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甘金解毒癒疡含漱液开发研究

甘金解毒癒疡含漱液开发研究

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作者：黄春桃广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:甘金解毒癒疡含漱液由金花茶叶、甘蔗叶等中药组成,是全国名老中医药专家学术经验继承工作指导老师邓家刚教授组的方,具有清热解毒,祛腐癒疡的功效,可用于治疗肿瘤化疗后口腔火毒蚀肉,糜烂疼痛,津伤咽干。本课题按照医疗机构制剂... 详细信息

目的:甘金解毒癒疡含漱液由金花茶叶、甘蔗叶等中药组成,是全国名老中医药专家学术经验继承工作指导老师邓家刚教授组的方,具有清热解毒,祛腐癒疡的功效,可用于治疗肿瘤化疗后口腔火毒蚀肉,糜烂疼痛,津伤咽干。本课题按照医疗机构制剂的申报要求,将中医药理论与现代科学技术结合,优选该产品的制备工艺,制定一套稳定、可控、合理的质量标准,并对其药效作用及安全性进行研究,为该产品申报医疗机构制剂提供实验数据,为研发中医药特色的含漱剂提供参考。方法:1.制备工艺研究:采用紫外-可见分光光度法测定甘金解毒癒疡含漱液总多糖的含量;建立一测多评（QAMS）法测定甘金解毒癒疡含漱液原儿茶酸、咖啡酸、异嗪皮啶、菊苣酸、Okicamellia、迷迭香酸的含量;采用单因素试验,对提取时间、提取次数、料液比3个因素分别进行考察,再结合正交设计实验L（3）,以总归一值（OD值）为评价指标,优选最佳制备工艺。2.质量标准研究:参照《中国药典》2020年版技术质量规范,考察含漱液性能指标;采用薄层鉴别技术（TLC）鉴别甘金解毒癒疡含漱液中金花茶叶、甘蔗叶等五味药,从薄层板、展开剂、显色剂、温度、湿度等影响因素中筛选最优的薄层色谱条件;采用高效液相色谱法建立甘金解毒癒疡含漱液的指纹图谱;采用QAMS法测定了甘金解毒癒疡含漱液中原儿茶酸、咖啡酸、异嗪皮啶、菊苣酸、Okicamellia、迷迭香酸六种成分的含量,并制定各成分的含量限度。3.药效研究:通过建立金黄地鼠化疗性口腔黏膜炎模型,观察甘金解毒癒疡含漱液对化疗性口腔黏膜炎模型金黄地鼠一般状态的影响,并对金黄地鼠的颊囊炎症情况进行评分;ELISA法检测金黄地鼠血清肿瘤坏死因子γ（TNF-γ）、白细胞介素1（IL-1）、白细胞介素6（IL-6）、干扰素α（IFN-γ）水平;HE染色观察金黄地鼠颊囊组织病理改变;免疫组化法检测金黄地鼠颊囊组织中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、环氧化酶2（COX-2）、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）蛋白表达水平。3.安全性评价:甘金解毒癒疡含漱液的急性毒性试验采用小鼠和大鼠两种动物,分别研究灌胃给药毒性和口腔给药毒性。按最大给药量法,小鼠用甘金解毒癒疡含漱液（浓度为1.09 g/ml）灌胃给药,灌胃容积为0.3 ml/10 g;大鼠用甘金解毒癒疡含漱液（浓度为1.09 mg/ml）口腔给药0.5 ml/次,4次/d,观察给药前后情况。甘金解毒癒疡含漱液的局部毒性试验,选用新西兰大白兔和豚鼠,分别进行甘金解毒癒疡含漱液的皮肤刺激试验和过敏试验。结果:1.制备工艺研究:建立了甘金解毒癒疡含漱液总多糖的测定方法,总多糖的线性范围为0.01147 mg～0.1147 mg（R=0.99979）,精密度RSD为0.45%,重复性RSD为0.64%,稳定性RSD为0.45%,加样回收率RSD为0.93%;建立了QAMS法测定甘金解毒癒疡含漱液原儿茶酸、咖啡酸、异嗪皮啶、菊苣酸、Okicamellia、迷迭香酸的含量,原儿茶酸、咖啡酸、异嗪皮啶、菊苣酸、Okicamellia、迷迭香酸线性范围分别为12.02～120.18μg/ml（R=0.99995）、25.92～259.20μg/ml（R=0.99998）、18.40～184.00μg/ml（R=0.99995）、109.98～1099.80μg/ml（R=0.99996）、46.65～466.48μg/ml（R=0.99966）、14.00～140.00μg/ml（R=0.99997）,精密度RSD分别为0.14%、0.14%、0.18%、0.24%、0.21%、0.44%,稳定性RSD分别为0.52%、0.93%、1.29%、1.29%、1.52%、1.04%,重复性RSD分别为0.91%、0.56%、0.94%、0.92%、1.06%、1.08%,加样回收率RSD分别为1.49%、0.63%、1.61%、1.72%、0.66%、1.76%,原儿茶酸、咖啡酸、异嗪皮啶、Okicamellia、迷迭香酸相对校正因子RSD分别为0.44%、0.10%、0.66%、0.93%、0.99%;根据总评价归一值并结合实际成本考虑,选定提取时间1、1.5、2 h,提取次数2、3、4次,料液比1:15、1:20、1:25倍进行正交设计实验,正交实验方差分析表明各因素对提取效果均无显著性影响（P>0.05）,综合评分表明最佳制备工艺为取时间1.5 h,提取次数4次,料液比1:15倍;验证实验结果表明,3次重复实验归一化平均值为0.91,RSD为2.71%,说明该制备工艺稳定,合理。2.质量标准研究:通过对甘金解毒癒疡含漱液性能指标的考察可知含漱液具薄荷香味、澄清、pH（25℃）范围3.8～4.2、相对密度（20℃）1.0012～1.0032,于4℃贮存24 h,少许冻结;40℃贮存24 h无浑浊,色泽稳定;采用薄层色谱法对甘金解毒癒疡含漱液中的金花茶叶、

关键词：甘金解毒癒疡含漱液制备工艺质量标准药效安全性

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