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白介素9对免疫性血小板减少症的作用及其机制探讨

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白介素9对免疫性血小板减少症的作用及其机制探讨

作者：郑雅龄南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景及意义免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)是一种常见的自身免疫性出血疾病,占出血性疾病的1/3,发病率在儿童为3.0～5.3/10万,成年人为1.6～3.9/10万。以持续性血小板减少、血小板生成时间缩短、巨核细胞发育和... 详细信息

研究背景及意义免疫性血小板减少症(Immune thrombocytopenia,ITP)是一种常见的自身免疫性出血疾病,占出血性疾病的1/3,发病率在儿童为3.0～5.3/10万,成年人为1.6～3.9/10万。以持续性血小板减少、血小板生成时间缩短、巨核细胞发育和成熟障碍、血小板膜糖蛋白特异性自身抗体出现为主要特征。其发病机制复杂,经典机制为由抗血小板膜糖蛋白产生的抗血小板自身抗体引起,介导网状内皮系统破坏血小板。临床上可分为急性型和慢性型,前者好发于儿童,后者多见于成人。ITP总体预后较好,但因血小板低,出血风险大,不仅影响患者的生活质量,严重时可出现颅内出血而危及生命。目前的治疗主要有肾上腺糖皮质激素、注射免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)、脾切除、CD20单克隆抗体、免疫抑制剂、促血小板生成素(TPO)及TPO激动剂(TPO-RA)等,但仍存在无效、效果差或价格过于昂贵或副作用明显等问题,所以目前研究者致力于新机制的研究和新药物的开发,寻找新的治疗方法成为临床急需解决的问题所在。白介素9(interleukin9,IL-9)是人类巨核细胞系M07E的生长因子,与小鼠T细胞生长因子p40有显著的同源性,主要由辅助性T细胞分泌,通过IL-9受体介导的信号转导激活JAK/STAT1,STAT3和STAT5信号通路。循环中血小板由骨髓中多能造血干细胞分化为巨核细胞而形成,其生成过程受多种细胞因子调控。研究证实,多种细胞因子(如TPO、IL-1β,IL-6,IL-1α,IL-11等)对巨核细胞增殖、分化具有调节作用。研究显示在TPO和/或干细胞因子存在下,IL-9具有增强巨核细胞扩增的作用。课题组前期研究发现成骨细胞通过IL-9调控巨核细胞的增殖和血小板的生成,目前IL-9对免疫性血小板减少症的相关影响还未见报道。本课题通过建立免疫性血小板减少症小鼠模型,检测ITP小鼠中IL-9的表达,分析IL-9对ITP小鼠血小板生成的影响,明确IL-9在ITP中的作用,探讨IL-9在ITP中应用的可行性和价值。研究内容和方法一.ITP小鼠模型构建1.模型构建方法6-8周龄雄性BALB/c小鼠16只,随机分成ITP组和对照组,ITP组腹腔注射大鼠抗小鼠CD41单克隆抗体(MWReg30单抗)建立ITP模型,注射剂量分别为:第1天、第2天68μg/kg,第3天102μg/kg,第4天至第8天136 μg/kg,对照组腹腔注射等量IgG1,连续注射8天。2.模型鉴定(1)采用尾静脉取血法采集模型小鼠外周血,每日一次,动物全血细胞分析仪检测外周血白细胞、红细胞和血小板的变化。(2)造模第8天,采集骨髓,流式细胞技术分析ITP组及对照组CD41+Sca-1+细胞和成熟巨核细胞的数量。二、ITP小鼠体内IL-9表达水平变化1.酶联免疫吸附实验(ELISA)检测ITP组与对照组血清IL-9的表达造模第8天,心脏采血法采集ITP组及对照组小鼠外周血,离心分离上清,酶联免疫吸附实验检测IL-9表达水平变化。2.qRT-PCR检测比较各组小鼠骨髓中IL-9 mRNA的表达造模第8天,采集ITP组及对照组小鼠骨髓,流式细胞技术分选骨髓巨核细胞,提取细胞总RNA,通过反转录、聚合酶链反应所得数据分析IL-9mRNA的相对表达量。三、探索IL-9对ITP小鼠血小板数量的影响1.实验分组:ITP+IL-9组、ITP组、对照组,其中ITP+IL-9组腹腔注射MWReg30单抗+IL-9;ITP组腹腔注射MWReg30单抗;对照组腹腔注射等量IgG1(IL-9的注射剂量为:第1天、2天7.5μg/kg,第3天11.25μg/kg,第4天至第8天15μg/kg;MWReg30单抗剂量同前)连续注射8天。2.采用尾静脉取血法采集外周血,动物全血细胞分析仪检测外周血血小板数目;采集骨髓,流式细胞技术检测成熟巨核细胞数目,通过比较ITP+IL-9组、ITP组、对照组血小板和成熟巨核细胞的数量分析IL-9对ITP发病的影响。四、初步探索IL-9影响ITP小鼠血小板生成的作用机制1.检测骨髓腔中IL-9受体的沉默效果对照组小鼠骨髓腔内注射阴性对照siRNA(10μg/只)实验组小鼠骨髓腔内注射IL-9rSiRNA(10μg/只)注射后第7天,全蛋白提取试剂盒提取骨髓细胞蛋白,蛋白免疫印迹法检测IL9R的表达。2.分析阻断IL-9/IL-9R信号通路对ITP小鼠血小板生成的影响。(1)实验分组:阴性对照组(对照组小鼠骨髓腔内注射阴性对照siRNA 10 μg/只)、ITP+IL-9+IL-9rSiRNA 组(ITP+IL-9 组小鼠骨髓腔内注射 IL-9rSiRNA 10μg/只)、ITP组;(2)注射后第7天,采用尾静脉取血法采集三组小鼠外周血,动物全血细胞分析仪检测外周血血小板的数目;(3)注射后第7天,采集三组小鼠骨髓,流式细胞技

关键词：免疫性血小板减少白介素9 STAT5

过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜组织中白介素9及转录因子PU.1表达水平的研究

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中国全科医学 2016年第12期19卷 1420-1423,1428页

作者：顾兆伟赵鹤曹志伟中国医科大学附属盛京医院耳鼻咽喉科辽宁省沈阳市110004

目的探讨辅助性T细胞9(Th9细胞)相关细胞因子白介素(IL)-9 mRNA/蛋白及转录因子PU.1mRNA在过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜组织中的表达及其作用。方法 2014年7月选取SPF级Balb/c小鼠16只,采用随机数字表法分为两组,每组8只。实验组小鼠使用鸡卵... 详细信息

目的探讨辅助性T细胞9(Th9细胞)相关细胞因子白介素(IL)-9 mRNA/蛋白及转录因子PU.1mRNA在过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜组织中的表达及其作用。方法 2014年7月选取SPF级Balb/c小鼠16只,采用随机数字表法分为两组,每组8只。实验组小鼠使用鸡卵清蛋白致敏,建立过敏性鼻炎小鼠模型;对照组小鼠同期使用0.9%氯化钠溶液。每组采用随机数字表法取4只小鼠,病理检查证明造模成功。每组剩余4只小鼠取鼻黏膜,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠鼻黏膜组织中IL-9、转录因子PU.1 mRNA表达水平,采用流式微球术检测小鼠鼻黏膜组织中IL-9表达水平。结果实验组小鼠鼻黏膜组织中IL-9 mRNA表达水平〔(21.88±1.82)与(1.03±0.11)〕、转录因子PU.1 mRNA表达水平〔(24.63±1.88)与(1.02±0.07)〕高于对照组(P9表达水平〔(66.9±4.4)pg/ml与(20.9±2.1)pg/ml〕高于对照组(P9 mRNA表达水平与转录因子PU.1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.952,P9细胞相关细胞因子IL-9和转录因子PU.1参与过敏性鼻炎的发生发展过程,该结果将有希望提高对过敏性鼻炎发病机制的了解,为过敏性鼻炎免疫调节治疗潜在靶点的选择提供新的线索。

关键词：鼻炎 T淋巴细胞,辅助诱导白介素9 转录因子

血清白介素9与幽门螺杆菌感染在成人特应性皮炎的研究

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血清白介素9与幽门螺杆菌感染在成人特应性皮炎的研究

作者：陈嘉惠广州医科大学

学位级别：硕士

目的:检测成人特应性皮炎(AD)患者血清白介素9(IL-9)水平,同时进行尿素14C呼气试验测定,了解AD患者幽门螺杆菌(Hp)感染情况,研究IL-9与Hp感染在AD中的意义。方法:选取成人AD患者和正常健康对照者进行研究。AD组按发病年龄分为迟发型AD组... 详细信息

目的:检测成人特应性皮炎(AD)患者血清白介素9(IL-9)水平,同时进行尿素14C呼气试验测定,了解AD患者幽门螺杆菌(Hp)感染情况,研究IL-9与Hp感染在AD中的意义。方法:选取成人AD患者和正常健康对照者进行研究。AD组按发病年龄分为迟发型AD组(发病年龄318岁)和持续型AD组(发病年龄9、总Ig E水平;用尿素14C呼气试验检测胃Hp感染情况;比较各组间检测指标的差异及各指标之间的相关性。结果:1.收集了成人AD患者40例,其中男性15例,女性25例。症状严重程度分组轻度16例,中度21例,重度3例。成人AD患者的IL-9水平(12.34±8.36)pg/ml和总Ig E水平(196.08±289.91)IU/ml均明显高于对照组[(8.54±3.56)pg/ml;(24.12±13.54)IU/ml](P9.46)年大于迟发型AD患者平均病程(5.14±6.79)年(P9水平、总Ig E水平、呼气试验阳性率的差异无统计学意义(P>0.05)。3.成人AD组特别是持续型AD组的IL-9水平与病程呈正相关关系(P9水平与病程未见明显相关(P>0.05)。成人AD组IL-9水平与总Ig E水平、症状严重程度均未见明显相关性(P>0.05)。成人AD组的总Ig E水平与症状严重程度呈正相关关系(P9水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Hp感染与成人AD的发病相关。Il-9参与了成人特应性皮炎的发病,并且在成人AD的长期慢性炎症发展过程中起一定作用,但与Hp感染无明显相关性。

关键词：特应性皮炎迟发型持续型幽门螺杆菌白介素9

慢性阻塞性肺疾病患者呼出气冷凝液中白介素9水平变化分析

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中国全科医学 2014年第33期17卷 3932-3937页

作者：罗岚陈建王广发胡艳宿利北京大学第一医院呼吸内科北京市100034

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者及正常吸烟者呼出气冷凝液(EBC)中白介素9(IL-9)水平的变化。方法选取2006年9—12月北京大学第一医院诊治的COPD稳定期患者20例,COPD急性加重期患者9例,健康非吸烟人群14例,健康吸烟者10例。收集EBC... 详细信息

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者及正常吸烟者呼出气冷凝液(EBC)中白介素9(IL-9)水平的变化。方法选取2006年9—12月北京大学第一医院诊治的COPD稳定期患者20例,COPD急性加重期患者9例,健康非吸烟人群14例,健康吸烟者10例。收集EBC前使用Jaeger肺功能仪测定吸入支气管扩张剂后第1秒用力呼气末容积占预计值的百分比(FEV1%)和第1秒用力呼气末容积/用力肺活量(FEV1/FVC),采用双抗夹心酶联免疫吸附法检测各组EBC中IL-9水平。应用SPSS统计学软件进行数据分析。结果 4组FEV1%、FEV1/FVC比较,差异均有统计学意义(P9水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。COPD稳定期及急性加重期患者EBC中IL-9水平与年龄、累计吸烟量、FEV1%、FEV1/FVC均无直线相关关系(P>0.05)。结论未能发现不同组间EBC中IL-9水平的差异及与吸烟及COPD患者气道炎性反应间的关系。EBC中IL-9水平在COPD气道炎症中的作用有待进一步研究。

关键词：肺疾病,慢性阻塞性白介素9 吸烟

强直性脊柱炎患者血清白介素9的表达及其意义

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中国全科医学 2014年第4期17卷 431-433页

作者：王倩倩魏平孟景红河北医科大学第三医院免疫风湿科河北省石家庄市050051

目的研究强直性脊柱炎(AS)患者不同疾病状态下血清中白介素9(IL-9)的表达水平,探讨其与AS炎症活动的相关性。方法选择2012年10月—2013年4月在河北医科大学第三医院免疫风湿科住院及门诊治疗的AS患者40例,依据Bath强直性脊柱炎活动性指... 详细信息

目的研究强直性脊柱炎(AS)患者不同疾病状态下血清中白介素9(IL-9)的表达水平,探讨其与AS炎症活动的相关性。方法选择2012年10月—2013年4月在河北医科大学第三医院免疫风湿科住院及门诊治疗的AS患者40例,依据Bath强直性脊柱炎活动性指数(BASDAI)分为活动组(n=28)和稳定组(n=12),另选择同时期门诊体检健康者24例为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-9水平。同时分析AS患者血清IL-9水平与临床指标的相关性。结果稳定组〔(534±80)ng/L〕和活动组〔(691±57)ng/L〕患者血清IL-9水平高于对照组〔(432±56)ng/L〕,活动组患者血清IL-9水平高于稳定组(P9水平与C反应蛋白(CRP)(r=0.529,P=0.000)、红细胞沉降率(ESR)(r=0.339,P=0.033)、BASDAI(r=0.623,P=0.000)均呈正相关,与病程无相关性(r=0.233,P=0.148)。结论 AS患者血清中IL-9的表达水平显著升高,且与疾病的活动度及临床炎性指标相关,提示IL-9参与并促进了AS的病情发展。

关键词：脊柱炎,强直性白介素9 C反应蛋白质红细胞沉降率

Notch信号通路与Th9/IL-9轴在慢性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

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Notch信号通路与Th9/IL-9轴在慢性淋巴细胞白血病中的表达及临床...

作者：沙巴艾提·吐达洪新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨Notch信号通路与辅助性T细胞9(Th9)/白介素9(IL-9)轴在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的表达、诊断及预后预测意义,及探讨Notch信号通路是否参与IL-9表达。方法:选取2021年6月至2022年6月期间于新疆医科大学第一附属医院就诊的43名... 详细信息

目的:探讨Notch信号通路与辅助性T细胞9(Th9)/白介素9(IL-9)轴在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的表达、诊断及预后预测意义,及探讨Notch信号通路是否参与IL-9表达。方法:选取2021年6月至2022年6月期间于新疆医科大学第一附属医院就诊的43名CLL患者作为病例组,对照组为同一时期在本院体检的40名健康志愿者。两组外周血中Th9细胞的比例采用流式细胞术检测;蛋白免疫印迹技术(western blot,WB)检测Th9特异性转录因子PU.1、IRF4和Notch信号通路受体Notch1、Notch2、Notch3、Notch4的蛋白表达差异;ELISA检测血清IL-9和Notch信号通路配体DLL1、DLL2、DLL3、Jagged1、Jagged2等细胞因子的表达水平,比较上述指标在CLL组和对照组中的表达差异。根据ELISA结果进一步将CLL组分为IL-9高组和IL-9低组,比较两组Notch1、Notch2、Jagged1和Jagged2的表达差异。结合临床资料分析IL-9、Jagged2在CLL中的诊断及预后预测价值。结果:CLL组Th9比例、PU.1、IRF4、Notch1、Notch2、IL-9、Jagged1和Jagged2的表达均明显高于对照组(P9高表达组Notch1、Jagged2的表达均明显高于IL-9低表达组(P9和Jagged2诊断CLL的ROC曲线显示,两者联合诊断CLL时的曲线下面积(Area under the curve,AUC)最大,即诊断价值最高;不同临床指标分组分析中,IL-9和Jagged2高表达与β微球蛋白异常、IGHV突变、TP53异常和肝脾淋巴结肿大相关(P9与Jagged2、Binet分期、Rai分期、CLL-IPI评分呈正相关(r=0.68,r=0.72,r=0.69,r=0.86);Jagged2与Binet分期、Rai分期、CLL-IPI评分呈正相关(r=0.71,r=0.69,r=0.77),而均与白细胞和淋巴细胞计数、淋巴细胞百分比等指标无关。结论:Notch信号通路与Th9/IL-9轴在慢性淋巴细胞白血病中异常高表达,Jagged2/Notch1信号通路可能参与调控IL-9高表达,IL-9、Jagged2在CLL具有较高诊断及预后预测价值。

关键词：慢性淋巴细胞白血病辅助性T细胞9 白介素9 Notch信号通路

急性髓系白血病中辅助性T细胞Th9分布和转录因子表达

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中国实验血液学杂志 2017年第5期25卷 1295-1299页

作者：杨慧仇海荣王蓉郭睿王琰王慧吴雨洁张建富范磊钱思轩徐卫李建勇南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科江苏南京210029

目的:研究急性髓系白血病(AML)中辅助性T细胞9(T helper cell,Th9)的分布及其与疾病临床特征的关系,同时研究Th9中不同转录因子的激活情况。方法:收集102名AML患者及83名健康人外周血样本,应用CD3磁珠法分离健康人及AML患者外周血T细胞... 详细信息

目的:研究急性髓系白血病(AML)中辅助性T细胞9(T helper cell,Th9)的分布及其与疾病临床特征的关系,同时研究Th9中不同转录因子的激活情况。方法:收集102名AML患者及83名健康人外周血样本,应用CD3磁珠法分离健康人及AML患者外周血T细胞,应用实时定量PCR检测IL-9的mRNA表达,应用流式细胞术检测CD4^+IL-9^+(Th9)细胞在疾病各阶段的比率,以及与IL-9共表达的转录因子激活情况。结果:AML-M2和M3型患者外周血T细胞中IL-9的mRNA表达显著高于健康对照者(P9^+细胞比率也明显高于健康对照者(P9细胞分布动态监测结果表明,初诊M2和M3及复发M2组Th9细胞比率及IL-9 mRNA表达显著高于缓解状态下M2和M3患者(P9表达的转录因子共表达分析表明,初诊及复发M2及M3患者的外周血中p-SMAD3^+的Th9细胞显著多于缓解时M2及M3患者(P9^+细胞显著多于初诊M2及M3患者(P9细胞在AML-M2和M3中分布显著增高,并且与疾病状态相关;对于Th9细胞的功能预测需要与其转录因子结合进行,后者对AML患者体内肿瘤微环境具有重要意义。

关键词：辅助性T细胞白介素9 急性髓系白血病转录因子

Th9细胞及其细胞因子IL-9在慢性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

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中国实验血液学杂志 2023年第6期31卷 1663-1669页

作者：沙巴艾提·吐达洪庞楠楠谢仁古丽·阿力木那扎凯提·依明郭沙张冉冉龚珊曲建华新疆医科大学第一附属医院血液病中心新疆维吾尔自治区血液病研究所新疆乌鲁木齐830054 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所中国科学院生物医学检验技术重点实验室江苏苏州215163

目的:探讨辅助性T细胞9(Th9)比例及其细胞因子白介素9(IL-9)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达水平及临床意义。方法:选取2021年6月至2022年6月于新疆医科大学第一附属医院就诊的43例初诊CLL患者作为病例组,采用Binet分期系... 详细信息

目的:探讨辅助性T细胞9(Th9)比例及其细胞因子白介素9(IL-9)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者外周血中的表达水平及临床意义。方法:选取2021年6月至2022年6月于新疆医科大学第一附属医院就诊的43例初诊CLL患者作为病例组,采用Binet分期系统将病例组分为Binet A组(13例)、Binet B组(20例)和Binet C组(10例),同期在本院体检的20例健康志愿者作为对照组。流式细胞术检测外周血Th9细胞比例,Western blot检测Th9特异性转录因子PU.1和IRF4的表达水平,ELISA检测血清细胞因子IL-9的表达水平。比较各组Th9细胞比例、PU.1、IRF4和IL-9的表达差异;结合患者临床资料分析Th9比例、IL-9与CLL临床病理指标的相关性。结果:CLL组Th9细胞比例、PU.1、IRF4和IL-9的表达均明显高于对照组(P9细胞比例和IL-9的表达均高于Binet A组(P9细胞比例在Binet B组与C组间差异无统计学意义(P> 0.05),IL-9在Binet C组中的表达明显高于Binet B组(P9细胞、IL-9在β2微球蛋白异常、IGHV未突变、TP53异常和肝脾淋巴结肿大患者中高表达,IL-9在肝肿大患者中高表达,而与年龄、性别等因素无关(P> 0.05)。Spearman相关性分析结果显示,CLL患者Th9细胞比例与淋巴细胞计数、淋巴细胞比例呈负相关(rs=-0.32,rs=-0.34),Th9比例、IL-9与Binet分期、Rai分期和CLL-IPI评分呈正相关(rs=0.79,rs=0.54,rs=0.58;rs=0.72,rs=0.63,rs=0.45),而与WBC、CD4+T细胞、CD8+T细胞等因素无关(P> 0.05),Th9比例与IL-9呈正相关(rs=0.53)。结论:Th9细胞和IL-9在CLL中异常高表达,并与CLL不良预后相关。

关键词：慢性淋巴细胞白血病辅助性T细胞9 白介素9 预后

儿童荨麻疹患者血清IL-4、IL-9的临床意义的研究

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临床医学进展 2023年第2期13卷 2077-2082页

作者：董一慧刘婷廷青岛大学山东青岛青岛市第八人民医院山东青岛青岛市妇女儿童医院山东青岛

目的:探讨急性荨麻疹患儿外周血血清中IL-4、IL-9水平情况及其在疾病中的作用。方法:回顾性分析2020年8月至2022年8月急性荨麻疹患儿43例,采用双抗体ELISA法检测患者外周血清中IL-4、IL-9和IFN-γ水平,并与正常对照组进行比较。结果:1)... 详细信息

目的:探讨急性荨麻疹患儿外周血血清中IL-4、IL-9水平情况及其在疾病中的作用。方法:回顾性分析2020年8月至2022年8月急性荨麻疹患儿43例,采用双抗体ELISA法检测患者外周血清中IL-4、IL-9和IFN-γ水平,并与正常对照组进行比较。结果:1) 观察组与对照组相比,IL-4 (45.32 ± 7.43) ng/L、IL-9 (134.45 ± 27.24) ng/L水平均有显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。2) 血清IL-4、IL-9水平变化与急性荨麻疹患儿病情严重程度密切相关(r = 0.41, P 9在儿童急性荨麻疹的发病中发挥了重要作用。

关键词：急性荨麻疹白介素4 白介素9