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相思根瘤菌质粒的研究

相思根瘤菌质粒的研究

作者：王小东南昌大学

学位级别：硕士

本文研究了20株相思根瘤菌株对5种常见抗生素的抗性，并对它们的质粒分布进行了研究。在此基础上，运用接合转移的方法把质粒pMC73A从供体菌催娩克斯菌NG13引入受体菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，并对接合子进行了结瘤试验、耐氨试验及固氮... 详细信息

本文研究了20株相思根瘤菌株对5种常见抗生素的抗性，并对它们的质粒分布进行了研究。在此基础上，运用接合转移的方法把质粒pMC73A从供体菌催娩克斯菌NG13引入受体菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，并对接合子进行了结瘤试验、耐氨试验及固氮酶活性分析。结果显示： 1、参试的20株菌株对抗生素的抗性有明显的差异。绝大多数的菌株对Km、Sm敏感，其中YM2菌株对所有的抗生素都敏感，而菌株4-2对所有的抗生素都具有抗性，确定Tc为相思根瘤菌MZ、AJ018抗性筛选标记。 2、通过比较三种质粒检测的方法，确定了碱裂解法为相思根瘤菌的质粒快速检测方法。采用该方法对20株相思根瘤菌的质粒分布进行了检测，发现相思根瘤菌都只含有一个质粒，而菌株LR005没有检测到质粒。实验过程中，对质粒检测的条件进行了优化，确定相思根瘤菌质粒检测的菌液量为20ml。 3、运用接合转移的方法把质粒pMC73A从供体菌催娩克斯菌NG13引入受体菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，接合频率都为10数量级。对接合子电泳检测表明，MZ接合子能检测到质粒pMC73A条带，而AJ018接合子未能检测出。接合子的质粒稳定性研究显示，质粒在宿主菌中具有一定的稳定性。 4、对34株接合子菌株进行结瘤实验。结果显示，所有的接合子菌株都能在马占相思的根部形成根瘤。筛选出6株结瘤能力高于野生型相思根瘤菌的菌株：MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。 5、通过结瘤实验，筛选出了6个相思根瘤菌接合子，即菌株MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。这6个相思根瘤菌接合子的耐氨实验和固氮酶活性研究表明：所有的菌株在(NH)SO浓度为100mmolL、300mmolL、500mmolL的液体培养基中都能较好的生长，但各菌株在10mmolL(NH)SO条件下不能正常固氮，不过仍具有一定的固氮能力，其固氮酶活性值(nmolmlh)为：MZ1：31.231;MZ2：30.289;MZ4：29.632;MZ12：23.113;AJ7：25.328;AJ9：24.982。这表明，通过接合转移相思根瘤菌已经获得了一定的耐氨固氮能力。

关键词：相思根瘤菌耐氨固氮菌质粒分布抗生素抗性接合转移固氮酶活性

质粒pMC73A从催娩克氏菌到相思根瘤菌的接合转移

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安徽农业科学 2007年第3期35卷 669-670页

作者：王小东康丽华毛慧玲江业根马海滨张希涛中国林业科学院热带林业研究所广东广州510520 南昌大学生命科学学院江西南昌330047

用接合转移的方法把质粒pMC73A转入相思根瘤菌MZ,接合转移的频率为8.0×10-8。实验表明:pMC73A能在接合子中稳定存在。

关键词：质粒接合转移耐氨固氨菌相思根瘤菌

具有溶磷能力的相思根瘤菌16S rDNA序列分析

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安徽农业科学 2007年第24期35卷 7427-7429页

作者：张希涛康丽华马海宾江业根中国林业科学院热带林业研究所广东广州510520

为了测定具有溶磷能力的相思根瘤菌的16S rDNA序列。在TY培养基上将菌株培养至对数生长期,以提取的总DNA为模板,采用双向引物进行PCR扩增,对获得的目的产物进行纯化和测序。采用PHYLIP软件中DNADIST程序分析各菌株间的相似性,采用Clusta... 详细信息

为了测定具有溶磷能力的相思根瘤菌的16S rDNA序列。在TY培养基上将菌株培养至对数生长期,以提取的总DNA为模板,采用双向引物进行PCR扩增,对获得的目的产物进行纯化和测序。采用PHYLIP软件中DNADIST程序分析各菌株间的相似性,采用Clustal X和Treeconw软件获得菌株的系统发育树状图。系统发育学分析表明:G7-3、G31-1-5、G31-1-10位于根瘤菌属(Rhizobium)分支中;F7-2-11位于慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)分支;DH001、LH001、LL007酸、Y木1F、3-2-6位于Mesorhizobium分支中;H1-1-1属于类芽孢杆菌(Paenibacillussp.)。该研究初步确定了具有溶磷能力的相思根瘤菌菌株的发育学地位。

关键词：相思根瘤菌 16S rDNA全序列测定系统发育学分析

解磷菌和相思根瘤菌高密度培养研究及相思根瘤菌16S rDNA序列分析

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解磷菌和相思根瘤菌高密度培养研究及相思根瘤菌16S rDNA序列分析

作者：尚军红南昌大学

学位级别：硕士

相思作为豆科树种,其共生固氮作用日益受到重视。研究表明:在大叶相思(Acacia auriculaeformis ***.)和马占相思(Acacia mangium Willd.)吸收的氮素中,52%～66%来自根瘤菌的固氮作用。目前对相思研究多集中在固氮共生体间的相互作用方面... 详细信息

相思作为豆科树种,其共生固氮作用日益受到重视。研究表明:在大叶相思(Acacia auriculaeformis ***.)和马占相思(Acacia mangium Willd.)吸收的氮素中,52%～66%来自根瘤菌的固氮作用。目前对相思研究多集中在固氮共生体间的相互作用方面,对在共生体中发挥固氮作用的相思根瘤菌的优化培养,则未有报道。利用微生物的解磷作用弥补土壤磷素营养的不足,已成为当前国内外非常关注的研究课题。因此,本课题着重研究了相思根瘤菌及与它相关的解磷菌优化培养条件,该研究结果为研制具有固氮、解磷功能的微生物肥料提供了条件和基础。同时本课题对相思根瘤菌三个菌株进行了16S rDNA基因序列测定与分析,以确定它们与其它根瘤菌的亲缘关系。 1).绘制了相思根瘤菌AJ018、YM2和MZ菌株和解磷菌217菌株在4种培养基中的OD值生长曲线,结果表明:它们都能在BSE培养基中较好的生长;应用正交实验L(3)对AJ018、YM2和MZ根瘤菌和217解磷菌的常规培养进行优化,获得了它们的优化培养基,进一步绘制的生长曲线证明了优化培养基更利于菌株的生长,且活菌数更多。 2).通过对相思根瘤菌和解磷菌摇瓶发酵中种子菌龄、接种量、装液量、初始pH值和摇床转速等工艺条件的研究,确定出摇瓶发酵的最优培养条件。同时217解磷能力的研究也表明:菌体数量与pH值、解磷强度之间有着密切的关系。另外用乙炔还原法测得它们的最高固氮酶活性表明:在AJ018、MZ和YM2三株菌株中,MZ菌株的固氮能力最好,其固氮酶活性最高可达0.963μ***.d;YM2的固氮能力最差,其最高固氮酶活性仅为0.280μ***.d。 3).制作了相思根瘤菌MZ和217解磷菌8种固体载体的固体剂型,并比较其在贮藏过程中的活菌数和存活率。结果表明相思根瘤菌MZ在这8种固体载体保存效果较差,保存效果最好的是轻质碳酸钙,其活菌数和存活率分别为1.38×10和10.1%。而217解磷菌的8种固体载体保存效果较好,特别是高岭土、微细胞滑石粉和轻质碳酸钙,但高岭土要优于微细胞滑石粉和轻质碳酸钙。 4).测定了相思根瘤菌的16SrDNA序列,将此序列与根瘤菌各已知种及相关种的16SrDNA序列进行了比较,得到了系统发育树状图。在系统发育树状图中,AJ018、MZ菌株与慢生大豆根瘤菌(***)、弗氏中华根瘤菌

关键词：相思根瘤菌解磷细菌培养基优化固氮酶活性解磷能力剂型 16S rDNA序列

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相思根瘤菌的研究

江西科学 2006年第1期24卷 96-99页

作者：王小东康丽华毛慧玲中国林业科学院热带林业研究所广东广州510520 南昌大学生命科学学院江西南昌330047

综述了近年来根瘤菌的研究概况以及相思根瘤菌的分离纯化、抗逆性以及质粒分布的研究进展。

关键词：根瘤菌质粒相思根瘤菌耐盐性抗生素抗逆性质粒分布

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相思根瘤菌的生理生化特性初步分析

广西大学学报（自然科学版） 2004年第1期29卷 26-29,34页

作者：李兴芳蒋艳明樊妙姬凌云林莹韦莉莉广西大学动物科学与技术学院广西南宁530004

对22株相思根瘤菌菌株进行生理生化特征的初步研究,这些菌株基本符合Jordan和Allen的根瘤菌分类特征,但其中10株菌株能利用柠檬酸.同时这些菌株利用糖的能力不同,几乎所有的菌株均能利用D-果糖、木糖、山梨醇和糊精,但对其他糖类如麦芽... 详细信息

对22株相思根瘤菌菌株进行生理生化特征的初步研究,这些菌株基本符合Jordan和Allen的根瘤菌分类特征,但其中10株菌株能利用柠檬酸.同时这些菌株利用糖的能力不同,几乎所有的菌株均能利用D-果糖、木糖、山梨醇和糊精,但对其他糖类如麦芽糖、D-半乳糖、棉子糖、鼠李糖和阿拉伯糖则是有的菌株可以利用,有的不能.本研究为进一步的深入研究和应用奠定了基础.

关键词：相思根瘤菌生理生化特性细菌分类学

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相思根瘤菌的抗逆性初步研究

广西科学 2003年第4期10卷 312-314,324页

作者：李兴芳樊妙姬蒋艳明凌云韦莉莉广西大学动物科学技术学院南宁市大学路100号530004 广西大学生物科学与技术学院南宁53005 广西大学

对 2 1株相思根瘤菌和 2株大豆根瘤菌菌株进行 Na Cl、(NH4 ) 2 SO4 、p H值、高温和低温的耐受性实验 ,其中耐 (NH4 ) 2 SO4 的实验分别进行了相思根瘤菌在含 (NH4 ) 2 SO4 的平板上的耐受性和在浓度为 10 0 mol/ L、30 0 m ol/L、5 0 ... 详细信息

对 2 1株相思根瘤菌和 2株大豆根瘤菌菌株进行 Na Cl、(NH4 ) 2 SO4 、p H值、高温和低温的耐受性实验 ,其中耐 (NH4 ) 2 SO4 的实验分别进行了相思根瘤菌在含 (NH4 ) 2 SO4 的平板上的耐受性和在浓度为 10 0 mol/ L、30 0 m ol/L、5 0 0 mol/ L、6 0 0 m ol/ L 的 (NH4 ) 2 SO4 中的结瘤试验。参试菌株均经过回接实验培养和镜检 ,培养基均为 YMA。结果表明 ,相思根瘤菌均能耐受的盐浓度为 0 .5 %～ 2 .0 % ,能在 37℃和 p H值为 6～ 9的条件下生长。在抗生素抗性方面 ,相思根瘤菌普遍抗氨卞青霉素 ,而对卡那霉素和链霉素敏感。相思根瘤菌的耐盐。

关键词：相思根瘤菌耐盐性生长温度 pH值耐受性抗生素抗逆性耐氨性

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马占相思根瘤菌结瘤固氮特性的分析

广西农业生物科学 2005年第3期24卷 215-219页

作者：蒋艳明凌云秦建丽侯远瑞韦莉莉栾桂龙樊妙姬广西大学动物科学技术学院广西大学生命科学与技术学院广西林业科学研究院

相思属(A cacia)树种是速生的热带、亚热带豆科植物。对现在大面积种植的相思树品种——马占相思的根瘤菌进行分离和筛选,获得菌株若干株,对它们的结瘤固氮特性和对马占相思、大叶相思及厚荚相思生长的影响等进行了初步研究。结果表明,... 详细信息

相思属(A cacia)树种是速生的热带、亚热带豆科植物。对现在大面积种植的相思树品种——马占相思的根瘤菌进行分离和筛选,获得菌株若干株,对它们的结瘤固氮特性和对马占相思、大叶相思及厚荚相思生长的影响等进行了初步研究。结果表明,无氮条件下接种马占相思根瘤菌,能显著促进这3个树种的株重、株高和生物量的增长;苗圃接种马占相思根瘤菌,马占相思苗高增加27.6%,地径增加14.8%,植株鲜重增加32.6%,结瘤数增加83.8%。

关键词：相思根瘤菌结瘤固氮

两株高效相思根瘤菌的抗药性研究及其质粒组成分析

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生物技术 2006年第1期16卷 24-26页

作者：王小东康丽华毛慧玲江业根马海滨中国林业科学院热带林业研究所广东广州510520 南昌大学生命科学学院江西南昌330047

目的:研究相思根瘤菌质粒与其抗药性之间的关系。方法:研究了相思根瘤菌MZ和AJ018在含不同浓度的抗生素的固体培养基和液体培养基的生长情况,并用碱裂解方法对其质粒组成进行检测。结果:两菌株对链霉素和卡那霉素均无抗性,而对其它抗生... 详细信息

目的:研究相思根瘤菌质粒与其抗药性之间的关系。方法:研究了相思根瘤菌MZ和AJ018在含不同浓度的抗生素的固体培养基和液体培养基的生长情况,并用碱裂解方法对其质粒组成进行检测。结果:两菌株对链霉素和卡那霉素均无抗性,而对其它抗生素都有不同程度的抗性。MZ菌株对实验中的氯霉素、氨苄青霉素、四环素三种抗生素的耐受范围与最大耐受值都比AJ018强,当平板培养基中氨苄青霉素、四环素、氯霉素的终浓度分别为250μg/ml、75μg/ml、150μg/ml时,AJ018在平板上无菌落生长,当三种抗生素终浓度分别为800μg/ml1、50μg/ml、400μg/ml时无菌落生长。两菌株都含有一个大约50kb的质粒。

关键词：相思根瘤菌抗药性质粒