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环介导等温扩增技术在诊断结核病中的研究进展

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中国热带医学 2022年第11期22卷 1097-1100,1105页

作者：罗丽莎刘琳冯品赖霁佳陈雪媛孔清泉西藏自治区人民政府驻成都办事处医院四川成都610041

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是利用两对特殊设计的引物和链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下对目的片段进行特异、高效扩增的技术。LAMP技术具有简单、快速、特异、灵敏、经济等优点,因此在结核... 详细信息

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是利用两对特殊设计的引物和链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下对目的片段进行特异、高效扩增的技术。LAMP技术具有简单、快速、特异、灵敏、经济等优点,因此在结核分枝杆菌的现场快速检测和基层应用中具有广阔前景。基于此,本文主要阐述了LAMP技术的基本原理和特点、诊断结核病的主要分子标志物,以及利用不同的分子标志物和各种类型的新型技术在诊断肺结核、肺外结核、耐药性结核病中的应用。LAMP技术在诊断结核病中已经得到了广泛的应用,且具有较高的灵敏性和特异性,但该技术仍存在部分缺陷。本文综述了近年来LAMP技术在结核病中的应用进展,并对其发展前景进行了展望,以期在资源有限的环境中为结核病的快速诊断提供合理的研究方向。

关键词：环介导等温扩增技术结核病诊断

环介导等温扩增技术在农业病害检测中的应用综述

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江苏农业科学 2024年第7期52卷 17-24页

作者：王一波孙泓希史普想孙继军韩宁任亮张丽丽王海新辽宁省沙地治理与利用研究所辽宁阜新123000

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型核酸等温扩增技术,其原理是当温度为60~65℃时,DNA处于动态平衡状态,DNA双链打开,此时依赖Bst DNA聚合酶的链置换活性,使DNA可以在60~65℃的恒温下进行合成... 详细信息

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型核酸等温扩增技术,其原理是当温度为60~65℃时,DNA处于动态平衡状态,DNA双链打开,此时依赖Bst DNA聚合酶的链置换活性,使DNA可以在60~65℃的恒温下进行合成。其扩增引物是基于靶基因的6个特异性区域设计的,扩增阶段需要引物与样品DNA完全结合,才可以进行扩增,所以LAMP技术具有高特异性与高灵敏性。其反应温度恒定,不需要额外的控温设备,理想条件下仅需保温杯,即可进行DNA扩增。在田间检测时,只需提取样品总DNA,即可于田间进行病害检测,缩短了检测流程及时间,使病害检测更高效更便捷。在反应前或反应后加入特定染色剂,即可通过染色剂的变色情况进行反应结果的判定,使反应结果可视化。目前该技术已凭借其特异性高、灵敏性高、所用仪器简单(恒温水浴锅或保温杯即可)、检测效率高和检测结果可视化等优点,广泛应用于临床病原微生物检测、食品微生物检测、环境微生物检测、植物或微生物基因鉴定等领域。在农业病害的病原微生物(真菌、细菌、病毒、线虫)快速检测和诊断领域,已有很多研究针对各种病害建立了相应的LAMP检测技术。本文简要综述了LAMP技术原理、反应结果判定、优缺点和该技术目前在农业常见病原物检测中的应用,并对LAMP技术的应用前景进行了进一步的展望。

关键词：环介导等温扩增技术农业病害检测应用

环介导等温扩增技术在食品过敏原检测中的应用

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食品科技 2022年第11期47卷 249-254页

作者：王晶杨彤王芳林泽栋芦云中国检验检疫科学研究院北京100123 中检科(北京)测试技术有限公司北京100123

随着食品过敏性疾病发生率呈上升趋势,食品过敏已经成为备受关注的食品安全问题。适当的检测技术可以评估食物过敏的潜在风险,同时验证过敏原标签的准确性。环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术作为一种... 详细信息

随着食品过敏性疾病发生率呈上升趋势,食品过敏已经成为备受关注的食品安全问题。适当的检测技术可以评估食物过敏的潜在风险,同时验证过敏原标签的准确性。环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术作为一种检测手段,因灵敏度高、特异性强、无需高昂仪器等优势已经在食品安全检测中发挥了重要的作用。文章概述了LAMP技术的原理,总结了LAMP技术的改进和发展,重点阐述了LAMP技术在食品过敏原检测中的应用和标准化进程,以期为食品过敏原检测、过敏原标识制度的执行和监管提供技术参考。

关键词：环介导等温扩增技术食品过敏原检测应用

环介导等温扩增技术快速检测食源性致病菌的研究进展

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中国食品学报 2018年第3期18卷 211-220页

作者：辛亮崔艳华张兰威哈尔滨工业大学食品科学与工程学院哈尔滨150090

食品安全是全球关注的重大问题,而食源性致病菌是对食品安全的重要考验。食源性致病菌引发的食源性疾病,对人类的健康乃至生命都会产生威胁。控制食源性疾病爆发的最有效方法就是快速检测食源性致病菌。传统的标准检测方法耗费大量人力... 详细信息

食品安全是全球关注的重大问题,而食源性致病菌是对食品安全的重要考验。食源性致病菌引发的食源性疾病,对人类的健康乃至生命都会产生威胁。控制食源性疾病爆发的最有效方法就是快速检测食源性致病菌。传统的标准检测方法耗费大量人力且用时长,错失控制食源性疾病的最佳时机,亟需快速检测食源性致病菌的方法。环介导等温扩增技术(LAMP)根据目标菌株的特异序列设计引物,利用Bst聚合酶在等温条件下将低水平基因迅速扩增到可检测水平。扩增过程中生成大量焦磷酸镁白色沉淀,肉眼即可判定扩增与否。自2000年该技术报道以来,因其所需设备简单,检测用时短、效率高,特异性强和成本低廉的特点广泛应用于食品微生物的快速检测中。本文概述了LAMP的基本原理,技术特点以及在食品微生物快速检测方面的应用和新发展。

关键词：环介导等温扩增技术食品微生物快速检测

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环介导等温扩增技术在鸭源成分检测中的研究

食品与生物技术学报 2019年第8期38卷 126-133页

作者：吴潇吕贝贝蒋玮白蓝武国干王金斌王荣谈潘爱虎唐雪明上海市农业科学院生物技术研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海瑞丰农业科技有限公司上海201106

为了建立肉产品中鸭源成分的现场快速检测技术,根据动物种间特异性的原则,筛选出一对品种特异的PCR引物,在此引物扩增片段的基础上,设计了环介导等温扩增(LAMP)引物序列,能特异检测鸭源成分。通过条件优化实验,发现在25μL的扩增体系中... 详细信息

为了建立肉产品中鸭源成分的现场快速检测技术,根据动物种间特异性的原则,筛选出一对品种特异的PCR引物,在此引物扩增片段的基础上,设计了环介导等温扩增(LAMP)引物序列,能特异检测鸭源成分。通过条件优化实验,发现在25μL的扩增体系中,内外引物浓度比为1∶4,温度为63.5℃,MgSO4添加量为5mM/μL,dNTPs添加量为1.75mM/μL,BstDNA聚合酶添加量为0.4U/μL,甜菜碱添加量为0.25μmol/μL,LAMP反应时间为30min时,LAMP检测体系检测效果达到最优,鸭肉DNA的检测灵敏度可达到10pg/μL。对牛羊肉中鸭源成分比例的检测灵敏度为0.0001%。应用该方法对上海市闵行区市场中的牛羊肉产品进行抽样检测,结果从21份样品中成功检测出5份含鸭源成分的混合肉。本研究建立的LAMP检测方法灵敏、快捷,可以实现鸭源成分的现场速测,为肉制品市场的监管提供了一种新方法。

关键词：牛、羊肉制品等温扩增技术环介导等温扩增技术可视化检测

环介导等温扩增技术快速检测海豚链球菌方法的建立

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环介导等温扩增技术快速检测海豚链球菌方法的建立

作者：孙国荣广东海洋大学

学位级别：硕士

海豚链球菌(Streptococcus iniae)感染会引起鱼类疾病爆发,已有报道指出该菌会使卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)、尼罗罗非鱼(Oreochromis nilotica)和石斑鱼(E pinephelus spp.)等发生脑膜炎和败血症,临床症状表现为体表发黑,嗜睡、游... 详细信息

海豚链球菌(Streptococcus iniae)感染会引起鱼类疾病爆发,已有报道指出该菌会使卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)、尼罗罗非鱼(Oreochromis nilotica)和石斑鱼(E pinephelus spp.)等发生脑膜炎和败血症,临床症状表现为体表发黑,嗜睡、游动缓慢、眼球突出、充血、浑浊,肝脾脏肿大和出血,死亡率高达50%。中国、美国和澳大利亚等多个国家报道了鱼类链球菌的暴发,已造成巨大经济损失。此外该菌也是一种人鱼共患菌,患者主要症状表现为手的蜂窝织炎,若患有心脏病、糖尿病和关节炎等的病人感染链球菌,感染症状更严重。为减少海豚链球菌病大规模传播,本实验建立的针对海豚链球菌Mts R建立的快速准确的检测技术显得尤为重要。环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)利用Primer Explorer 5设计的特异引物和Bst DNA聚合酶在恒温(605℃)下扩增,相比于传统检测方法该法操作简单、快速高效,已在人类疾病检测和诊断领域中应用。本研究通过筛选海豚链球菌特异性序列,建立LAMP检测方法,对海水养殖业的健康发展具有重要意义,也为海豚链球菌的科学防控提供一种有效检测技术。研究结果如下:(1)LAMP检测方法的建立:本研究以海豚链球菌特异序列Mts R基因为靶标设计引物,分别对反应条件中的温度、时间、反应过程以及反应体系中的d NTPs、Mg2+、甜菜碱和内外引物比例进行优化,最终确定最佳反应体系为:61℃反应50 min,镁离子浓度为1.2 mmol/L、d NTPs浓度为0.64 mmol/L、内外引物比例为16:1,最后用DEPC处理水补足体系。扩增产物使用限制酶Alu I进行酶切验证,不能被Bam H I消化,且产物大小符合预期,表明本实验成功建立了海豚链球菌LAMP检测方法。本研究使用d UTP-UDG系统建立了防污染LAMP体系,并用不开盖检测的钙黄绿素-锰离子法、羟基萘酚蓝法作对照,结果一致证明d UTP-UDG防污染体系可有效避免气溶胶污染。(2)LAMP特异性和灵敏度鉴定:对包括海豚链球菌在内的33种参考菌株进行特异性验证。结果显示,仅对海豚链球菌检测结果为阳性,表明该方法特异性良好。灵敏度检测结果表明,LAMP检测灵敏度为18.8×10-6 ng/μL,时PCR检测灵敏度的100倍。(3)LAMP可视化检测与临床分析:用SYBR Green I、钙黄绿素-锰离子、羟基萘酚蓝、孔雀石绿、横向流动试纸条方法对LAMP体系扩增结果进行判读,实现了检测结果的可视化。将本研究建立的LAMP方法应用于临床中,对海豚链球菌、无乳链球菌和哈维氏弧菌感染的罗非鱼病样进行检测,结果表明该LAMP方法在模板中存在鱼类基因组干扰下也能正确完成检测。综上所述,本研究中建立的LAMP检测方法为海豚链球菌的检测提供一种可视化、灵敏、成本低的快速检测技术。

关键词：海豚链球菌 MtsR基因环介导等温扩增技术多种检测分析

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环介导等温扩增技术检测调味粉中罂粟可待因

卫生研究 2017年第5期46卷 788-792页

作者：杨柳陈宇飞王磊吉林工商学院食品工程学院长春130507

目的基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP),建立调味粉中罂粟可待因的检测方法。方法根据可待因特异性基因序列设计引物,通过对12种罂粟种子、11种香辛料叶或种子、1种虞美人种子的DNA样品进行... 详细信息

目的基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP),建立调味粉中罂粟可待因的检测方法。方法根据可待因特异性基因序列设计引物,通过对12种罂粟种子、11种香辛料叶或种子、1种虞美人种子的DNA样品进行特异性实验、最佳温度筛选实验、敏感性实验,并以此确立LAMP反应体系,对市售8种调味粉进行检测。结果 12种罂粟和虞美人的DNA样品发生了特异性反应,最佳反应温度为66℃,LAMP检测最低浓度达9 pg/μL,敏感性是PCR检测(0.9 ng/μL)的100倍。市售8种调味粉中,有1种含有可待因成分。结论LAMP检测法灵敏度高、特异性强、操作方便、快速,适用于调味粉中罂粟可待因的检测。

关键词：罂粟可待因环介导等温扩增技术特异性基因序列

环介导等温扩增技术在支气管扩张症急性加重期常见感染病原体检测中的应用

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基层医学论坛 2022年第28期26卷 12-14页

作者：饶运帷左慧敏文慧兰袁小亮赣南医学院第一附属医院江西赣州341000

目的探讨在支气管扩张症急性加重期常见感染病原体检测中应用环介导等温扩增(LAMP)技术的价值。方法选择2021年1月-2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的支气管扩张症患者218例。收集患者痰液,均进行痰细菌培养和LAMP技术。结果218... 详细信息

目的探讨在支气管扩张症急性加重期常见感染病原体检测中应用环介导等温扩增(LAMP)技术的价值。方法选择2021年1月-2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的支气管扩张症患者218例。收集患者痰液,均进行痰细菌培养和LAMP技术。结果218例患者共留取合格痰标本218份,致病菌阳性者34例(15.60%);共分离出病原菌43株,其中38株革兰阴性菌,占比88.37%,5株革兰阳性菌,占比11.63%。218例患者LAMP方法扩增的产物,致病菌阳性者93例,阳性率为42.66%;共分离出病原菌153株,其中细菌119株,革兰阴性菌为100株,占比65.36%,革兰阳性菌19株,占比12.42%,其余34株为非典型病原菌,占比22.22%。以痰培养为金标准,肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、流感嗜血杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌敏感度分别为75.00%,70.00%,83.33%,66.67%,66.67%,66.67%;特异度分别为92.86%,84.62%,97.64%,85.58%,95.35%,93.02%。结论在支气管扩张症急性加重期常见感染病原体检测中应用LAMP能够特异、高效、快速明确病原菌,可为临床合理选择抗生素提供参考,具有广阔的应用前景。

关键词：支气管扩张症环介导等温扩增技术病原体应用价值

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环介导等温扩增技术的最新研究进展

畜牧与兽医 2021年第2期53卷 119-125页

作者：谢佳芮寇美玲苗海生云南省畜牧兽医科学院/云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室/农业部热带亚热带动物病毒学重点开放实验室云南昆明650224

环介导等温核酸扩增技术是一种新型的核酸扩增技术,其核心原理是对靶基因片段的6个区域设计3对引物,实现对靶基因片段地快速、高效扩增。该技术目前已广泛的运用于一些领域。通过简述该技术的原理方法,在一些领域的运用,总结该技术国内... 详细信息

环介导等温核酸扩增技术是一种新型的核酸扩增技术,其核心原理是对靶基因片段的6个区域设计3对引物,实现对靶基因片段地快速、高效扩增。该技术目前已广泛的运用于一些领域。通过简述该技术的原理方法,在一些领域的运用,总结该技术国内外目前的研究进展以及改进措施,分析该技术未来的发展趋势,对环介导等温核酸扩增技术有一个全面的了解,以期为今后该技术的发展运用提供一定的参考依据。

关键词：环介导等温扩增技术应用及改进研究进展未来趋势