检索结果-南通市图书馆

扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第2期42卷 79-85页

作者：范亚娟袁宸马喆南京农业大学动物医学院南京210095

为开发一种可用于体内或体外沙门菌防控的噬菌体混合制剂,使用丝裂霉素C从不同血清型沙门菌中诱导并纯化获得沙门菌噬菌体,初步分析其裂解谱和理化条件适应性。为拓展噬菌体制剂的裂解谱并综合发挥温和噬菌体pP14及烈性噬菌体pSQC73的优... 详细信息

为开发一种可用于体内或体外沙门菌防控的噬菌体混合制剂,使用丝裂霉素C从不同血清型沙门菌中诱导并纯化获得沙门菌噬菌体,初步分析其裂解谱和理化条件适应性。为拓展噬菌体制剂的裂解谱并综合发挥温和噬菌体pP14及烈性噬菌体pSQC73的优势,制成噬菌体混合制剂并评价其体外杀菌抑菌效果。结果表明:沙门菌噬菌体pP14可耐受50℃高温,在pH值4~12范围内活性均较稳定,和pSQC73混合制成的制剂在3 h内可有效减少鼠伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌的数量,在1 h内可使细菌数量降低90%以上,针对低浓度的细菌时,稳定杀菌抑菌时间可维持3~6 h。该制剂对体外畜禽养殖环境中常见沙门菌血清型具有较好的杀灭和抑制效果,有望作为环境杀菌剂甚至体内杀菌药物的开发潜力。

关键词：沙门菌噬菌体环境杀菌剂

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

致羊腹泻大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其在环境中的杀菌效果评估

致羊腹泻大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其在环境中的杀菌效果评估

引用

作者：喻胜猛西北农林科技大学

学位级别：硕士

致羊腹泻大肠杆菌病主要多发于3周龄内的羔羊,特别是2～7日龄羔羊的发病率及死亡率较高。随着养殖业集约化、规模化发展,致腹泻大肠杆菌对羊养殖业造成的经济损失越来越大。羊致病性大肠杆菌主要通过抗生素进行治疗,随着耐药菌株日益增... 详细信息

致羊腹泻大肠杆菌病主要多发于3周龄内的羔羊,特别是2～7日龄羔羊的发病率及死亡率较高。随着养殖业集约化、规模化发展,致腹泻大肠杆菌对羊养殖业造成的经济损失越来越大。羊致病性大肠杆菌主要通过抗生素进行治疗,随着耐药菌株日益增多以及兽药残留等问题,国家出台相应的养殖场禁抗限抗政策。因此迫切需要找到更多的新型抗菌药物代替抗生素来消灭此类病原菌。噬菌体是地球上数量最多的微生物,在各种生物和环境中发挥着重要作用。作为一种细菌病毒,噬菌体裂解宿主菌具有高度的特异性,安全性及高效性等优点,这为消灭环境中的致病性大肠杆菌提供了新的研究方案。本研究从陕西省富平县采集的腹泻羊粪便及剖检样本中分离出致病性大肠杆菌,进一步从原生环境样本中分离并筛选对致羊腹泻大肠杆菌具有较强裂解能力的噬菌体,进行生物学特性分析以及环境杀菌效果评估,探索其临床应用前景。(1)致羊腹泻大肠杆菌分离鉴定。从陕西省富平县不同羊养殖场及规模化养殖户采集了221份腹泻样品及30份剖检样品,进行大肠杆菌的分离鉴定。分离出118株大肠杆菌,采用O抗原凝集实验结合O抗原特异性DNA序列PCR鉴定法对所分离致病性大肠杆菌进行O血清型鉴定,最终118株分离的大肠杆菌中有16株被定型,包含5种血清型,包括O8(37.5%)、O101(37.5%)、O111(6.25%)、O56(12.5%)、O45(6.25%)。(2)噬菌体分离及生物学特性分析。以前期分离出的118株大肠杆菌为宿主菌,从原生环境采集的304份粪便样本,100份污水样本中分离噬菌体,通过宿主谱及裂解能力检测,筛选出6株噬菌体进行生物学特性分析以及后续研究,分别命名为P7、P19、P108、P113、P170、P200。宿主谱结果显示噬菌体P19、P113、P170、P108、P200、P7分别能裂解34株、17株、29株、29株、10株、1株大肠杆菌,覆盖上述(1)鉴定出的5种血清型的致病性大肠杆菌。纯化后6株噬菌体的噬菌斑均呈边缘清晰,中心透亮,具有典型的烈性噬菌体特征,且直径明显增大,说明其有较强的裂解能力。透射电镜下观察噬菌体微观形态,确定其中P113、P108、P7为肌尾科噬菌体,P19、P170属短尾科噬菌体,P200为长尾科噬菌体。P200最佳感染复数为0.1,P170最佳感染复数为1,P108、P7、P113的最佳感染复数为0.001,P19的最佳感染复数为0.0001。一步生长曲线结果表示,P200潜伏期为30 min,爆发期为40 min,爆发量为109 pfu/cell;P170潜伏期约为25 min,爆发期约为50 min,爆发量为105pfu/cell;P108潜伏期约为10 min,爆发期约为40 min,爆发量为为695 pfu/cell;P7潜伏期约为5 min,爆发期约为55 min,爆发量为790 pfu/cell;P19潜伏期约为5 min,爆发期约为60 min,爆发量为700 pfu/cell;P113潜伏期约为20 min,爆发期约为50 min,爆发量为167 pfu/cell。6株噬菌体均能在60℃及以下温度,p H4～11间生存,表明所选噬菌体具有良好的环境耐受能力。(3)噬菌体制剂环境杀菌效果评估。为了评估噬菌体应用于临床环境杀菌的能力,本研究分别检测了宿主菌与噬菌体接触6 h后产生噬菌体抗性的概率;不同感染复数下噬菌体的体外抑菌效果;阳光直射对噬菌体效价的影响。结果显示,P7、P113、P200、P19、P170、P108产生噬菌体抗性的概率分别为为3.5×10、1.5×10、3.7×10、2.9×10、9.1×10、2.2×10。所选噬菌体在1～2 h内对细菌的抑制作用不明显,大多都在2 h后使细菌OD值大幅下降,持续一段时间后OD值又会持续上升,且不同感染复数的实验组间存在细小差异。阳光照射6 h使所选噬菌体效价下降1～2个数量级。本研究进一步用透明箱分别模拟单一宿主菌污染以及混合宿主菌污染的密闭环境,喷洒单一噬菌体制剂以及噬菌体鸡尾酒制剂来检测噬菌体喷雾剂的环境杀菌效果。结果表明无论是单一噬菌体喷雾,还是鸡尾酒制剂喷雾都能在0.5 h内消灭模拟环境中绝大多数的细菌,证明所选噬菌体均具有良好的环境杀菌能力,且彼此间不会干扰杀菌能力。综上,本研究筛选的6株噬菌体具有良好的环境耐受力,环境杀菌能力,裂解谱广且裂解效率高,具有一定的开发潜力。此外,所选噬菌体混合使用时彼此不会干扰杀菌效果,可进一步制成鸡尾酒制剂以扩大临床应用范围。本项目的实施可以丰富无抗养殖模式下临床环境杀菌剂选择,有效解决羊养殖中杀菌抑菌剂带来的兽药残留问题,对进一步促进羊养殖业及其副产品的健康发展具有重要的现实意义。

关键词：致羊腹泻大肠杆菌 O抗原噬菌体生物学特性环境杀菌剂

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

肠聚集性大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其在环境中的杀菌效果评估

肠聚集性大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及其在环境中的杀菌效果评估

引用

作者：李一昊南京农业大学

学位级别：硕士

肠聚集性大肠杆菌（Enteroaggregative Escherichia coli,EAEC）是一种可以在肠道上皮细胞表面形成“叠砖样”聚集的致病性大肠杆菌,是导致第三世界国家儿童腹泻的主要原因之一,也是旅行者腹泻第二大病原菌。EAEC主要通过粪口传播,2011... 详细信息

肠聚集性大肠杆菌（Enteroaggregative Escherichia coli,EAEC）是一种可以在肠道上皮细胞表面形成“叠砖样”聚集的致病性大肠杆菌,是导致第三世界国家儿童腹泻的主要原因之一,也是旅行者腹泻第二大病原菌。EAEC主要通过粪口传播,2011年在德国爆发的由产志贺毒素大肠杆菌（Shiga-Toxigenic Escherichia coli,STEC）引起的肠胃炎和溶血尿毒症综合征疫情造成了近四千人被感染,后查明是一株变异产生毒力基因stx2a的EAEC。治疗细菌疾病多采用抗生素疗法,然而越来越多的细菌不断产生对抗生素耐药性,如何有效杀灭此类致病菌成为医疗届的一个挑战。噬菌体是一种细菌病毒,可以针对某种类型的原核生物产生特异性的裂解作用。它广泛分布在自然界中,土壤和海洋内存在大量噬菌体,甚至在南极冰川中也有发现。噬菌体主要是由蛋白质外壳和内部的核酸组成,按照对宿主菌的裂解方式不同可以分为溶原性噬菌体和裂解性噬菌体,裂解性噬菌体又叫烈性噬菌体,它感染细菌的主要过程包括吸附、注入DNA、组装和释放,可以在短时间内裂解宿主菌并产生大量子代。研究证实噬菌体还可以对生物被膜态的细菌产生裂解作用。因其特异性较强和对人体动物体无毒副作用,在耐药菌频繁出现的今天,利用噬菌体来治疗细菌病或作为天然环境杀菌剂逐渐引起人们的重视。本试验旨在分离并筛选对EAEC具有较强裂解作用的噬菌体,测定其生物学特性,研究噬菌体及其混合制剂作为环境杀菌剂对宿主菌的杀灭效果。1噬菌体的分离、鉴定及生物学特性测定2018年自南京某鸡场、云南某猪场和学校动物房采集动物粪样共305份,选取实验室保存的EAEC菌株CVCC232做为宿主菌对粪样进行噬菌体的分离和纯化工作。共分离出噬菌体8株,对噬菌体进行体外裂解能力测定,选取裂解能力较强的两株噬菌体Φ11和Φ13作为下一步的研究对象。对两株噬菌体的宿主谱进行了测定,共随机选择了实验室167株不同动物源的大肠杆菌进行测定,结果显示Φ11可以裂解其中155株,Φ13可以裂解其中46株,表明其裂解谱较广。Φ11噬菌斑直径约为3 mm,有晕环;Φ13噬菌斑直径约为1mm,无晕环,两株噬菌体噬菌斑边缘均透亮、整齐。透射电镜观察噬菌体形态,确认两株噬菌体均为肌尾噬菌体。对噬菌体Φ11和Φ13的效价、最佳感染复数、一步生长曲线、对pH和温度的耐受性进行了测定,结果显示Φ11效价为5.4×109pfu/mL;最佳MOI=10;潜伏期为15 min,爆发期为65min,爆发量为52;在pH 3-11范围内均有活性;在70℃环境内可存活30min。Φ13效价为3.6×109pfu/mL;最佳MOI=10;潜伏期为15 min,爆发期为35 min,爆发量为21;在pH 3-11范围内均有活性;在60℃环境可存活1h,70℃处理30min即失活。2噬菌体作为环境杀菌剂对宿主菌的杀灭效果评估试验用密闭的塑料盒模拟了两个密闭的空间,比较了喷雾和雾化两种方式对环境中宿主菌的杀灭效果,结果表明不论是喷雾形式还是雾化形式的噬菌体制剂均可以杀灭空气中99%的宿主菌,且噬菌体在30 min内即可达到最高的杀菌效率。为研究噬菌体在养殖环境中的杀菌效率,进一步将噬菌体喷洒于地面和粪便,测定其对宿主菌的杀灭效果,结果显示Φ11在地面上对宿主菌杀灭效果明显优于Φ13,分别可杀灭99.3%和91.2%的宿主菌,但两者对粪便中宿主菌的杀灭效率相差无几,均可以杀灭粪便中99%以上的宿主菌,且混合使用对粪便中宿主菌的杀灭效率更高。试验还检测了两株噬菌体对生物被膜态的宿主菌的杀灭作用,首先将宿主菌在96孔板内经36 h培养形成生物被膜,随后加入噬菌体继续培养。结果表明Φ11对生物被膜态宿主菌杀灭效率达到73%,而Φ13的杀灭效率只有30%,混合制剂对被膜态宿主菌杀灭效率最高,达到了 83%。另对宿主菌接触噬菌体之后产生抗性菌株的概率进行了测定,将噬菌体和宿主菌共培养5h后,产生抗噬菌体菌株的概率大概为10-3。试验还测定了噬菌体在模拟养殖环境的温度（26℃和37℃）、粪便pH（6.0和8.5）条件下处理七天和阳光直射6小时下的活性变化,结果显示Φ11在37℃和pH 8.5处理七天后效价分别从 1.6×109pfu/mL 降至 2.4×1 08 pfu/mL、4.5×109pfu/mL降至 1.5×109pfu/mL,阳光直射 6 h 后效价从 1.6×109pfu/mL降至 2.8×108 pfu/mL;Φ13 在 37℃和pH 6.0 处理七天后,效价分别从 8.8×108pfu/mL 降至 1.7×107pfu/mL,1.1×109 pfu/mL 降至 2.9×108pfu/mL,阳光直射 6 h 后效价从 4.8×108pfu/mL 降至 4.5×

关键词：噬菌体肠聚集性大肠杆菌生物学特性环境杀菌剂

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

沙门菌噬菌体鸡尾酒制剂的研制及体外杀菌效果评价

沙门菌噬菌体鸡尾酒制剂的研制及体外杀菌效果评价

引用

作者：范亚娟南京农业大学

学位级别：硕士

沙门菌(Salmonella)是一类重要的食源性革兰氏阴性肠道病原菌,主要威胁3周龄以下的幼禽,感染后死亡率高,严重影响了养鸡业发展及公共卫生安全,给我国养鸡产业造成巨大的经济损失。化学环境杀菌剂虽有较好的杀菌效果,但其长期的残留会对... 详细信息

沙门菌(Salmonella)是一类重要的食源性革兰氏阴性肠道病原菌,主要威胁3周龄以下的幼禽,感染后死亡率高,严重影响了养鸡业发展及公共卫生安全,给我国养鸡产业造成巨大的经济损失。化学环境杀菌剂虽有较好的杀菌效果,但其长期的残留会对人体的健康造成损伤。噬菌体属于细菌病毒,是细菌的天敌,宿主专一性高,在杀灭细菌的同时却不会对人体带来危害。噬菌体广泛存在于海洋以及陆地,在多种环境条件中都可发现它的存在,其环境适应性及其特性使得噬菌体具有作为环境杀菌生物制剂的开发潜力。噬菌体鸡尾酒制剂为多种具有不同功能的噬菌体的混合物,根据拓宽噬菌体的裂解谱、增强噬菌体的杀菌能力等目的人工合成。本研究应用丝裂霉素C(MMC)成功从沙门菌前噬菌体基因中诱导并纯化出了沙门菌噬菌体,并初步分析了其生物特性,噬菌体的生物特性决定其生存环境适应能力和侵袭宿主菌的能力等。单一噬菌体噬菌谱窄,在应用中受到诸多限制,为了克服这一劣势,本研究将新分离的噬菌体与试验室保存的从环境中分离的烈性噬菌体pSQC73混合配比,应用于体外沙门菌噬菌体制剂的研发。相关研究如下:1.沙门菌噬菌体的诱导与纯化通过MMC试剂法诱导不同血清型的沙门菌,成功诱导了 16株沙门菌噬菌体。将这16株沙门菌噬菌体用双层平板法分别进行三次纯化,得到15株可形成稳定噬菌斑形态的噬菌体,诱导率较高为31.91%。经过测定,其效价均达到108 pfu/ml以上,效价较高。经透射电镜观察噬菌体微观形态可发现诱导得到的噬菌体包括长尾噬菌体与短尾噬菌体。沙门菌噬菌体的成功诱导与纯化为后期沙门菌噬菌体体外环境杀菌制剂的研发提供了重要的生物材料。2.沙门菌噬菌体的生物特性分析本研究旨在探究沙门菌噬菌体在不同条件下的生物特性。首先,利用试验室保存的46株不同血清型的沙门菌确定16株沙门噬菌体的噬菌谱,发现pP14的裂解谱较广。随后,对pP14进行热稳定性试验、酸碱稳定性试验,发现其耐高温能力、耐酸碱能力较强:80℃加热1h时、缓冲液pH小于3或大于12时分别可将其完全灭活。灭菌剂灭活试验得出,噬菌体pSQC73和pP14对于灭菌剂较为敏感,50%的乙醇、25%的戊二醛分别可将两种噬菌体完全灭活,此特点有利于养殖中的环境清洁工作。同时,对长尾pP14和一株短尾pG8进行了六个月的效价测定,对烈性噬菌体pSQC73测定了两年后的效价,发现三种噬菌体的效价均在数量级上保持稳定,证明噬菌体4℃保存效果较好,效价不易衰减。此外,根据抑菌试验可知,噬菌体pP14和pSQC73的抑菌时长可达6h左右。由以上特性分析可推测,两种噬菌体的性质较为稳定,环境对其影响较小,具备制备环境杀菌剂的潜力。3.沙门菌噬菌体鸡尾酒制剂的体外应用及效果评价本试验旨在探究沙门菌噬菌体鸡尾酒制剂的体外杀菌效果,弥补单一噬菌体宿主谱的局限性。本试验表明沙门菌噬菌体pP14和pSQC73的混合制剂在一定时间内有杀灭鼠伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌的效果,鸡尾酒制剂在1 h内可杀灭90%以上的细菌,高效杀菌效果可持续3h,持续杀菌可达6h,试验表明细菌浓度越低抑菌效果越好。结果表明该混合制剂对畜禽养殖环境中常见的沙门菌血清型杀灭效果好,维持时间长且易于去除,具有持续抑菌的特性,有潜力开发成为可用于生产使用的环境消毒剂。

关键词：沙门菌噬菌体环境杀菌剂

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：