRNA)病毒、1种正义单链RNA(+ssRNA)病毒和1种负义单链RNA(-ssRNA)病毒。②蛋白比对和系统发育分析表明,这5种病毒中有2种属于整形病毒科(Totiviridae),其余3种分别属于双分体病毒科(Partitiviridae)、裸露RNA病毒科(Narnaviridae)和真菌蛇形病毒科(Aspiviridae)。③RT-PCR检测结果表明,这些菌株的带毒率为64%,并且2个菌株存在病毒的复合侵染。

关键词：真菌病毒多主棒孢霉宏病毒组真菌病毒多样性

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玉米纹枯病菌中病毒多样性及新病毒鉴定

玉米纹枯病菌中病毒多样性及新病毒鉴定

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作者：丁金凤华中农业大学

学位级别：硕士

纹枯病菌（Rhizoctonia solani）是重要的死体营养型病原真菌,寄主范围广泛,可以侵染禾本科作物玉米、水稻、小麦等三大农作物,引起严重经济损失。由该病原菌引起的纹枯病是玉米上的重要真菌病害之一,在玉米种植区域频发,影响产量和品... 详细信息

纹枯病菌（Rhizoctonia solani）是重要的死体营养型病原真菌,寄主范围广泛,可以侵染禾本科作物玉米、水稻、小麦等三大农作物,引起严重经济损失。由该病原菌引起的纹枯病是玉米上的重要真菌病害之一,在玉米种植区域频发,影响产量和品质。真菌病毒（mycovirus）是侵染真菌的一类病毒,在各类真菌中普遍存在,已报道的多数真菌病毒为潜伏侵染,但部分真菌病毒可以引起寄主的致病力衰退等低毒特性,具有生物防治潜力。目前,玉米纹枯病菌中的真菌病毒多样性还未曾被报道,本研究主要对玉米纹枯菌中的真菌病毒种类和多样性进行了分析鉴定,发现了新的真菌病毒,研究结果如下:玉米纹枯病菌中真菌病毒种类丰富。从湖北省恩施州建始县和宜昌长阳县两地发病玉米上共分离纯化纹枯菌菌株321株,进行宏病毒组测序,获得60 G数据;通过拼接及序列分析,获得了366条1000 bp以上与已知病毒相关的contig序列,推定这些序列为纹枯病菌中真菌病毒基因组部分序列。根据基因组的类型划分,正单链RNA（+ss RNA）病毒有202个,占比55.2%;单股负义RNA（-ss RNA）病毒有7个,占比1.9%;双链RNA（ds RNA）病毒有137个,占比37.4%;未分类的RNA病毒有20个,占比5.4%;没有发现DNA病毒;在病毒科水平上进行划分,328个真菌病毒序列被暂时分类在17个病毒科,占已明确真菌病毒病毒科的17/26,有38个真菌病毒分类地位未明确;其中隶属于单股负义真菌病毒科（Mymonaviridae）、呼肠孤病毒科（Reoviridae）、全病毒科（Totiviridae）、番茄丛矮病毒科（Tombusviridae）的真菌病毒首次在纹枯病菌中被发现。对纹枯菌菌株GD92中真菌病毒组进行了鉴定,发现该菌株被8种真菌病毒复合侵染,其中含有三个具有潜在环状RNA基因组结构的真菌病毒。基于宏病毒组数据分析及RT-PCR检测,发现菌株GD92中有8条与病毒相关的contig序列,所对应真菌病毒分别命名为纹枯病菌反义RNA病毒（Rhizoctonia solani ambivirus 3,RSAV3）、RSAV4、RSAV9、纹枯病菌双分病毒16（Rs PV16）、纹枯病菌欧尔密病毒6（Rs OLV6）、纹枯病菌减病毒3（Rs HV3）、纹枯菌内源病毒1-22（Rs EV1-22）和纹枯病菌弹状病毒（Rs Rh V2）。除了RSAV3、RSAV4和RSAV9的分类地位未确定,其他病毒分别隶属于双病病毒科、葡萄孢欧尔密病毒科、减病毒科、内源病毒科及弹状病毒科等5个病毒科,表明菌株GD92中真菌病毒的种类复杂、丰富。对RSAV3和RSAV4序列进行分析,发现这两个真菌病毒的正反义RNA链分别含有一个完整的、反向的开放阅读框（ORF1和ORF2）,推定ORF1编码Rd Rp,但与已知Rs AV1有低同源,一致性分别为33.53%和25.31%,ORF2编码蛋白在数据库中无同源蛋白且不含任何已知保守结构域,推定编码假定蛋白;基于RSAV3和RSAV4序列设计反向引物进行RT-PCR分析,初步证实该两个真菌病毒具有环状RNA基因组,基因组全长分别含有4848和4806个核苷酸,RSAV3和RSAV4非编码区域核苷酸序列相对保守,二者编码Rd Rp和假定蛋白比对分析,其同一性分别为54%和34%。通过原生质体再生技术,获得了GD92-7菌株,GD92菌株致病力强于菌株GD92-7。本次研究分析了采自湖北恩施州建始县和宜昌市长阳县的玉米纹枯病菌中的真菌病毒多样性,并对单个GD92菌株中含有的真菌病毒种类进行了验证,获得了真菌病毒RSAV3和RSAV4的基因组全长。

关键词：玉米纹枯病立枯丝核菌真菌病毒真菌病毒多样性环状RNA病毒

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梨黑斑病病原菌致病力分化分析与链格孢病毒的鉴定

梨黑斑病病原菌致病力分化分析与链格孢病毒的鉴定

引用

作者：王文青华中农业大学

学位级别：硕士

梨黑斑病是我国南方梨产区的重要病害,本研究室前期研究证实导致梨黑斑病的病原菌优势种为细极链格孢(Alternaria tenuissima)和链格孢(***)。本研究进一步建立该病原菌的致病力室内快速测定方法,分析优势种群致病力分化状况,并通过高... 详细信息

梨黑斑病是我国南方梨产区的重要病害,本研究室前期研究证实导致梨黑斑病的病原菌优势种为细极链格孢(Alternaria tenuissima)和链格孢(***)。本研究进一步建立该病原菌的致病力室内快速测定方法,分析优势种群致病力分化状况,并通过高通量测序分析链格孢病毒种类多样性,对新型病毒进行系统鉴定。取得的主要研究结果如下:1.梨黑斑病菌致病力室内测定方法的建立。以代表菌株HB-36(***)、CQ-31(***)的菌丝块和分生孢子悬浮液为接种体,以离体翠冠叶片、枝条和黄冠梨果实为接种材料,比较不同接种方式的致病力测定效果。叶片接种显示,相同伤口处理下菌丝块接种的测定效果较接种分生孢子悬浮液稳定,且病斑扩展速度更快;果实接种显示,除6针处理后接种CQ-31菌株的菌丝块产生的病斑大于接种分生孢子液外,其余处理分生孢子液接种产生的病斑则均大于菌丝块;枝条接种菌丝块均未形成病斑。综合比较表明,以叶片经针刺3针处理后接种菌丝块的方法,更适用于梨黑斑病菌致病力的室内快速测定。2.梨黑斑病病原优势种群致病力的分化分析。采用建立的梨黑斑病菌致病力室内测定方法,对来源于重庆、湖北、四川、安徽、甘肃、陕西、江西、云南、山东共9个省市的146个菌株(其中细极链格孢72个、链格孢74个)进行致病力测定,并通过SAS软件对病斑平均直径进行聚类分析。结果显示,不同地域、梨种质和组织来源的菌株之间,其致病力类型与分布比例存在差异。其中,强致病力菌株17个、中等致病力菌株110个、弱致病力菌株19个,分别占供试菌株的12%、75%、13%。3.链格孢病毒种类多样性分析与新型病毒鉴定。利用高通量测序技术对来源于10个梨产区的6种链格孢的78个菌株进行宏病毒组分析,共发现24种病毒,其中属于+ss RNA病毒11种,ds RNA病毒8种,-ss RNA病毒5种。基于依赖RNA的RNA聚合酶(Rd Rp)序列系统发育分析明确了13种病毒的分类地位,分属于6个已知病毒科(Botourmiaviridae、Narnaviridae、Deltaflexiviridae、Partitiviridae、Chrysoviridae和Mymonaviridae)。从细极链格孢菌株HB-15中鉴定到2种-ss RNA病毒,分别是Alternaria sclerotimonavirus 1(ASV1)和Alternaria negative-stranded RNA virus 1(ANSRV1)。ASV1的基因组全长为9164 nt,包含5个线性排列的开放阅读框(ORFsⅠ-Ⅴ),其中ORFⅡ编码病毒的核衣壳蛋白(N),ORFⅣ编码病毒的复制酶(Rd Rp),并且经保守结构域预测,该蛋白具有一个和m RNA帽子结构相关的结构域。基于Rd Rp序列系统发育分析发现其与Mymonaviridae的Sclerotimonavirus的成员聚为一支。经透射电镜观察可看到线性的病毒粒子,直径约15 nm,长度约400 nm-1500 nm。从细极链格孢菌株SC-8中发现+ss RNA病毒,暂命名为Alternaria tenuissima deltaflexivirus 1(At DFV1)。其基因组全长8434 nt,包含4个开放阅读框(ORFsⅠ-Ⅳ),其中ORFⅠ编码聚合酶(Rd Rp),且有甲基转移酶保守结构域。对Rd Rp序列系统发育分析发现该病毒属于Deltaflexiviridae。通过比较脱毒与带毒菌株的菌落形态,发现无明显差异,但带毒菌株的致病力低且菌丝尖端弯曲。透射电镜观察发现球形的病毒粒子,直径约为15 nm。本研究明确了我国梨黑斑病菌两个优势种群的致病力分化状况及6种链格孢携带病毒的种类多样性,同时对发现的两种新真菌病毒系统鉴定,为梨黑斑病的研究和防控提供了相关技术方法和新的信息。

关键词：梨黑斑病链格孢致病力分化真菌病毒多样性

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