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人血清中小分子蛋白质的电洗脱回收

现代预防医学 2007年第19期34卷 3625-3626+3630页

作者：韦霄何敏蒋智华农炳金覃健张志勇广西疾病预防控制中心 2. 广西医科大学医学科学实验中心广西医科大学公共卫生学院

[目的]建立一种快速简便的回收分子量﹤10000 Da低丰度蛋白质的电洗脱方法。[方法]采用改进后的聚丙烯酰胺凝胶电泳和电洗脱方法分离纯化小分子标志蛋白,利用SELDI技术检测回收后的标志蛋白。[结果]SELDI技术检测发现,改进后的电泳和电... 详细信息

[目的]建立一种快速简便的回收分子量﹤10000 Da低丰度蛋白质的电洗脱方法。[方法]采用改进后的聚丙烯酰胺凝胶电泳和电洗脱方法分离纯化小分子标志蛋白,利用SELDI技术检测回收后的标志蛋白。[结果]SELDI技术检测发现,改进后的电泳和电洗脱方法能有效分离并回收10000 Da以下的低丰度蛋白质。[结论]改进后的电洗脱方法,不仅快速简便,而且还有利于蛋白质的后续鉴定。

关键词：蛋白质纯化电洗脱回收 SELDI

新型电洗脱装置—凝胶电泳联用分离制备蛋白质

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新型电洗脱装置—凝胶电泳联用分离制备蛋白质

作者：陈静静上海交通大学

学位级别：硕士

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是一种不可或缺的蛋白质定量和定性工具。其成本低、分辨率高、易操作,能分离制备多种生物分子,制备分离的生物分子可以用于多种下游应用,例如蛋白质化学、多肽检测、抗原检测等。如何从凝胶中回收蛋白质一直... 详细信息

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是一种不可或缺的蛋白质定量和定性工具。其成本低、分辨率高、易操作,能分离制备多种生物分子,制备分离的生物分子可以用于多种下游应用,例如蛋白质化学、多肽检测、抗原检测等。如何从凝胶中回收蛋白质一直是科学家关注的问题,目前,从胶内回收蛋白质的方法大致可以分为三类:被动扩散、溶解胶、电洗脱。电洗脱的使用最为普遍,其原理为在电场力作用下,蛋白质从凝胶内迁移至周围溶液,该方法条件温和,不涉及苛性试剂。但是传统电洗脱法分离制备蛋白质仍然存在一些问题,例如操作复杂、耗时长、回收率低,以及洗脱所得蛋白质浓度过低,需要进一步浓缩才能用于下游应用。针对制备型凝胶电泳回收蛋白质存在的上述问题,本文设计了一款从凝胶中回收蛋白质的新型环形电洗脱装置,并应用于生物样品的分离制备。具体的研究内容包括:(1)环形电洗脱装置的设计及可行性验证。基于实验室之前的电洗脱装置,本文设计并通过Multiphysics软件和CNC精雕加工机自加工了新型环形电洗脱装置。该装置由两个部分组成:圆柱形的阴极槽和阳极槽,阴极槽包括环形的用于放置目标蛋白质凝胶条带和阴极的环形洗脱孔、用于回收目标蛋白质的中央富集孔,富集孔底部用半透膜封口。阳极槽为中空实底的圆柱体,用于放置阳极和洗脱缓冲,阴极槽置于阳极槽上。在电场作用下,目标蛋白质从凝胶条带中迁移至洗脱缓冲液中,洗脱下来的蛋白质由于在洗脱缓冲液中带负电荷,会在电场作用下继续向阳极迁移,从而迁移至富集孔,完成电洗脱。最后用模型蛋白质对新设计的环形电洗脱装置进行了性能评价,并于传统电洗脱装置进行了比较,结果显示新设计的环形电洗脱装置洗脱具有洗脱时间短、蛋白质浓度高、回收率高、操作简单、可重复使用等优点。(2)环形电洗脱装置与制备型SDS-PAGE联用,从血清中分离制备HSA。为了验证所设计的环形电洗脱装置从实际样本中分离纯化目标蛋白质的可行性,本部分以人血清为样本,通过从血清中分离纯化人血清白蛋白质(HSA)来考察新设计的环形电洗脱装置的性能。首先优化了环形电洗脱装置洗脱条件,包括电压、电泳洗脱时间。在优化的条件下(洗脱时间为30 min,洗脱电压为200 V),成功从复杂样品血清中分离制备出高浓度的HSA,验证了环形电洗脱装置与SDS-PAGE联用根据分子量大小分离制备蛋白质的能力。(3)环形电洗脱装置与制备型IPG-IEF-PAGE联用,从糖尿病人血液中分离制备糖尿病分子标记物糖化血红蛋白质。本部分先探索IPG-IEF-PAGE分离糖化血红蛋白质的条件:IPG-IEF-PAGE的pH范围为6–9、电泳过程的电压和时间。然后成功从病人糖尿病人血液中分离制备糖化血红蛋白质,经SDS-PAGE和HPLC分析其纯度高达95.48%,验证了环形电洗脱装置与IPG-IEF-PAGE联用等电点不同从复杂样品中分离制备生物标志物的能力。

关键词：电洗脱聚丙烯酰胺凝胶制备型电泳蛋白质

一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简单电洗脱装置

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中国组织化学与细胞化学杂志 1995年第1期4卷 102-104页

作者：蔡维君刘里侯刘正清刘裕民湖南医科大学心血管形态研究室

我们设计了一种简单电洗脱装置，从琼脂糖胶中回收ＤＮＡ。该装置由两个带旋盖的小管、两块透析膜和一个凝胶屏障组成。在电场作用下，ＤＮＡ从凝胶中迁移出来，通过凝胶屏障进入由凝胶屏障和透析膜组成的回收小仓。用微量吸样器收集Ｄ... 详细信息

我们设计了一种简单电洗脱装置，从琼脂糖胶中回收ＤＮＡ。该装置由两个带旋盖的小管、两块透析膜和一个凝胶屏障组成。在电场作用下，ＤＮＡ从凝胶中迁移出来，通过凝胶屏障进入由凝胶屏障和透析膜组成的回收小仓。用微量吸样器收集ＤＮＡ，乙醇沉淀和清洗。该法ＤＮＡ的回收率约８５％；回收的ＤＮＡ可用于基因工程常规实验。

关键词：琼脂糖透析膜电洗脱 DNA回收

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一种快速纯化蛋白的电洗脱方法

生物技术 2004年第2期14卷 30-31页

作者：景巍王转花山西大学生物技术研究所山西太原030006

以TB2 4kDa蛋白为例介绍了一种快速纯化蛋白的电洗脱方法。根据作者实验室先前建立的提取苦荞种子蛋白的方法制备TB2 4kDa蛋白粗提物 ,利用阴离子交换层析和改进的电泳洗脱方法对其进行纯化。结果显示 :经改进的电洗脱纯化 ,1mg粗蛋白... 详细信息

以TB2 4kDa蛋白为例介绍了一种快速纯化蛋白的电洗脱方法。根据作者实验室先前建立的提取苦荞种子蛋白的方法制备TB2 4kDa蛋白粗提物 ,利用阴离子交换层析和改进的电泳洗脱方法对其进行纯化。结果显示 :经改进的电洗脱纯化 ,1mg粗蛋白可以回收得到 15 0 μg左右的目的蛋白 ,回收率为 15 .32 % ,纯化效果较理想。

关键词：纯化蛋白电洗脱 TB24 kDa SDS-PAGE 生物化学

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介绍一种简便快速的电洗脱方法

生物学杂志 1988年第5期 34-35页

作者：张振生买凯河南省医科所

凝胶电泳是研究核酸、蛋白质等生物大分子的一项重要技术,也是 DNA 的限制性内切酶切割片断的分析、分离、纯化的一种不可缺少的方法。这样,就时常需要将某些大分子或片段从凝胶中分离纯化出来,所采用的方法很多,如渗滤法、连续电泳洗... 详细信息

凝胶电泳是研究核酸、蛋白质等生物大分子的一项重要技术,也是 DNA 的限制性内切酶切割片断的分析、分离、纯化的一种不可缺少的方法。这样,就时常需要将某些大分子或片段从凝胶中分离纯化出来,所采用的方法很多,如渗滤法、连续电泳洗脱法、透析法等等。但是,所有这些方法都或多或少地受到诸如分子大小、回收率、纯化时间等方面的限制。联邦德国 Schleicher and Schuell 公司最近推出了新型的电洗脱仪,用于从凝胶中分离生物大分子,并可对样品进行浓缩。经我们实验室使用,效果很好。现特作介绍,供国内同

关键词：电洗脱收集槽缓冲液电泳槽凝胶电泳

用琼脂糖包埋——小室电洗脱纯化DNA的新方法

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莱阳农学院学报 1999年第2期16卷 84-86页

作者：郭宝太刘学锋莱阳农学院农学系

先将５５℃保温的ＤＮＡ粗提液与１．２％琼脂糖凝胶等体积混合，然后把混合物注入由１．５ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ离心管制作的小室电洗脱装置进行电洗脱纯化。纯化后的ＤＮＡ能被限制性内切酶完全酶解，其纯度足以进行Ｓｏｕｔｈｅｒ... 详细信息

先将５５℃保温的ＤＮＡ粗提液与１．２％琼脂糖凝胶等体积混合，然后把混合物注入由１．５ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ离心管制作的小室电洗脱装置进行电洗脱纯化。纯化后的ＤＮＡ能被限制性内切酶完全酶解，其纯度足以进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等分析。该法具有所需条件简单、操作方便且花费低等特点，可作为常规的ＤＮＡ纯化方法。

关键词：琼脂糖包埋电洗脱 DNA纯化酶切

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一种超滤管电洗脱装置及应用研究

北京生物医学工程 2010年第4期29卷 399-401页

作者：朱智强牛勃首都儿科研究所北京100020 山西医科大学科技处太原030001

目的介绍一种自制超滤管电洗脱装置的制作方法,并与其他洗脱方法进行比较。方法以超滤管离心管、滤网和海绵制作成超滤电洗脱装置。待分离的蛋白样品用非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离后染色、切胶、碎胶后,分别用上述自制超滤电洗脱装置、... 详细信息

目的介绍一种自制超滤管电洗脱装置的制作方法,并与其他洗脱方法进行比较。方法以超滤管离心管、滤网和海绵制作成超滤电洗脱装置。待分离的蛋白样品用非变性聚丙酰胺凝胶电泳分离后染色、切胶、碎胶后,分别用上述自制超滤电洗脱装置、被动洗脱法和半透膜电洗脱法回收凝胶中的蛋白样品,再通过超滤离心进行脱盐浓缩。最后用Bradford法测定样品浓度,并比较三种洗脱方法的洗脱效率。结果超滤管电洗脱、被动洗脱和半透膜电洗脱分成0.5μg和5μg两组,以三种电洗脱法的蛋白回收率依次为:0.5μg组82%、44%、46%;5μg组77%、58.6%、63.6%。结论用超滤管自制的电洗脱装置制作简单方便,其回收效率比被动扩散法和半透膜电洗脱法高,特别适用于小量蛋白样品的回收。

关键词：电洗脱超滤被动扩散法半透膜电洗脱法

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大肠杆菌表达蛋白的电洗脱纯化

第四军医大学学报 1994年第2期15卷 147-147页

作者：颜真迟立群苏成芝第四军医大学生物技术中心

大肠杆菌表达蛋白的电洗脱纯化颜真，迟立群，苏成芝（生物化学教研室）关键词基因表达；电洗脱；蛋白纯化中图法分类号Ｒ３３４原核系统表达的外源基因多以包涵体形式存在，为表达蛋白的进一步纯化与复性增加了困难．我们以假肥大型肌... 详细信息

大肠杆菌表达蛋白的电洗脱纯化颜真，迟立群，苏成芝（生物化学教研室）关键词基因表达；电洗脱；蛋白纯化中图法分类号Ｒ３３４原核系统表达的外源基因多以包涵体形式存在，为表达蛋白的进一步纯化与复性增加了困难．我们以假肥大型肌营养不良（ＤＭＤ）基因片段在大肠杆...

关键词：基因表达电洗脱蛋白纯化

凝胶中荧光颗粒原位电泳洗脱过量异硫氰酸荧光素用于图像分析

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色谱 2022年第7期40卷 610-615页

作者：陈国宏郭泽华曹毅仁樊柳荫刘伟文马艺馨曹成喜张强上海交通大学电子信息与电气工程学院上海200240 上海交通大学附属上海第六人民医院上海200240 上海交通大学学生创新中心上海200240

去除荧光标记后残余荧光染料可以提高荧光颗粒检测的灵敏度、准确度和效率。该文发展了一种原位电泳洗脱(electrophoretic elution,EE)模型,用于在荧光标记后快速去除多余的荧光探针,实现荧光颗粒的灵敏检测。将牛血清蛋白(BSA)和磁珠(M... 详细信息

去除荧光标记后残余荧光染料可以提高荧光颗粒检测的灵敏度、准确度和效率。该文发展了一种原位电泳洗脱(electrophoretic elution,EE)模型,用于在荧光标记后快速去除多余的荧光探针,实现荧光颗粒的灵敏检测。将牛血清蛋白(BSA)和磁珠(MBs)作为模式蛋白和微颗粒,混合孵育获得MBs-BSA,用异硫氰酸荧光素(FITC)对MBs-BSA标记,得到MBs-BSA_(FITC)复合物。将含有多余FITC的MBs-BSA_(FITC)溶液与低凝聚温度琼脂糖凝胶溶液按1∶5的体积比混合,并将混合物凝胶和纯琼脂糖凝胶分段填充到电泳通道中。电泳过程中,利用颗粒尺寸与凝胶孔径的差异来保留MBs-BSA_(FITC),同时将游离的FITC洗脱。经过30 min的电泳洗脱,通道内多余的FITC清除率达到97.6%,同时目标颗粒荧光信号保留了27.8%。成像系统曝光时间为1.35 s时,电泳洗脱将颗粒与背景的荧光信号比(P/B ratio,PBr)从1.08增加到12.2。CCD相机的曝光时间增加到2.35 s,可以将PBr提高到15.5,可进一步实现对微弱荧光亮点的高灵敏检测。该模型有以下优点:(1)能对颗粒表面非特异性吸附的FITC实现有效洗脱,提高了检测的特异性;(2)能够将97%以上的游离FITC清除;(3)30 min内能够使凝胶内的背景荧光大幅降低,提高了PBr和检测灵敏度。因此,该方法具有在凝胶中进行基于磁珠/荧光颗粒点的免疫检测、在免疫电泳或凝胶电泳中对蛋白质/核酸条带进行荧光染色等领域的应用潜力。

关键词：电泳电洗脱荧光颗粒图像检测