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甘蔗条纹花叶病毒HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg基因酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

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华北农学报 2016年第1期31卷 83-89页

作者：翟玉山彭磊杨永庆邓宇晴程光远郑艳茹徐景升福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点实验室福建福州350002

为探索甘蔗条纹花叶病毒与甘蔗的互作机制,利用酵母双杂交技术筛选与SCSMV互作的甘蔗因子基因,利用PCR技术克隆了SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的编码区,构建到酵母双杂交诱饵载体p GBKT7上,获得了p GBKT7-HC-Pro、p GBKT7-P3N-PIPO... 详细信息

为探索甘蔗条纹花叶病毒与甘蔗的互作机制,利用酵母双杂交技术筛选与SCSMV互作的甘蔗因子基因,利用PCR技术克隆了SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的编码区,构建到酵母双杂交诱饵载体p GBKT7上,获得了p GBKT7-HC-Pro、p GBKT7-P3N-PIPO、p GBKT7-CP和p GBKT7-VPg 4个诱饵载体。结果显示,将重组质粒转化酵母Y2HGold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板上生长良好,表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性;在SD/-Trp/X-α-gal平板上长出白色菌落未变蓝,在SD/-Leu、SD/-Trp/-Ade、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/X-α-gal/Ab A平板上不能生长,表明重组诱饵质粒表达产物对MEL1、ADE2、HIS3和AUR1-C报告基因无自激活作用。构建的诱饵表达载体可以作为诱饵用于文库筛选,为探索SCSMV侵染机制和发病机理奠定了基础。

关键词：甘蔗条纹花叶病毒 HC-Pro P3N-PIPO CP VPg 诱饵载体酵母双杂交

甘蔗条纹花叶病毒分子遗传进化及其编码的RNA沉默抑制子功能鉴定

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甘蔗条纹花叶病毒分子遗传进化及其编码的RNA沉默抑制子功能鉴定

作者：付卫林福建农林大学

学位级别：硕士

甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)主要分布在包括中国在内的亚洲国家,是甘蔗花叶病病原之一,属于马铃薯Y病毒科禾本科病毒属Poacevirus的成员。本研究根据SCSMVcp序列设计了 1对特异性引物和1条TaqMan探针,并建... 详细信息

甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)主要分布在包括中国在内的亚洲国家,是甘蔗花叶病病原之一,属于马铃薯Y病毒科禾本科病毒属Poacevirus的成员。本研究根据SCSMVcp序列设计了 1对特异性引物和1条TaqMan探针,并建立了一步法检测SCSMV的荧光定量RT-PCR方法。结果表明该方法具有较高的特异性,与SCMV、SrMV、SCYLV等多种甘蔗病毒无交叉反应,可以检测到100拷贝的ssRNA或者2 pg的甘蔗叶片总RNA。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对35份田间疑似感病样品进行平行检测,结果荧光定量RT-PCR检出率为68.6%,高于常规RT-PCR方法(48.6%)。建立的荧光定量RT-PCR方法特异性好、灵敏度高,而且快速简便,可应用于SCSMV的检验检疫和流行病学调查。随后,克隆了两个SCSMV中国分离物(YN-YZ211和HN-YZ49)和一个缅甸分离物(MAY-Formosa)全基因组序列。一致性分析表明,他们之间的全基因组及多聚蛋白氨基酸序列一致性分别为96.8-99.5%和98.9-99.6%,与其他地理来源的分离物相比,分别为81.5-98.8%和94.0-99.6%。基于多聚蛋白氨基酸序列的系统进化分析显示,10个SCSMV亚洲分离物可以划分为两个不同进化分支(G-1和G-2),其中G-1包括来自中国、缅甸、日本、印度、印度尼西亚和泰国的8个分离物,G-2包含印度的IND671分离物和巴基斯坦的PAK分离物。G-1和G-2两组种群之间存在高度遗传变异性,全基因组核苷酸和多聚蛋白氨基酸序列一致性分别为80.6-81.8%和94.0-95.3%。种群之间存在明显的遗传分化,基因交流不频繁。G-1种群内没有明显的遗传分化,基因交流频繁,且存在重组现象。选择压力分析发现P1蛋白有一个氨基酸残基为正向选择位点。最后,利用基因枪轰击甘蔗嫩叶和农杆菌共浸润本氏烟16C的瞬时表达系统,鉴定SCSMV编码的P1蛋白沉默抑制子功能。SCSMV编码的P1、HC-Pro和P1/HC-Pro基因连同EYFP报告基因分别导入甘蔗嫩叶组织细胞,结果显示P1基因能够显著提高外源基因EYFP表达水平,轰击72小时后,EYFP荧光表达细胞数目和荧光强度显著增加,与不含目的基因(pUbi-Nos)阴性对照相比,分别提高1.74倍和2.27倍;P1/HC-Pro基因略有提高EYFP荧光表达水平;而HC-Pro基因没有提高EYFP荧光表达水平。农杆菌共浸润本氏烟16C结果表明,P1显著提高本氏烟叶片GFP荧光表达,共注射3天后(3 dpi),P1及GFP的mRNA表达量最高,分别为阴性对照组的382倍和16倍;P1/HC-Pro也能提高本氏烟叶片GFP荧光表达,共注射1 d后(1 dpi),P1/HC-Pro及GFP的mRNA表达量最高;HC-Pro没能提高本氏烟叶片GFP荧光表达,HC-Pro及GFP的mRNA表达量一直处于较低水平,与阴性对照相当。我们初步推断P1是一种较强的RNA沉默抑制子,HC-Pro没有抑制RNA沉默的活性,与P1融合表达蛋白(P1/HC-Pro)会降低P1抑制子活性。综上所述,本研究建立了高效、灵敏、快速的SCSMV实时荧光定量RT-PCR检测技术,分析了 SCSMV群体遗传分化的分子机制,首次鉴定了 P1蛋白具有抑制RNA沉默的功能。这些研究成果为进一步探索SCSMV与植物互作的分子机制奠定了基础,为甘蔗花叶病的生态防控提供重要的技术支撑。

关键词：甘蔗条纹花叶病毒实时荧光定量RT-PCR 群体遗传进化 P1蛋白 RNA沉默抑制子

甘蔗抗甘蔗条纹花叶病毒精准评价体系的建立与应用

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甘蔗抗甘蔗条纹花叶病毒精准评价体系的建立与应用

作者：王会敏南京农业大学

学位级别：硕士

甘蔗（Saccharum officinarum L.）是我国最重要的糖料作物。甘蔗花叶病（Sugarcane mosaic disease,SMD）是当前甘蔗主要的传播性病毒病害,甘蔗条纹花叶病毒（Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV）是其最主要的病原。感染SCSMV导致... 详细信息

甘蔗（Saccharum officinarum L.）是我国最重要的糖料作物。甘蔗花叶病（Sugarcane mosaic disease,SMD）是当前甘蔗主要的传播性病毒病害,甘蔗条纹花叶病毒（Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV）是其最主要的病原。感染SCSMV导致甘蔗品质变差,产量减少,对甘蔗产业造成严重的影响。防治该病毒最有效的方式是选育和合理布局甘蔗抗病品种。对甘蔗资源进行SCSMV的抗性评价是选育抗SCSMV品种的关键环节,抗病评价的准确性和效率直接影响到甘蔗抗病育种的进程和效率。SCSMV是近年来发现的感染甘蔗最主要的病毒,对其抗病性评价主要依据病症结合病毒感染的定性分析来确定,由于感染SCSMV的植株在早期往往症状表现不明显,很难对其进行准确的评价。因此建立一种精准的甘蔗抗SCSMV评价体系对甘蔗抗病育种具有重要的意义。本研究利用实时荧光定量RT-PCR技术对甘蔗感病材料进行SCSMV的载量分析,建立了SCSMV的定量检测技术,再利用感病种质的脱毒材料接种SCSMV后每隔1周进行病毒载量的检测,观测病毒载量与症状程度的相关性以确定适合的采样时间和采样方法,初步建立了SCSMV抗性精准评价体系;并利用该体系对200份国内外甘蔗种质进行了抗性评价。主要研究结果如下:1、建立了SYBR Green I实时荧光定量检测SCSMV的方法,该方法具有较高的特异性,且灵敏度是常规RT-PCR的1000倍,其组内变异系数和组间变异系数都小于1.50%,具有很好的重复性。2、通过对甘蔗种质接种SCSMV,对接种后的甘蔗种质每隔1周监测病毒载量的变化,发现在接种SCSMV后第8周可检测到病毒,第12周观察到症状,在接种病毒后的前24周病毒载量增长迅速,在接种32周后,病毒载量也逐渐趋于平稳,确定第32周为该评价体系的采样时间。同时对该材料的全部甘蔗叶片（-2叶～+6叶）进行病毒载量的检测,发现SCSMV在甘蔗的新叶如-1叶,+1叶或+2叶的病毒载量较高,所以为了减小检测的误差,在实验取样时分别采取甘蔗的-1叶,+1叶,+2叶,以3个叶片中病毒载量的平均值为评价标准。3、通过以上的采样时间和采样方式对40个已知抗性的甘蔗参试品种进行SCSMV病毒载量的检测,并依据其病毒载量进行抗性等级的划分,定义了四个抗性等级,其中病毒拷贝数大于1×10～9copies·μL为高感,病毒拷贝数小于1×10～9copies·μL且大于1×10～7copies·μL为感病,病毒拷贝数小于1×10～7copies·μL为中抗,未检测到病毒的为抗病。由于SCSMV主要破坏甘蔗叶片细胞的叶绿体,本研究还通过对抗性分级后的甘蔗种质叶片细胞中叶绿体的超微结构进行观察,从细胞学层面确认该评价体系的可靠性。4、利用本次试验建立的甘蔗种质抗SCSMV的精准评价体系,对200份国内外甘蔗种质进行抗性评价,其中200份甘蔗种质中,18.5%为高感,15%为感病,52.5%为中抗,14%为抗病。由此次检测结果可以看出国内外甘蔗种质大多对SCSMV具有中等抗性,缺乏抗病的甘蔗种质,未来还需要加大甘蔗抗SCSMV的育种。

关键词：甘蔗种质资源甘蔗条纹花叶病毒实时荧光定量RT-PCR 病毒检测抗性精准评价体系

利用酵母双杂交系统筛选与甘蔗条纹花叶病毒VPg互作的寄主因子

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利用酵母双杂交系统筛选与甘蔗条纹花叶病毒VPg互作的寄主因子

作者：翟玉山福建农林大学

学位级别：硕士

甘蔗(Saccharum ***)是我国乃至世界最重要的糖料作物,同时也是重要的能源作物。在甘蔗生产上,甘蔗花叶病(sugarcane mosaic disease,SMD)在世界各蔗区普遍发生,是危害最为严重的病毒性病害之一,严重影响甘蔗的产量和品质。SMD的病原主... 详细信息

甘蔗(Saccharum ***)是我国乃至世界最重要的糖料作物,同时也是重要的能源作物。在甘蔗生产上,甘蔗花叶病(sugarcane mosaic disease,SMD)在世界各蔗区普遍发生,是危害最为严重的病毒性病害之一,严重影响甘蔗的产量和品质。SMD的病原主要是甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)和甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV),三者同属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae),但与SCMV、SrMV属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus)不同,SCSMV属于禾本科病毒属(Poacevirus)。目前,研究SMD发病机制的报道尚少,尤其是关于SCSMV侵染的分子机制研究尚属空白。本研究通过构建感染SCSMV的甘蔗叶片的酵母双杂交cDNA文库,以SCSMV-VPg蛋白为诱饵,利用酵母双杂交技术筛选出与其互作的寄主因子。同时,挑出与之互作的甘蔗转录延伸因子C亚基(Elongin C,ELC)重点研究,初步探索了 ScELC在SCSMV侵染过程中的作用。研究结果如下:(1)利用Gateway技术构建了感染SCSMV的甘蔗叶片cDNA文库,为筛选与SCSMV互作的甘蔗寄主因子,研究甘蔗与SCSMV的互作机制及甘蔗抗花叶病育种奠定了基础。(2)利用PCR技术克隆了 SCSMV的HC-Pro、P3N-PIPO、CP和VPg的编码区,成功构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-Hc-Pro、pGBKT7-P3N-PIPO、pGBKT7-CP和pGBKT7-VPg,且重组质粒对酵母菌株Y2HGold无自激活活性及毒性作用,适用于甘蔗酵母cDNA文库的筛选。(3)以SCSMV-VPg蛋白为诱饵,利用酵母双杂交系统(yeasttwo-hybrid system,Y2HS)筛选甘蔗cDNA文库,初步获得阳性克隆子9个,生物信息学分析显示,这些基因分别参与了转录调控、基础代谢、光合作用和胁迫防御等生物学过程。(4)挑选候选阳性克隆ScELC重点研究。利用酵母双杂交(yeast two-hybrid,Y2H)和双分子荧光互补技术(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)证明了 ScELC与SCSMV、SCMV、SrMV的VPg均存在互作关系。ScELC基因的组织表达特异性分析表明,ScELC基因在苗期和成熟期甘蔗的各组织中均有表达,其分别在苗期甘蔗的叶片和成熟期甘蔗的根中表达量最高。ScELC蛋白的亚细胞定位实验显示,ScELC蛋白定位于细胞质和细胞核中。为研究ScELC在SCSMV侵染过程中可能发挥的作用,利用Real-time qPCR技术分析了 SCSMV侵染对ScELC基因表达的影响,并对ScELC和甘蔗翻译起始因子eIF4E(SceIF4E1、SceIF4E2和SceIF4E3)的互作关系进行了研究。结果显示,接种SCSMV后,ScELC基因的表达量明显上调。Y2H和BiFC的结果表明,ScELC仅与SceIF4E2之间存在互作关系,说明ScELC和SceIF4E2在SCSMV侵染过程中可能具有一定的关联。

关键词：甘蔗条纹花叶病毒 VPg 转录延伸因子C亚基酵母双杂交系统 Real-time qPCR

苏丹草(Sorghum sudanense Stapf):甘蔗条纹花叶病毒新人工寄主(英文)

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广西农业科学 2010年第5期41卷 436-438页

作者： Deepti Singh G.P. Rao Kunraghat蔗试验站植物病理研究室印度戈勒克布尔273008

对苏丹草进行甘蔗条纹花叶病毒(SCSMV)人工接种,其叶片呈现连续褪绿条斑症状。采用RT-PCR和SC-SMV特异性引物SCSMV-ST2(F)、SCSMV-P1(R)对苏丹草染病植株上的甘蔗条纹花叶病毒进行鉴定,结果为阳性;对所获得的PCR扩增产物进行克隆和序列... 详细信息

对苏丹草进行甘蔗条纹花叶病毒(SCSMV)人工接种,其叶片呈现连续褪绿条斑症状。采用RT-PCR和SC-SMV特异性引物SCSMV-ST2(F)、SCSMV-P1(R)对苏丹草染病植株上的甘蔗条纹花叶病毒进行鉴定,结果为阳性;对所获得的PCR扩增产物进行克隆和序列分析,获得0.5kbp片段,在GenBank数据库中的注册号为***650178;通过BLAST比对和系统遗传分析(MEGA 4.0),将其鉴定为甘蔗条纹花叶病毒,这是首次发现苏丹草可作为一种甘蔗条纹花叶病毒的人工选择寄主。

关键词：甘蔗条纹花叶病毒人工寄主苏丹草鉴定

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引起甘蔗花叶病的病原分子生物学进展

植物保护学报 2017年第3期44卷 363-370页

作者：梁姗姗罗群陈如凯高三基福建农林大学生命科学学院福建农林大学国家甘蔗工程技术研究中心福州350002

花叶病是最主要的甘蔗病毒病害之一,在全球种植甘蔗的国家或地区普遍发生,可导致甘蔗产量下降,糖分减少,给甘蔗生产带来严重的经济损失。引起甘蔗花叶病的病毒主要有甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)、高粱花叶病毒(Sorghum m... 详细信息

花叶病是最主要的甘蔗病毒病害之一,在全球种植甘蔗的国家或地区普遍发生,可导致甘蔗产量下降,糖分减少,给甘蔗生产带来严重的经济损失。引起甘蔗花叶病的病毒主要有甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,Sr MV)和甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)。本文综述了这3种病毒的生物学特性、鉴定与检测、基因组结构与基因功能、遗传变异与分子进化等方面的研究进展,并讨论了对甘蔗花叶病的生态防控措施。

关键词：甘蔗花叶病甘蔗花叶病毒高粱花叶病毒甘蔗条纹花叶病毒病害防控

滇蔗茅杂交F_1双抗SCSMV和SrMV鉴定与评价

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植物遗传资源学报 2017年第5期18卷 886-890页

作者：李文凤单红丽王晓燕陆鑫张荣跃仓晓燕尹炯罗志明黄应昆云南省农业科学院甘蔗研究所/云南省甘蔗遗传改良重点实验室开远661699

以我国蔗区甘蔗花叶病的2种主要病原甘蔗条纹花叶病毒分离物(SCSMV-JP1,Gen Bank登录号JF488064)和高粱花叶病毒分离物(Sr MV-HH,Gen Bank登录号DQ530434)为接种毒源,采用人工切茎接种和RT-PCR检测相结合的方法,于2015-2016年2次对由热... 详细信息

以我国蔗区甘蔗花叶病的2种主要病原甘蔗条纹花叶病毒分离物(SCSMV-JP1,Gen Bank登录号JF488064)和高粱花叶病毒分离物(Sr MV-HH,Gen Bank登录号DQ530434)为接种毒源,采用人工切茎接种和RT-PCR检测相结合的方法,于2015-2016年2次对由热带种路打士与滇蔗茅云滇95-19杂交获得的41份滇蔗茅杂交F_1及亲本进行了双抗SCSMV和Sr MV鉴定与评价。结果表明,41份滇蔗茅杂交F_1及亲本中,对SCSMV表现1级高抗到3级中抗的有23份,占53.49%,4级感病到5级高感的有20份,占46.51%;对Sr MV表现1级高抗到3级中抗的有31份,占72.09%,4级感病到5级高感的有12份,占27.91%。综合分析结果显示,10份滇蔗茅杂交F_1对SCSMV和Sr MV均表现1~2级抗病,占23.26%,其中云09-604、云09-607、云09-619、云09-633、云09-656、云滇95-19等6份滇蔗茅杂交F_1对2种病毒均表现为1级高抗,占13.95%。研究结果明确了41份滇蔗茅杂交F_1及亲本对甘蔗花叶病2种主要致病病原的抗性,筛选出10份双抗SCSMV和Sr MV的滇蔗茅杂交F_1,为深入开展抗甘蔗花叶病育种提供了优良抗源种质和参考依据。

关键词：甘蔗滇蔗茅杂交F1 甘蔗条纹花叶病毒高粱花叶病毒抗病性鉴定

云南甘蔗花叶病病原分子鉴定及遗传多样性分析

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云南甘蔗花叶病病原分子鉴定及遗传多样性分析

作者：周娅中国农业科学院

学位级别：硕士

蔗糖业是云南区域经济发展和边疆地区脱贫致富的支柱产业。近年来，甘蔗花叶病成为云南各蔗区发生普遍、危害严重的病害，造成甘蔗产量下降、质量降低，严重制约云南蔗糖产业持续稳定发展。2011～2012年，从云南省保山、德宏、红河、临... 详细信息

蔗糖业是云南区域经济发展和边疆地区脱贫致富的支柱产业。近年来，甘蔗花叶病成为云南各蔗区发生普遍、危害严重的病害，造成甘蔗产量下降、质量降低，严重制约云南蔗糖产业持续稳定发展。2011～2012年，从云南省保山、德宏、红河、临沧、思茅、西双版纳、玉溪、昭通等8个甘蔗主产区和国家甘蔗种质资源圃内采集表现花叶症状的甘蔗样品145份，利用RT-PCR法对其病原进行了检测。在采集到的145份甘蔗样品中，共检测到3种病原：甘蔗花叶病毒（Sugarcanemosaic virus,SCMV），高粱花叶病毒（Sorghum mosaic virus,SrMV）和甘蔗条纹花叶病毒（Sugarcanestreak mosaic virus,SCSMV），其中SrMV检出率达64.13%，为主要病原。SCMV和SCSMV在国家甘蔗种质资源圃的样品中检出率较高，分别达到62.5%和77.78%;大田品种以SrMV为主;在国家甘蔗种质资源圃和保山、红河、玉溪蔗区样品上检测到SCMV;栽培原种部分品种存在SrMV和SCMV复合侵染现象;在国家甘蔗种质资源圃和玉溪、德宏蔗区样品上检测到SCSMV。选取27个SrMV分离物和3个SCMV分离物进行CP基因克隆测序，分析引起云南甘蔗花叶病病原SCMV和SrMV的遗传多样性。序列分析表明：SrMV的CP基因序列差异较大，存在多个株系，且同一地区也存在多个株系，但地理差异不明显，而SCMV不存在株系分化。SrMV CP基因核苷酸序列相似性仅为77%-79%，可能存在一种新的引起甘蔗花叶病的病毒种类。对9个SCSMV阳性样品的CP基因进行了克隆测序，序列分析结果表明：他们之间的同源性较高。从NCBI上下载SCSMV CP基因序列，与本实验获得的9个SCSMV分离物CP基因序列进行聚类分析，结果表明：SCSMV可以划分为多种不同的株系，地理差异比较明显;本研究获得的9个分离物聚集形成一个独立分支，可能代表SCSMV的一个株系。根据样品采集地点，选择RT-PCR检测呈阳性且寄主为红河、保山、德宏、西双版纳、思茅蔗区的主栽品种M2、M3、M6、M9、M17及M32共6个分离物进行鉴别寄主测定，发现它们的致病性存在明显差异，分离物M3有范围最广的鉴别寄主和较强的致病性。

关键词：甘蔗花叶病毒高粱花叶病毒甘蔗条纹花叶病毒病原分子鉴定遗传多样性

SCSMV-P1蛋白抑制RNA沉默的关键结构域及氨基酸定位

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SCSMV-P1蛋白抑制RNA沉默的关键结构域及氨基酸定位

作者：梁姗姗福建农林大学

学位级别：硕士

RNA 沉默(RNA silencing)和 RNA 沉默抑制子(RNA silencing suppressor,RSS)是寄主和病毒之间长期进化过程中形成的防御和反防御的相互拮抗机制。甘蔗条纹花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)和小麦花叶病毒(Triticum mosaic virus,TriMV)都是属于马铃薯Y病毒科Potyviridae禾本科病毒属Poacevirus的成员,均通过编码P1来抑制RNA沉默介导的宿主防御,但是其抑制RNA沉默的机制至今仍然不清楚。本研究首先利用农杆菌浸润本氏烟的瞬时表达实验验证P1蛋白是强RNA沉默抑制子,明显提高了外源基因GFP表达活性。同时,还发现HC-Pro与P1共表达会大大降低P1的沉默抑制子活性。利用酵母双杂交Y2H和双分子荧光互补BiFC实验发现,P1与HC-Pro之间没有发生直接互作,表明HC-Pro可能通过间接方式来影响P1的沉默抑制活性。此外,P1与甘蔗和拟南芥泛素化途径中的关键蛋白质SKP1不存在直接相互作用。通过对P1蛋白的理化性质、蛋白质结构、保守结构域和位点以及选择压力等生物信息学预测分析,克隆构建了 11个缺失突变体和4个点突变子,其中这11个缺失突变体包括7个分段缺失突变体、2个保守结构域缺失突变体和N末端、C末端缺失突变体;4个点突变子包括2个保守位点和3个正向选择位点。利用GFP介导的农杆菌浸润本氏烟的瞬时表达实验表明,C末端15个氨基酸P1(△343-358)的缺失、2个保守氨基酸基序P1(△65-79),P1(△108-122)是P1发挥沉默抑制子活性的关键结构域。此外,正选择位点H263也是P1发挥沉默抑制子功能的关键氨基酸位点。本研究结果为进一步解析P1蛋白抑制RNA沉默的作用分子机制奠定了基础,也为探索SCSMV与寄主甘蔗互作研究提供了参考。

关键词：甘蔗条纹花叶病毒 P1蛋白 RNA沉默抑制子关键结构域正向选择位点