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作者：马捷安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景近年来,随着分子生物学、生物化学、分子遗传学等学科的迅猛发展,使得包括皮肤在内等相关生理系统在细胞及分子水平上的研究日新月异。皮肤蛋白是皮肤中的主要组成部分,在皮肤屏障中发挥着保湿、信号转导、免疫调节等重要功能... 详细信息

研究背景近年来,随着分子生物学、生物化学、分子遗传学等学科的迅猛发展,使得包括皮肤在内等相关生理系统在细胞及分子水平上的研究日新月异。皮肤蛋白是皮肤中的主要组成部分,在皮肤屏障中发挥着保湿、信号转导、免疫调节等重要功能。皮肤蛋白含量的变化可导致皮肤屏障功能受损,后者与一些皮肤疾病的发生发展密切相关。现在迅速崛起的质谱技术也使得大规模、系统性研究蛋白质组学成为可能。皮肤蛋白的深入探索可为新药的研发及皮肤疾患的诊疗提供新的靶点和方向,因此有关皮肤蛋白的功能与作用机制逐渐成为研究热点。研究目的本研究通过使用无创性取材方法采集中国健康人群皮肤样品,然后与无标记纳流液相色谱-质谱(nLC-MS)相结合对皮肤中的蛋白进行分析,为进一步建立中国健康人群皮肤蛋白定性及定量分析平台奠定基础。实验材料与方法用医用胶带在中国健康志愿者的前臂掌侧皮肤同一部位连续5次取材,随后对胶带上的蛋白质进行收集、提取、酶解,并通过与Orbitrap Fusion Tribrid高分辨质谱仪相偶联、对已被胰蛋白酶降解过的肽混合物进行上机分析。最后使用Proteome Discoverer 2.2(Thermo)对样品中的蛋白质进行鉴定。结果在本实验的6个志愿者皮肤样品中,我们分别检测到了114种、105种、122种、139种、129种及151种蛋白质,其中80种蛋白质是样品所共有的。我们根据这80种蛋白在皮肤屏障中的不同作用,将其分为16大类,分别是角蛋白、角质化包膜蛋白、与角质化包膜有关的酶类、蛋白酶抑制剂、与丝聚蛋白降解相关的酶类、与角质层粘附相关的酶类、钙粘蛋白、与角质层物质代谢相关蛋白、抗氧化相关蛋白、信号通路蛋白、膜联蛋白、血清蛋白标记物、抗菌蛋白、分泌蛋白、其他蛋白及功能未明确的蛋白。结论蛋白质作为皮肤的重要组成部分,与皮肤生理稳态、屏障功能等密切相关,本实验将无创性皮肤样品取材方法与Orbitrap Fusion Tribrid高分辨质谱仪相结合,在降低取样难度的同时提高蛋白质鉴定的灵敏度。本研究为进一步拓展蛋白质组学技术在人类健康皮肤与病损皮肤的研究提供了一定的参考。同时,我们在皮肤蛋白的分析过程中发现,不同个体之间存在蛋白种类的差异,这可能与实验取材、处理及检测过程中不可避免的误差有关,也可能与个体皮肤蛋白的差异性表达及其皮肤屏障状态相关。

关键词：皮肤蛋白角质层皮肤屏障蛋白提取质谱仪天然保湿因子

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使用无标记LC-MS/MS对寻常型银屑病患者的皮肤屏障功能相关蛋白进行无创性定量蛋白组学分析

使用无标记LC-MS/MS对寻常型银屑病患者的皮肤屏障功能相关蛋白进...

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作者：章婧安徽医科大学

学位级别：硕士

研究背景银屑病通常被认为是一种免疫学引发的疾病,近些年的很多的研究发现银屑病可能是由于表皮皮肤屏障功能的主要缺陷“驱动”。皮肤屏障的功能通常指表皮,尤其是角质层的皮肤屏障功能结构,角质层的各种蛋白质是角质层的皮肤屏障结... 详细信息

研究背景银屑病通常被认为是一种免疫学引发的疾病,近些年的很多的研究发现银屑病可能是由于表皮皮肤屏障功能的主要缺陷“驱动”。皮肤屏障的功能通常指表皮,尤其是角质层的皮肤屏障功能结构,角质层的各种蛋白质是角质层的皮肤屏障结构的重要生化组成。与蛋白质的任何异常表达都会影响着银屑病的皮肤屏障功能。角蛋白(keratin,KRT)是表皮细胞的主要结构蛋白,呈纤维状,与丝聚合蛋白(filaggrin,FLG)形成致密的角蛋白纤维束组成角质层的支架结构。丝聚合蛋白(FLG)与兜甲蛋白(loricrin,LOR)、内披蛋白(involucrin,IVL)、毛透明蛋白以及富含脯氨酸的小蛋白(small proline rich region protein,SPRRs)等蛋白质一起,在转谷氨酰胺酶(transglutaminas,TGs)的交叉连接作用下形成角化包膜(cornified envelope,CE)。角化包膜在对抗外界机械张力、防止病原生物入侵、保持角质层内外水平衡方面中有发挥着重要的作用,有效的防止外界有害物质对皮肤的入侵,是角质层作为一道防御屏障的基础。位于颗粒层的丝聚合蛋白原在半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-14(cysteiyl aspartate specific proteinase,Caspase-14)的作用下转化成有生物学活性的丝聚合蛋白,并主要集中在角质层,丝聚合蛋白在角质层的多种蛋白水解酶作用下进一步降解成游离的氨基酸,例如尿刊酸、吡咯烷酮-5-羧氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸、天冬氨酸等这些氨基酸有很强的亲水性,形成天然保湿因子的主要组成部分,在维持皮肤角质层的水合功能,保湿方面发挥着重要作用。除了上述角蛋白和角蛋白相关蛋白外,S100A蛋白、紧密连接蛋白(tight junction,TJ)等都被研究发现在维持皮肤屏障功能中发挥着重要作用。以上这些与角质层皮肤屏障功能密切相关的蛋白角蛋白、丝聚合蛋白、兜甲蛋白、内披蛋白、S100A蛋白、SPRRs、转谷氨酰胺酶等与银屑病的关联也成为一个研究热点。目前在该领域的研究方法主要是皮肤活检术结合免疫组化的方法。研究目的本研究旨在通过无创方法采集正常人和寻常型银屑病病人的角质层皮肤样本,使用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography with tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对角质层中的蛋白进行无标记定量分析,探寻寻常型银屑病患者与正常人角质层中皮肤屏障功能相关蛋白表达的差异,为今后更深入地研究银屑病的皮肤屏障功能相关蛋白提供一个很好的方法学。实验材料与方法使用3L医用压敏胶带粘取实验组寻常型银屑病患者前臂屈侧皮损区皮肤,对照组同样使用3L医用压敏胶带粘取对照组正常人前臂屈侧皮肤。对两组胶带上的蛋白质进行收集、提取、酶解,对被胰蛋白酶降解过的肽混合物使用高分辨质谱分析仪进行LC-MS/MS分析。最后用Max Quant进行无标签数据库搜库,采用Max LFQ算法,得出每个样本最终结果。结果在本实验的中银屑病病人组检出1102种蛋白,正常人组检出106种蛋白。通过统计对比分析正常人组和寻常型银屑病患者组的每种蛋白的蛋白峰面积值,发现其中有41种与皮肤屏障功能密切相关的蛋白的蛋白峰面积值,在两组之间存在明显差异,差异有统计学意义。结论与正常人对比寻常型银屑病皮肤屏障的相关蛋白KTR1、KRT2、KRT5、KRT6A、KRT6B、KRT8、KRT9、KRT10、KRT14、KRT16、KRT17、KRT72、SPRR1A、SPRR2D;SPRR2BSPRR2F、SPRR1B、SPRR2E、SPRR2A、IVL、FLG2、TGM3、TGM1、TGM5、LCE3E、LCE3D、LOR、FLG、Caspase-14、S100A8、S100A9、S100A7、S100A7A、S100A3、S100A11、S100A16、S100A2、桥斑蛋白(desmoplakin,DSP)、桥粒芯蛋白1(desmoglein1,DSG1)、桥粒芯蛋白3(desmoglein3,DSG3)、TPJ1、TPJ2表达差异明显,这些蛋白的表达差异影响了寻常型银屑病患者的角质形成细胞的分化、增殖,影响了寻常型银屑病患者的表皮屏障功能,同时寻常型银屑病的相关炎症因子也影响着这些皮肤屏障功能相关蛋白的表达。本次研究采用的是无创取材的研究方法区别于常用的有创皮肤活检取材,同时结合无标记LC-MS/MS这种最新的蛋白组学技术,有着无创、灵敏度高、准确性高的特点。为未来加深拓展对皮肤屏障蛋白与寻常型银屑病的相关研究提供了很好的方法学。

关键词：无创性皮肤蛋白皮肤屏障银屑病质谱法

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血清CLDN2、DPT、SFRP2联合检测法诊断早期结直肠癌的效果分析

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当代医药论丛 2020年第24期18卷 1-3页

作者：邰文静常州市金坛区人民医院检验科江苏常州213200

目的:探讨用血清封闭蛋白2(CLDN2)、皮肤蛋白(DPT)、分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)联合检测法诊断早期结直肠癌的效果。方法:选取2016年10月至2018年10月期间常州市金坛区人民医院收治的30例早期结直肠癌患者、30例结直肠良性疾病患者及... 详细信息

目的:探讨用血清封闭蛋白2(CLDN2)、皮肤蛋白(DPT)、分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)联合检测法诊断早期结直肠癌的效果。方法:选取2016年10月至2018年10月期间常州市金坛区人民医院收治的30例早期结直肠癌患者、30例结直肠良性疾病患者及同期在该院进行体检的30例健康人作为本次研究的对象。将其中的30例早期结直肠癌患者设为恶性肿瘤组,将其中的30例结直肠良性疾病患者设为良性疾病组,将其中的30例健康人设为对照组。三组受检者入院后,均检测其血清CLDN2、DPT、SFRP2的水平。用ROC曲线下面积分析用CLDN2、DPT、SFRP2联合检测法诊断早期结直肠癌的效果。结果:恶性肿瘤组患者血清CLDN2的水平均高于良性疾病组患者和对照组健康人,P<0.05。良性疾病组患者血清CLDN2的水平高于对照组健康人,P<0.05。恶性肿瘤组患者血清DPT、SFRP2的水平均低于良性疾病组患者和对照组健康人,P<0.05。良性疾病组患者血清DPT、SFRP2的水平均低于对照组健康人,P<0.05。用血清CLDN2、DPT、SFRP2联合检测法诊断早期结直肠癌的灵敏度为76.67%,特异度为90%,准确率为85.56%。结论:用血清CLDN2、DPT、SFRP2联合检测法诊断早期结直肠癌的效果较为理想。

关键词：早期结直肠癌封闭蛋白2 皮肤蛋白分泌型卷曲相关蛋白2 联合诊断

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