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基于真空渗入法的转基因大白菜植株的获得

西北农业学报 2017年第2期26卷 248-254页

作者：赵静吴俊清李庆飞张静张鲁刚西北农林科技大学园艺学院农业部西北地区园艺作物生物学与种质资源创新重点实验室陕西杨凌712100 山西农业大学园艺学院山西太古030800

采用真空渗入法,将萝卜VPE1基因的干扰载体pRNAi-RsVPE1转入大白菜中,共收获2 414粒种子,在质量浓度为30mg/L的卡那霉素筛选下获得抗性株297株,其中9株经PCR检测呈阳性,转化率为0.37%。Real-time PCR检测结果表明,pRNAi-RsVPE1的转入导... 详细信息

采用真空渗入法,将萝卜VPE1基因的干扰载体pRNAi-RsVPE1转入大白菜中,共收获2 414粒种子,在质量浓度为30mg/L的卡那霉素筛选下获得抗性株297株,其中9株经PCR检测呈阳性,转化率为0.37%。Real-time PCR检测结果表明,pRNAi-RsVPE1的转入导致转基因大白菜叶片中同源的BraVPE在RNA水平上的表达量下降,验证了转基因植株的可靠性,为进一步深入研究BraVPE基因功能奠定了基础。

关键词：真空渗入法大白菜 BraVPE转基因 RNAi载体

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大白菜和油菜真空渗入遗传转化法初报

西北农业大学学报 1998年第4期26卷 1-4页

作者：张广辉巩振辉薛万新陈启林西北农业大学园艺系

在携带ＣａＭＶＣａｂｂＢ－ＪＩ株系基因Ⅵ的根癌农杆菌菌种ＧＶ３１０１的介导下，对大白菜、油菜幼苗生理状态、真空渗入时间及不同处理部位和叶面造伤等的处理与遗传转化效果的关系进行了比较研究。结果表明，经自然春化后，大白菜... 详细信息

在携带ＣａＭＶＣａｂｂＢ－ＪＩ株系基因Ⅵ的根癌农杆菌菌种ＧＶ３１０１的介导下，对大白菜、油菜幼苗生理状态、真空渗入时间及不同处理部位和叶面造伤等的处理与遗传转化效果的关系进行了比较研究。结果表明，经自然春化后，大白菜、白菜型油菜植株长至４～５片叶，甘蓝型油菜、芥菜型油菜植株长至７～９片叶，花薹已抽出时，为真空渗入最适苗态。大白菜自然春化植株移栽缓苗（３ｄ），或者黑暗处理（８ｈ）均可显著提高其转化率。在吸力为１４．４ｍ３／ｈ的真空泵下处理１ｍｉｎ后，迅速打开真空泵气阀升压变常压，再关闭阀门抽真空３０ｓ的转化效果较好。仅处理叶片转化率可高达１１．２０％，叶面造伤处理对转化率没有明显影响。

关键词：遗传转化真空渗入法大白菜油菜组织培养

影响不结球白菜真空渗入转基因频率的几个因素

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华北农学报 2003年第4期18卷 35-38页

作者：曹传增刘凡赵泓蔡民华徐恒戬首都师范大学生物系北京100037 北京蔬菜研究中心北京100089 山东农业大学园艺学院山东泰安271018

采用不同发育阶段的植物材料及不同菌株,将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)和蜘蛛杀虫肽(SIP)基因双价转入49菜心,以除草剂抗性株出现频率,以及目的基因的PCR鉴定结果为依据,对影响不结球白菜—49菜心真空渗入转化率的一些因素进行了... 详细信息

采用不同发育阶段的植物材料及不同菌株,将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)和蜘蛛杀虫肽(SIP)基因双价转入49菜心,以除草剂抗性株出现频率,以及目的基因的PCR鉴定结果为依据,对影响不结球白菜—49菜心真空渗入转化率的一些因素进行了探索。结果表明植株生长阶段和真空渗入处理时间、所用菌株类型均对转化率有影响,其中以开花初期的植株,利用胭脂碱型农杆菌介导,真空渗入5min的处理方法转化效率最高。

关键词：不结球白菜真空渗入法转基因生产频率影响因素

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植物遗传转化的替代方法及研究进展

生物技术通报 2011年第7期27卷 31-36,45页

作者：李君李岩刘德虎中国农业科学院生物技术研究所北京100081 河北师范大学生命科学学院石家庄050016

农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法。由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率... 详细信息

农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法。由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率也随之提高。对这些可替代的遗传转化方法进行概述,并简要介绍各种方法的优缺点及其在农作物转化中的应用情况。

关键词：植物遗传转化方法花粉管通道法茎尖转化法叶绿体转化法碳化硅纤维介导法超声波辅助的农杆菌转化法真空渗入法藻酸钙微珠介导法

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白菜抗虫转基因研究

白菜抗虫转基因研究

作者：张军杰四川农业大学

学位级别：硕士

以具有广谱抗性的马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)为目的基因，利用限制性内切酶，去除质粒载体p中PinⅡ基因的内含子部分，并转入农杆菌株C58用于植物转化。同时将具有高度专—抗性的蜘蛛杀虫蛋白(SIP)基因插入带有GUS、bar基因的p植... 详细信息

以具有广谱抗性的马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)为目的基因，利用限制性内切酶，去除质粒载体p中PinⅡ基因的内含子部分，并转入农杆菌株C58用于植物转化。同时将具有高度专—抗性的蜘蛛杀虫蛋白(SIP)基因插入带有GUS、bar基因的p植物表达载体中，经限制性酶切，证明载体构建正确。以13种结球白菜的带柄子叶为外植体，在含BA 2mg／L、NAA 1mg／L、AgNO、3mg／L的MS培养基上筛选出再生率较高的北京80号、小杂66等三种基因型。然后以这三种基因型为转化材料，利用胭脂碱型根癌农杆菌C58(Ti质粒含有bar、PinⅡ基因)感染带柄子叶外植体，获得5个转基因植株。经PCR、PCR-Southern杂交以及植物基因组Southern杂交证实目的基因已经整合入植物基因组中。在进行基因转化的同时，确定了适合“北京80号”的Basta初始筛选浓度为4mg／L，提出了以抗性株真叶再生为基础消除抗性株嵌合体的方法。最后进行了转化株的抗虫性鉴定，主要表现为抑虫效应。通过真空渗入法转化小白菜，从四批筛选的T代种子中获得41株抗Basta植株。经氯酚红法、PCR、PCR-Southern以及植物基因组Southern杂交证实目的基因已整合到小白菜基因组中去。通过比较材料处理时开花与否的转化率，知道材料是否开花对转化率基本没有影响，但是结实部位下部要比上部高0.110‰，是上部转化率的三倍，结果提示，材料处理时的花蕾是农杆菌转化的主要受体。

关键词：结球白菜不结球白菜转基因叶盘法真空渗入法农杆菌抗虫 Pin Ⅱ

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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油菜基因转移适宜苗态建成方法研究

西北农业大学学报 1999年第3期27卷 6-10页

作者：薛万新巩振辉阿布都艾尼张广辉西北农业大学园艺系

油菜种子经２～５℃低温处理及冬、春两季１０个播期试验，研究了采用真空渗入法对油菜进行ＣａＭＶＣＡＢＢ－ＢＪＩ和Ｂａｒｉ－Ⅰ株系基因Ⅵ转移时适宜植株形态的建成方法。结果表明，芥菜型油菜低温处理１０，２０，３０ｄ，均可明... 详细信息

油菜种子经２～５℃低温处理及冬、春两季１０个播期试验，研究了采用真空渗入法对油菜进行ＣａＭＶＣＡＢＢ－ＢＪＩ和Ｂａｒｉ－Ⅰ株系基因Ⅵ转移时适宜植株形态的建成方法。结果表明，芥菜型油菜低温处理１０，２０，３０ｄ，均可明显促进抽薹，春季３月１８日播种或冬季１０月１１日播种最适于形成理想的转化态植株。甘蓝型及白菜型油菜种子经低温处理不能通过春化。甘蓝型油菜冬季１０月２６日播种，白菜型油菜冬季１０月１１日播种或春季３月１２日播种，易形成适于转移的植株形态。

关键词：低温播期油菜春化真空渗入法基因转移育种

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芥菜真空渗入遗传转化体系适宜苗态的建成

西北农业学报 2000年第4期9卷 22-25页

作者：金万梅巩振辉西北农林科技大学园艺学院陕西杨陵712100

通过 0～ 4℃低温处理芥菜种子和春秋 7个播期试验 ,研究了根癌农杆菌菌株 GV31 0 1 (携带 Ca MVCABB-BJI和 Bari-1基因 VI)和 LBA4 40 4 (携带 GUS基因 )转化芥菜的真空渗入高效遗传转化体系的适宜苗态建成方法。芥菜种子经 50℃温烫 1... 详细信息

通过 0～ 4℃低温处理芥菜种子和春秋 7个播期试验 ,研究了根癌农杆菌菌株 GV31 0 1 (携带 Ca MVCABB-BJI和 Bari-1基因 VI)和 LBA4 40 4 (携带 GUS基因 )转化芥菜的真空渗入高效遗传转化体系的适宜苗态建成方法。芥菜种子经 50℃温烫 1 0 min、2 3℃浸种 2～ 6h、催芽 2 0 h,或 50℃温烫 1 0 min、2 3℃浸种5h、不催芽 ,然后置 0～ 4℃低温下处理 2 5d,种植大田 ,在长日照条件下易形成适宜真空渗入遗传转化苗态 ;圆叶芥 9月 2 0日、9月 30日和次年 2月 2 7日露地播种 ,雪里蕻 9月 30日和次年 2月 2 7日露地播种。

关键词：芥菜真空渗入法低温处理播期遗传转化