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番石榴酸对INS-1胰岛β细胞增殖、胰岛素合成与分泌的促进作用及其机制分析

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中国药理学通报 2014年第12期30卷 1681-1687页

作者：叶开和王婧茹马锦锦王小康张晓琦叶文才叶春玲暨南大学药学院药理学教研室广东广州510632 瑞典卡罗林斯卡医学院瑞典斯德哥尔摩17177 暨南大学中药与天然药物研究所广东广州510632

目的考察番石榴酸（guavenoic acid，GA）对 INS-1胰岛β细胞增殖、细胞内胰岛素含量及分泌功能的影响，并探讨其可能的作用机制。方法培养 INS-1胰岛β细胞，给予GA（0.3、1、3、10、30 n·L^－1），并设空白对照组、溶媒对照组（0.1％... 详细信息

目的考察番石榴酸（guavenoic acid，GA）对 INS-1胰岛β细胞增殖、细胞内胰岛素含量及分泌功能的影响，并探讨其可能的作用机制。方法培养 INS-1胰岛β细胞，给予GA（0.3、1、3、10、30 n·L^－1），并设空白对照组、溶媒对照组（0.1％ DMSO）、分泌模型组及阳性药组（150 nmol·L^－1格列苯脲含1‰DMSO），药物作用48 h。应用 MTT 法检测药物对 INS-1的影响。使用酸醇提取液提取细胞中胰岛素，用放射免疫法检测药物对 I 细胞增殖 NS-1细胞内胰岛素含量的影响。分别用5.6、16.7 mmol·L^－1葡萄糖干预细胞1 h建立基础胰岛素分泌模型（BIS）、高糖刺激胰岛素分泌模型（GSIS），用放射免疫法测定药物对 INS-1细胞胰岛素分泌的影响，结果以总蛋白量校正。荧光定量 PCR 法检测药物对INS-1细胞内胰岛素基因、PDX-1、MafA mRNA 表达的影响。结果与溶媒对照组比较，GA 能明显地促进 INS-1胰岛细胞的增殖（P ＜0.01）并能明显增加 INS-1细胞内胰岛素含量（P ＜0.01），0.3～30 nmol·L －1 GA 对 BIS 及 GSIS 均有明显促进作用（P ＜0.05或 P ＜0.01），0.3～30 nmol·L^－1 GA 明显地上调 Insulin mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。3、30 nmol·L^－1 GA 明显地上调 PDX-1 mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。3、30 nmol·L^－1 GA 能明显地上调 MafA mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。结论GA 能促进 INS-1胰岛β细胞增殖；增加细胞内胰岛素含量与分泌量，可能与其上调 Insulin、PDX-1、MafA 基因表达有关。

关键词：番石榴酸 INS-1胰岛β细胞增殖胰岛素合成胰岛素分泌基因表达

番石榴酸改善INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗

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中成药 2015年第4期37卷 710-715页

作者：魏崧丞王婧茹叶开和王小康马锦锦张晓琦叶文才叶春玲暨南大学药学院药理学教研室广东广州510632 瑞典卡罗林斯卡医学院瑞典斯德哥尔摩17177 暨南大学中药与天然药物研究所广东广州510632

目的考察番石榴酸对INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 40 mmol/L葡萄糖干预INS-1胰岛β细胞48 h建立胰岛素抵抗模型,设番石榴酸干预组(0.3、1、3、10、30 nmol/L),以及空白对照组、二甲亚砜对照组,胰岛素... 详细信息

目的考察番石榴酸对INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗的作用,并探讨其可能的作用机制。方法 40 mmol/L葡萄糖干预INS-1胰岛β细胞48 h建立胰岛素抵抗模型,设番石榴酸干预组(0.3、1、3、10、30 nmol/L),以及空白对照组、二甲亚砜对照组,胰岛素抵抗模型组,正钒酸钠组(1 mmol/L)和罗格列酮组(1 mmol/L),药物作用48 h。分别以5.6、16.7 mmol/L葡萄糖干预细胞1 h作为基础胰岛素分泌(BIS)、高糖刺激胰岛素分泌(GSIS)条件,用放射免疫法检测药物对胰岛素分泌的影响,结果以该细胞总蛋白量校正。荧光定量PCR法检测药物对胰岛素抵抗INS-1细胞内PTP1B、PPARγmRNA表达的作用。结果与胰岛素抵抗模型组比较,0.3 nmol/L番石榴酸便能促进胰岛素抵抗INS-1细胞的GSIS(P番石榴酸即可显著促进基础胰岛素分泌(P番石榴酸均能显著下调胰岛素抵抗INS-1细胞的PTP1B mRNA相对表达(P番石榴酸下调作用优于正钒酸钠,上调PPARγmRNA相对表达作用优于罗格列酮。结论番石榴酸能够改善INS-1细胞胰岛素抵抗,可能通过下调PTP1B和上调PPARγ基因表达有关。番石榴酸可能通过改善胰岛β细胞自身胰岛素抵抗而发挥抗糖尿病作用。

关键词：番石榴酸 INS-1胰岛β细胞胰岛素抵抗 PTP1B PPARγ

番石榴酸改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制研究

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番石榴酸改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制研究

作者：马锦锦暨南大学

学位级别：硕士

目的:观察番石榴酸(GA)对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化以及胰岛素抵抗(IR)脂肪细胞葡萄糖消耗、游离脂肪酸产生、脂肪因子分泌的影响,考察药物改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用;并通过观察GA对PTP1B m RNA及PPARγm RNA表达以及IRS-1... 详细信息

目的:观察番石榴酸(GA)对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化以及胰岛素抵抗(IR)脂肪细胞葡萄糖消耗、游离脂肪酸产生、脂肪因子分泌的影响,考察药物改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用;并通过观察GA对PTP1B m RNA及PPARγm RNA表达以及IRS-1、p-IRS-1、akt、p-akt蛋白表达的影响,探讨药物的作用机制。方法:体外常规培养3T3-L1前脂肪细胞,用不同浓度的GA(0.3,1,3,10,30 nmol/L)处理,并设溶媒对照组(0.1%DMSO)、阳性药物组罗格列酮(Ros,10μmol/L)及正钒酸钠(Van,10μmol/L),各组药物均处理48 h后,采用MTT法检测不同药物处理组对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。培养前脂肪细胞并诱导其分化,分化第六天时分组给药处理48 h,油红O染色法观察药物对细胞分化的影响。取分化成熟的脂肪细胞用1μM地塞米松(Dex)作用96 h建立IR模型。在以上分组的基础上增加正常对照组(Control)与模型组(Model),分组给药处理48 h后收集细胞上清液。葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测IR脂肪细胞上清液中葡萄糖消耗量,比色法检测其游离脂肪酸的产生,ELISA法检测其脂肪因子(脂联素、瘦素、TNF-α、抵抗素)的分泌水平。提取细胞中总m RNA,q-PCR检测IR脂肪细胞PTP1B m RNA、PPARγm RNA的表达量;提取细胞中蛋白,Western blot检测IR脂肪细胞中IRS-1、p-IRS-1、akt、p-akt蛋白的表达量。结果:1.对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响与溶媒组比较,Ros与Van极显著促进了3T3-L1前脂肪细胞的增殖(P<0.01),GA(3-30nmol/L)极显著促进前脂肪细胞增殖(P<0.01)并有剂量依赖性;与溶媒组比较,Ros极显著促进前脂肪细胞分化(P<0.01);Van极显著抑制细胞分化(P<0.01);GA(0.3-10 nmol/L)极显著抑制细胞分化(P<0.01),随着剂量增大抑制作用减弱。2.对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖消耗的影响无论在基础状态下还是胰岛素刺激状态下,与IR溶媒组比较,Ros与Van极显著促进了IR脂肪细胞葡萄糖消耗(P<0.01),GA(3,10,30 nmol/L)显著促进了其葡萄糖的消耗(P<0.05或P<0.01)并有剂量依赖性,在30 nmol/L剂量下葡萄糖消耗率最大。3.对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞FFA产生的影响与IR溶媒组比较,Ros与Van极显著抑制了IR脂肪细胞FFA产生(P<0.01);GA(10,30 nmol/L)极显著抑制了其FFA的产生(P<0.01)并有剂量依赖性,在30 nmol/L抑制率最大。4.对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞脂肪因子分泌的影响与IR模型组比较,Ros极显著促进了IR脂肪细胞脂联素分泌(P<0.01),极显著抑制了其瘦素、TNF-α、抵抗素的分泌(P<0.01);Van极显著促进了IR脂肪细胞脂联素分泌(P<0.01),极显著抑制其TNF-α、抵抗素的分泌(P<0.01),对瘦素的分泌无显著作用;GA(0.3,3,30 nmol/L)显著促进其脂联素分泌并抑制TNF-α的分泌(P<0.01),对瘦素与抵抗素的分泌无显著作用。5.对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞PTP1B m RNA与PPARγm RNA表达的影响与IR模型组比较,Van极显著下调了IR脂肪细胞PTP1B m RNA的表达(P<0.01);GA(3,30 nmol/L)显著下调了其PTP1B m RNA的表达(P<0.05,或P<0.01)。与IR模型组比较,Ros极显著上调了IR脂肪细胞PPARγm RNA的表达(P<0.01);GA对其无显著影响。6.对3T3-L1胰岛素抵抗脂肪细胞IRS-1、p-IRS-1、akt、p-akt蛋白表达的影响与IR模型组比较,Van极显著上调IR脂肪细胞p-IRS-1、p-akt蛋白的表达量(P<0.01),对IRS-1、akt蛋白的表达量无显著作用。GA(0.3,3,30 nmol/L)极显著上调了IR脂肪细胞p-IRS-1、p-akt蛋白的表达量(P<0.01)并呈现剂量依赖性,对IRS-1、akt蛋白的表达量无显著作用,与Van作用一致。结论:GA能显著促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖并抑制其分化;显著促进IR脂肪细胞葡萄糖消耗并抑制其FFA产生,具有改善糖脂代谢的作用;显著促进IR脂肪细胞脂联素分泌并抑制TNF-α分泌,具有改善IR的作用。GA改善胰岛素抵抗的作用机制可能是由于GA显著下调IR脂肪细胞PTP1B m RNA表达并上调其p-IRS-1、p-akt蛋白表达,从而改善了

关键词：番石榴酸胰岛素抵抗葡萄糖消耗游离脂肪酸脂肪因子 PTP1B m RNA PPARγmRNA IRS-1 p-IRS-1 akt p-akt

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番石榴酸及其差向异构体的合成

高等学校化学学报 1987年第7期8卷 620-622页

作者：聂新永王茜李裕林潘鑫复兰州大学有机化学研究所

番石榴酸(Piscidicacid)8是从Piscidacrgthrina中分离得到的一种水溶性化合物,1948年***等证明其结构为对羟基苄基酒石酸,1971年***等确定其绝对构型为(2R,3S),1981年发现它具有明显的药理作用。

关键词：水溶性化合物差向异构体绝对构型番石榴酸药理作用酒石酸

HPLC法同时测定复方苦参注射液中7个成分含量及指纹图谱研究

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药物分析杂志 2022年第7期42卷 1101-1109页

作者：王鹏飞王京辉段秀梅张亚锰毕小凤海丽娜游蓉丽北京振东光明药物研究院有限公司北京100085 北京市药品检验所中药成分分析与生物评价北京市重点实验室北京102206

目的:建立HPLC法同时测定复方苦参注射液中7个成分(甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱、番石榴酸)的含量及指纹图谱研究,为其质量控制提供依据。方法:采用Waters Xselect CSH^(TM)C_(18)色谱柱... 详细信息

目的:建立HPLC法同时测定复方苦参注射液中7个成分(甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱、番石榴酸)的含量及指纹图谱研究,为其质量控制提供依据。方法:采用Waters Xselect CSH^(TM)C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以甲醇-0.2%磷酸二氢钾为流动相,梯度洗脱,流速0.6 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长211 nm。结果:在建立的液相色谱条件下,测定的甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷、苦参碱、槐果碱、槐定碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱、番石榴酸7个成分的平均加样回收率分别为95.7%、101.3%、100.8%、101.7%、102.6%、102.5%、99.5%,RSD分别为2.0%、0.72%、0.90%、0.74%、1.4%、0.96%、1.8%;10批次样品中7个成分的含量分别为0.53~0.73、2.66~4.22、0.75~1.11、0.70~0.89、2.20~2.84、7.62~9.95、1.63~2.20 mg·mL^(-1)。在相同液相色谱条件下建立的指纹图谱测定方法确立了9个共有峰,生成对照图谱,10批样品的相似度测定结果在0.99以上。结论:本研究同时对复方苦参注射液的主要成分进行定量分析和指纹图谱进行定性分析,含量测定准确,指纹峰特征性强,该方法稳定可靠,可为复方苦参注射液的质量控制与评价提供参考。

关键词：复方苦参注射液高效液相色谱甲基氧化偶氮甲醇樱草糖苷苦参碱槐果碱槐定碱氧化槐果碱氧化苦参碱番石榴酸指纹图谱相似度

基于苦参药材生存周期的栽培与野生品品质比较研究

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基于苦参药材生存周期的栽培与野生品品质比较研究

作者：姚丽广东药科大学

学位级别：硕士

苦参为豆科植物苦参Sophora flavsecens Ait.的干燥根,多生于山地,草坡灌木林中,喜阴生长、多丛生。作为传统中药,苦参始载于《神农本草经》被列为中品,主产于山西、河北、河南等地,其性寒、味极苦,具有抗炎、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等多... 详细信息

苦参为豆科植物苦参Sophora flavsecens Ait.的干燥根,多生于山地,草坡灌木林中,喜阴生长、多丛生。作为传统中药,苦参始载于《神农本草经》被列为中品,主产于山西、河北、河南等地,其性寒、味极苦,具有抗炎、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等多种药理活性。因其疗效确切,在临床上应用广泛,对野生资源苦参需求快速增长,致使野生苦参面临乱挖殆尽的风险。为弥补野生药源的不足,近年来苦参开始了人工种植品,并大量上市,并建有GAP基地一个。但苦参作为传统中药,历代均以野生品入药,人工种植品年限较短,缺乏可借鉴的经验,且缺乏系统的同质性评价,因此开展苦参的栽培品与野生品的品质比较对于保证用药安全和临床疗效至关重要。本文在传统经验鉴别基础上,引入现代质量评价体系和标准,从外观性状、主要药效成分、特征指纹图谱等方面按照TOE(Totality-Of-the Evidence)思路进行系统多证据的评价研究,以期为苦参的人工种植和可持续发展提供数据支撑。本课题的研究重点在于苦参野生与栽培品之间的质量比较,为保证实验结果的准确可靠,所有样本均为亲自采集。在系统梳理苦参的资源分布的基础上,设计合理的采集路线,并制定详细的代表性样本采集方案,以保证样品和数据的可比性、结果的可靠性。样本采集涉及了山西、陕西、甘肃、内蒙、河北、重庆、贵州、广西及四川等地,所有样本均作详细地理信息记录,并保证有足够的样本量以完成本研究,并作留样观察,以备复核验证。同时,考虑到苦参传统的采收季节为春秋两季,为排除采收季节不同带来的可能差异,在对不同采收季节的样本收集时,选择同一地域以消除地域可能产生的差异。秋季共采集到野生样本85份,栽培品66份;春季采收栽培品13份。本文重点在于栽培品与野生品的化学质量对比研究,采用TOE评价法,对苦参中的各类化学成分,如生物碱类、黄酮类、有机酸类及多糖类成分进行分析,以期从更全面的质量信息来评价其异同性。1、生物碱成分在苦参研究中报道最多的有效成分,本研究从其含量较高的6种生物碱(氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、N-甲基野靛碱、苦参碱及槐果碱)入手,进行系统的化学计量学分析,得出结论是:栽培与野生品之间无明显差异。2、黄酮类成分是苦参中另一类重要的有效成分,因研究较少,本文对其提取条件及色谱条件等进行了优化,经系统的方法学验证,建立了10种黄酮类成分同时测定的HPLC法,填补了苦参多黄酮成分质量评价的空白。研究发现:栽培品与野生品的黄酮类成分亦无明显差异。3、有机酸类成分是苦参中新发现的一类重要成分,一直未见报道,我们前期发现苦参含有大量番石榴酸,该成分具有良好的生物活性,且在药材中对生物碱成分的积累起到关键作用。本文首次建立了苦参中番石榴酸的含量测定方法,以全面把握苦参次生代谢产物的整体轮廓。结果发现:番石榴酸含量在3%-4%,在栽培品与野生品间的含量亦无明显差异。4、多糖类成分是所有植物的共有成分,它对于植物的生长、药效的表达具有贡献,为全面评价苦参质量,论文在建立含量测定方法的基础上,使其可测成分大幅度提高到30%左右。研究结果表明:栽培与野生品间的多糖含量亦无显著差异。5、“全成分”指纹特征:从35批药材甲醇提取液的指纹图谱分析发现,野生品与栽培品间无明显差异,且不同地域间的相似度较高,说明苦参的地域适宜性强。6、传统鉴别:从饮片横截面看,栽培品较密实,且木质部与韧皮部不易分离,而野生品饮片断面则多疏松,且木质部与韧皮部常剥离;两者容易分辨。但从粉末鉴别上,因为均具有苦参的典型粉末鉴别特征而无法将二者区分。7、植物形态:栽培品叶片较厚、翠绿、较大且密集,茎秆粗壮,节间距较窄,根系较发达,须根较多;野生品则叶片较薄、偏黄、较稀疏,茎秆较细,柔韧性较好,节间距较大。能够区分。综上,本文利用TOE思路对苦参药材的栽培品与野生品进行了系统质量评价,得出了栽培品与野生品具有质量一致性的结论,药材质量是疗效的根本,其质量均质性的结论仍需主要药效学(与苦参功效相关性者)评价来得出全面的最后结论。

关键词：苦参野生与栽培 TOE法生物碱黄酮番石榴酸

基于谱效关系的金莲花抗肠道病毒71型物质基础研究

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山东中医药大学学报 2022年第3期46卷 386-392页

作者：张天泽郭威赵怀龙李双双王亮北京中医药大学北京100105 山东省妇幼保健院山东济南250014 济南市疾病预防控制中心山东济南250021

目的:对金莲花抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)物质基础进行研究。方法:通过建立超高效液相色谱-串联二极管阵列检测器-飞行时间质谱(UPLC-DAD-TOF/MS)指纹图谱对金莲花物质基础进行表征,通过噻唑蓝(MTT)法对金莲花抗EV71病毒抑制... 详细信息

目的:对金莲花抗肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)物质基础进行研究。方法:通过建立超高效液相色谱-串联二极管阵列检测器-飞行时间质谱(UPLC-DAD-TOF/MS)指纹图谱对金莲花物质基础进行表征,通过噻唑蓝(MTT)法对金莲花抗EV71病毒抑制率进行检测,通过正交偏最小二乘法(OPLS)和灰色关联分析法(GRA)对金莲花物质基础和病毒抑制率进行谱效相关关联分析。结果:建立了20批次金莲花样品的指纹图谱,标定了31个共有峰,并进行了质谱解析;建立了金莲花对EV71抑制率检测方法,20批次金莲花的病毒抑制率为49.64%~73.69%;OPLS和GRA分析结果表明,共有峰12、13、14、18可能为金莲花抗EV71物质基础。结论:共有峰12(番石榴酸)、13(未鉴定的生物碱成分)、14(对羟基苯甲苹果酸)和18(2″-O-乙酰基荭草苷)可能为金莲花抗EV71物质基础,此可为金莲花质量标准的建立和金莲花抗病毒研究提供借鉴和数据支持。

关键词：金莲花肠道病毒71型谱效关系番石榴酸对羟基苯甲苹果酸 2″-O-乙酰基荭草苷物质基础病毒抑制率

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米邦塔仙人掌两种化学成分鉴定及定量分析

食品与药品 2021年第6期23卷 504-508页

作者：金唯一李壮壮吴嘉朔张方晴康维钧石钺中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193 河北医科大学公共卫生学院河北石家庄050017

目的鉴定米邦塔仙人掌的化学成分并进行定量分析。方法采用高效液相色谱法(HPLC)和核磁共振波谱分离和鉴定化合物。建立了同时测定两种成分的定量方法:采用Kromasil100AC1 8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)溶液为... 详细信息

目的鉴定米邦塔仙人掌的化学成分并进行定量分析。方法采用高效液相色谱法(HPLC)和核磁共振波谱分离和鉴定化合物。建立了同时测定两种成分的定量方法:采用Kromasil100AC1 8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为275 nm,流速1.0 ml/min,柱温30℃;进样量10μl。结果从米邦塔仙人掌中分离鉴定出2个化合物,分别是5-羟甲基-2-呋喃甲醛(1)和番石榴酸(2),番石榴酸为首次在该植物中分离得到。定量方法的精密度、重复性和稳定性均符合要求,5-羟甲基-2-呋喃甲醛和番石榴酸线性范围分别为5~150μg/ml(R^(2)=0.9992),10~1200μg/ml(R^(2)=0.9997),加样回收率均在90%~110%范围内,RSD均小于3%。结论本文建立了一种准确稳定地检测米邦塔仙人掌中化学成分的方法,可为其开发利用提供参考。

关键词：米邦塔仙人掌 5-羟甲基-2-呋喃甲醛番石榴酸高效液相色谱定量分析