相思根瘤菌质粒的研究
作者单位：南昌大学
学位级别：硕士
导师姓名：毛慧玲;康丽华
授予年度：2006年
主 题：相思根瘤菌 耐氨固氮菌 质粒分布 抗生素抗性 接合转移 固氮酶活性
摘 要：本文研究了20株相思根瘤菌株对5种常见抗生素的抗性，并对它们的质粒分布进行了研究。在此基础上，运用接合转移的方法把质粒pMC73A从供体菌催娩克斯菌NG13引入受体菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，并对接合子进行了结瘤试验、耐氨试验及固氮酶活性分析。结果显示： 1、参试的20株菌株对抗生素的抗性有明显的差异。绝大多数的菌株对Km、Sm敏感，其中YM2菌株对所有的抗生素都敏感，而菌株4-2对所有的抗生素都具有抗性，确定Tc为相思根瘤菌MZ、AJ018抗性筛选标记。 2、通过比较三种质粒检测的方法，确定了碱裂解法为相思根瘤菌的质粒快速检测方法。采用该方法对20株相思根瘤菌的质粒分布进行了检测，发现相思根瘤菌都只含有一个质粒，而菌株LR005没有检测到质粒。实验过程中，对质粒检测的条件进行了优化，确定相思根瘤菌质粒检测的菌液量为20ml。 3、运用接合转移的方法把质粒pMC73A从供体菌催娩克斯菌NG13引入受体菌相思根瘤菌MZ和AJ018中，接合频率都为10数量级。对接合子电泳检测表明，MZ接合子能检测到质粒pMC73A条带，而AJ018接合子未能检测出。接合子的质粒稳定性研究显示，质粒在宿主菌中具有一定的稳定性。 4、对34株接合子菌株进行结瘤实验。结果显示，所有的接合子菌株都能在马占相思的根部形成根瘤。筛选出6株结瘤能力高于野生型相思根瘤菌的菌株：MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。 5、通过结瘤实验，筛选出了6个相思根瘤菌接合子，即菌株MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。这6个相思根瘤菌接合子的耐氨实验和固氮酶活性研究表明：所有的菌株在(NH)SO浓度为100mmolL、300mmolL、500mmolL的液体培养基中都能较好的生长，但各菌株在10mmolL(NH)SO条件下不能正常固氮，不过仍具有一定的固氮能力，其固氮酶活性值(nmolmlh)为：MZ1：31.231;MZ2：30.289;MZ4：29.632;MZ12：23.113;AJ7：25.328;AJ9：24.982。这表明，通过接合转移相思根瘤菌已经获得了一定的耐氨固氮能力。
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