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玉米赤霉烯酮降解酶热稳定性及底物特异性改造策略

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中国粮油学报 2024年第8期39卷 42-51页

作者：秦立晔刘晓萌王寿南张晓琳印铁任顺成仉磊河南工业大学粮油食品学院郑州 450001 中粮营养健康研究院北京市畜产品质量安全源头控制工程技术研究中心北京 102209 中粮营养健康研究院北京市畜产品质量安全源头控制工程技术研究中心北京 102209 南京财经大学食品科学与工程学院江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心南京 210023 河南工业大学粮油食品学院郑州 450001

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是污染范围较大的真菌毒素,广泛存在于玉米、大麦、小麦和高粱等谷物及其副产品中,对饲料行业和畜牧养殖业造成严重的经济损失.利用生物技术对ZEN及其衍生物进行降解和脱除是未来解决ZEN污染的... 详细信息

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)及其衍生物是污染范围较大的真菌毒素,广泛存在于玉米、大麦、小麦和高粱等谷物及其副产品中,对饲料行业和畜牧养殖业造成严重的经济损失.利用生物技术对ZEN及其衍生物进行降解和脱除是未来解决ZEN污染的重要途径.然而,目前发现的ZEN降解酶热稳定性差,催化效率低,难以满足工业生产中高温、酸、碱等极端条件的需求.本文综述了近年来利用蛋白质工程提升ZEN降解酶热稳定性和底物特异性的改造策略,阐明ZEN降解酶改造的研究进展及存在问题,为开发ZEN降解酶的工程改造提供参考.

关键词：玉米赤霉烯酮降解酶热稳定性底物特异性分子改造

玉米赤霉烯酮降解菌的筛选鉴定及降解效果评价

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西北农林科技大学学报(自然科学版) 2024年 1-10页

作者：薛琳琳张朋振杨小进范收武李旺河南科技大学动物科技学院洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司

【目的】筛选高效实用的玉米赤霉烯酮(ZEN)降解菌株,并初步探究其降解机制及降解效果。【方法】以ZEN为唯一碳源,从发霉饲料和土壤样品中筛选菌株,通过形态学观察、16S r DNA测序分析对菌株进行鉴定;以培养时间为变量对菌株生长速率和ZE... 详细信息

【目的】筛选高效实用的玉米赤霉烯酮(ZEN)降解菌株,并初步探究其降解机制及降解效果。【方法】以ZEN为唯一碳源,从发霉饲料和土壤样品中筛选菌株,通过形态学观察、16S r DNA测序分析对菌株进行鉴定;以培养时间为变量对菌株生长速率和ZEN降解率进行相关分析;通过测定菌株不同活性成分及失活处理后的ZEN降解率对降解活性物质进行初步分析定位;对比探究硫酸铵沉淀法(硫酸铵饱和度分别为30%,40%,50%,60%,70%和80%)和单宁-聚乙二醇法(单宁质量浓度分别为2,5,10,15和20 mg/m L;聚乙二醇质量浓度分别为6,8,10,12和14 mg/m L)对粗降解酶的提取效果;通过SDS-PAGE凝胶电泳测定目标活性蛋白的分子质量,最后以菌株和粗酶液调节霉变玉米粉的水分质量分数,测定ZEN的降解效果。【结果】筛选得到试验菌株XJ-140,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),该菌在培养24 h时可降解93.75%的ZEN(2μg/m L)。菌株XJ-140以胞外酶降解ZEN为主,同时辅以细胞壁吸附。硫酸铵沉淀法(硫酸铵饱和度60%)和单宁-聚乙二醇法(最优单宁质量浓度为10mg/m L,最优聚乙二醇质量浓度为10 mg/m L)提取粗降解酶的ZEN降解率分别为37.14%和51.49%,单宁-聚乙二醇法提取效果更优。初步推断目标活性蛋白的分子质量在61 ku或28 ku。此外,菌株XJ-140的发酵液和粗酶液均能够降解霉变玉米粉中的ZEN。【结论】筛选的菌株XJ-140通过胞外酶降解ZEN,实际应用中对ZEN污染的玉米粉有一定清除效果。

关键词：玉米赤霉烯酮解淀粉芽孢杆菌降解酶降解效果

玉米赤霉烯酮对性成熟前公猪性腺的毒性作用及牛磺酸的保护功能

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中国兽医科学 2024年

作者：刘泮竹尚重兴苟克勉崔胜张娣扬州大学兽医学院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

本研究的主要目的是利用40日龄巴马公猪建立玉米赤霉烯酮（ZEA）染毒模型，研究和分析ZEA对性成熟前公猪睾丸和附睾的毒性作用以及牛磺酸是否能缓解ZEA的毒性损伤。利用组织学、免疫组织化学和相关的分子生物学等方法的研究结果证明，3 ... 详细信息

本研究的主要目的是利用40日龄巴马公猪建立玉米赤霉烯酮（ZEA）染毒模型，研究和分析ZEA对性成熟前公猪睾丸和附睾的毒性作用以及牛磺酸是否能缓解ZEA的毒性损伤。利用组织学、免疫组织化学和相关的分子生物学等方法的研究结果证明，3 mg/kg ZEA导致猪睾丸生精上皮发生空泡化现象；睾丸支持细胞中CX43、OCCLUDIN和VIMENTIN基因的表达水平降低；附睾输精小管中未变形精子细胞显著增加，大量生殖细胞不能完成分化过程形成精子。补充牛磺酸能显著缓解睾丸的空泡化、部分恢复精子发生过程，并在一定程度上提高了CX43和VIMENTIN基因的表达水平。这些结果表明，ZEA主要通过损伤睾丸生精上皮和精子的发生过程影响公猪的繁殖力，牛磺酸在缓解ZEA的生殖毒性方面具有潜在的应用前景。

关键词：玉米赤霉烯酮牛磺酸性成熟前公猪支持细胞

玉米赤霉烯酮影响绵羊卵母细胞体外成熟的分子机制研究

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中国畜牧杂志 2024年第4期60卷 207-213页

作者：马甜李宗帅张启冉李怡娜赵兴绪胡俊杰张勇甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室甘肃兰州730070 甘肃农业大学生命科学技术学院甘肃兰州730070

实验旨在研究玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对绵羊卵母细胞体外成熟相关基因表达及活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平的影响。采集绵羊卵巢,收集卵母细胞,分为4组,包括对照组(CG组)和实验组(TG1、TG2和TG3组)。CG组不做任何处理... 详细信息

实验旨在研究玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)对绵羊卵母细胞体外成熟相关基因表达及活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平的影响。采集绵羊卵巢,收集卵母细胞,分为4组,包括对照组(CG组)和实验组(TG1、TG2和TG3组)。CG组不做任何处理,TG1、TG2和TG3组分别在成熟液中添加10、20、30μmol/L ZEA进行体外成熟培养,qPCR技术检测减数分裂成熟和凋亡等相关基因mRNA的相对表达量,ROS检测试剂盒检测卵母细胞内ROS水平。结果表明:与CG组相比,当培养液中ZEA浓度达到20μmol/L时,卵母细胞成熟率显著降低,GPX、SOD1、SOD2、Caspase3、ATG3和ATG7的mRNA表达水平显著升高,而CDC20、GDF9和BMP15的mRNA表达水平显著降低,但LC3、BAX和BCL-2的mRNA表达水平在统计学上没有显著差异;与CG组相比,添加ZEA后卵母细胞内ROS含量极显著升高。以上结果提示,ZEA能通过诱导绵羊卵母细胞发生凋亡和氧化应激,抑制细胞分裂从而影响卵母细胞的体外成熟。

关键词：玉米赤霉烯酮绵羊卵母细胞体外成熟

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玉米赤霉烯酮对猪的危害及防控研究进展

饲料研究 2024年第5期47卷 166-171页

作者：徐文静魏文娟陈晓光张自强刘玉梅吕琼霞河南科技大学动物科技学院河南洛阳471000

玉米赤霉烯酮(ZEA)是饲料中常见的霉菌毒素之一,主要影响猪的生殖系统、胃肠功能、免疫系统和细胞活力等。当猪摄入被ZEA污染的饲料后,易造成母猪流产、公猪精子活力异常、肠道炎症、降低机体免疫功能以及多种器官(肝脏、肾脏等)炎症反... 详细信息

玉米赤霉烯酮(ZEA)是饲料中常见的霉菌毒素之一,主要影响猪的生殖系统、胃肠功能、免疫系统和细胞活力等。当猪摄入被ZEA污染的饲料后,易造成母猪流产、公猪精子活力异常、肠道炎症、降低机体免疫功能以及多种器官(肝脏、肾脏等)炎症反应,并造成细胞异常增殖、细胞氧化损伤等,引起细胞毒性,给养殖业造成严重损失。文章介绍了ZEA的理化性质、在谷物饲料中的限量标准及在猪体内的主要代谢过程,从生殖毒性、肠道毒性、免疫毒性和细胞毒性方面重点阐述了ZEA对猪的临床危害及可能的致病机理,提出了减轻ZEA毒性的主要方法以及防控措施,为推动养猪业的健康发展、确保饲料和肉制品的安全性提供参考。

关键词：玉米赤霉烯酮猪毒副作用防控措施

白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响

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动物营养学报 2024年第5期36卷 3317-3328页

作者：姚丹李怡娜成晓丽何曾文汪玥马小军张勇甘肃农业大学动物医学院兰州730070 甘肃省动物生殖生理及繁殖调控重点实验室兰州730070

本试验通过建立有效的玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠毒性模型,探讨白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响。1)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。对照组大鼠每天腹腔注射玉米油,低、中、高浓度组... 详细信息

本试验通过建立有效的玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠毒性模型,探讨白藜芦醇对玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠子宫和卵巢损伤的影响。1)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。对照组大鼠每天腹腔注射玉米油,低、中、高浓度组大鼠分别每天腹腔注射1.5、3.0和5.0 mg/kg玉米赤霉烯酮,每天注射量均为0.5 mL,试验期5 d。2)将32只2月龄雌性大鼠随机分为4组,每组8个重复,每个重复1只。第1~21天,RSV组和RSV+ZEA组大鼠每天灌胃40 mg/kg白藜芦醇,空白组和ZEA组大鼠每天灌胃羧甲基纤维素钠溶液,每天灌胃量均为1 mL;第22~26天,ZEA组和RSV+ZEA组大鼠按上述方法构建玉米赤霉烯酮所致雌性大鼠生殖系统凋亡的动物模型,空白组和RSV组大鼠腹腔注射玉米油。结果表明:1)与对照组相比,中、高浓度组子宫内膜变薄,子宫腺增多,闭锁卵泡数量增多,黄体增大且充血严重,子宫和卵巢中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA和蛋白相对表达量显著升高(P玉米赤霉烯酮5 d(每天3.0 mg/kg,玉米油为溶剂)可成功建立雌性大鼠玉米赤霉烯酮毒性动物模型。玉米赤霉烯酮对雌性大鼠子宫和卵巢有损伤,白藜芦醇对玉米赤霉烯酮引起的生殖毒性有明显保护作用。

关键词：玉米赤霉烯酮白藜芦醇凋亡生殖

玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇基因工程抗体的制备、评价以及免疫检测方法的构建

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玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇基因工程抗体的制备、评价以及...

作者：王云云江南大学

学位级别：硕士

玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）是粮食中常见的真菌毒素,对生物体具有生殖毒性和遗传毒性等,因而建立快速检测方法限制受真菌毒素污染的粮食流入市场十分必要。基因工程抗体作为三代抗体,... 详细信息

玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）和脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）是粮食中常见的真菌毒素,对生物体具有生殖毒性和遗传毒性等,因而建立快速检测方法限制受真菌毒素污染的粮食流入市场十分必要。基因工程抗体作为三代抗体,能够克服传统抗体制备的限制,实现高效制备,有效定向改造进化,可广泛地应用于免疫快速检测中。大肠杆菌BL21、毕赤酵母GS115、哺乳动物细胞Expi293F作为成熟的重组蛋白表达体系,广泛应用于基因工程抗体的制备中。本文以3种表达系统制备了ZEN和DON的单特异性和双特异性抗体。基于单特异性抗体构建胶体金免疫层析方法并应用于粮食谷物检测,基于ZEN和DON双特异性抗体构建同步免疫检测试剂盒,实现ZEN和DON的同时定量检测。本文的主要研究内容如下:（1）大肠杆菌BL21、毕赤酵母GS115表达系统的评价。从NCBI库获取DON和ZEN抗体可变区的基因序列（NCBI登录号:AAC53026.1,AAC53027.1;Y151141,AY151140.1）,将重链可变区和轻链可变区用（GlySer）连接构建单链抗体（single chain antibody,sc Fv）,并分别于大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115中表达。结果表明,大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115表达的ZEN单链抗体（ZEN-sc Fv）均有活性,而DON的单链抗体（DON-sc Fv）对抗原均无识别活性。基于大肠杆菌BL21表达产物建立的酶联免疫吸附检测方法（Enzyme-Linked immunosorbent assays,ELISA）标准抑制曲线方程为Y=-0.009752X+1.275（R=0.9735）,IC为79.47 ng/m L;基于毕赤酵母GS115的表达产物的ELISA标准抑制曲线方程为Y=-0.01045X+1.218,R=0.9585,IC为68.71 ng/m L。（2）基于Expi293F哺乳动物细胞表达的ZEN和DON sc Fv、全长抗体（Immunoglobulin G,Ig G）以及双特异性单链抗体的评价研究。基于载体p CMV和p TT5,Expi293F细胞瞬时表达获得了ZEN和DON的sc Fv、Ig G、双特异性单链抗体,且基于p CMV载体表达产量更高。基于ZEN-sc Fv和ZEN-Ig G构建ELISA方法检测灵敏度分别为6.46 ng/m L和6.27 ng/m L;基于DON-Ig G和DON-sc Fv构建的ELISA方法灵敏度分别为140.35 ng/m L和69.01 ng/m L。双特异性单链抗体Bis-sc Fv对ZEN和DON具有结合活性,基于其构建的ELISA方法对ZEN和DON灵敏度分别为20.64 ng/m L和132.29 ng/m L,且具有较强的特异性。（3）基于基因工程抗体构建免疫检测方法。基于ZEN-Ig G,构建了检测谷物中ZEN的胶体金免疫层析方法,其视觉检测限为60 ng/m L,经HPLC方法学验证,该方法就有良好的准确性;基于双特性单链抗体建立双联酶联免疫检测方法,其ZEN和DON的定量范围分别为1 ng/m L～100 ng/m L和10 ng/m L～500 ng/m L,线性方程分别为Y=-0.4028Lg X+0.9614(R=0.9467,IC为13.98 ng/m L)和Y=-0.5275Lg X+1.585(R=0.9681,IC为113.99 ng/m L),该方法对玉米粉中的ZEN和DON的加标回收率为86.02%～108.14%,相对偏差小于15%。综上,基于大肠杆菌BL21、毕赤酵母GS115和哺乳动物细胞Expi293F三种宿主生物成功表达了ZEN和DON的单特异性抗体以及双特异性抗体,并基于哺乳动物细胞Expi293F表达抗体构建快检方法并实现应用,为高效的抗体制备和应用研究奠定了基础。

关键词：基因工程抗体呕吐毒素玉米赤霉烯酮免疫层析双特异性抗体

玉米赤霉烯酮和3-氯-1,2丙二醇单克隆抗体的制备及其免疫层析试纸条的研发

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玉米赤霉烯酮和3-氯-1,2丙二醇单克隆抗体的制备及其免疫层析试纸...

作者：桂贇南昌大学

学位级别：硕士

食用植物油中的真菌毒素,以及加工过程中产生的氯丙醇类污染物是影响食用安全的重要风险因子,严重危害人们的生命健康。其中,以玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）、3-氯-1,2丙二醇（3-chloro-1,2-propanediol,3-MCPD）在食用植物油中污... 详细信息

食用植物油中的真菌毒素,以及加工过程中产生的氯丙醇类污染物是影响食用安全的重要风险因子,严重危害人们的生命健康。其中,以玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）、3-氯-1,2丙二醇（3-chloro-1,2-propanediol,3-MCPD）在食用植物油中污染广泛。ZEN是一种雌激素样的真菌毒素,误食会对哺乳动物生殖系统产生不良影响,诱发雌性激素综合征;而3-MCPD是食品加工过程中产生的氯丙醇类污染物,长期摄入会对肾脏、生殖系统产生不良影响,提高人体潜在的癌变率。因此,快速检测与鉴定食用植物油中此两种污染物的残留情况,对保障人们的健康安全意义重大。以免疫层析方法（Lateral flow immunoassay,LFIA）制备的产品由于具有便携、低成本、操作简便和能够长期保存等优势,逐渐成为食品安全快速筛查领域的首选工具,但目前尚无3-MCPD免疫学检测方法的报道,而高质量抗体的是开发免疫层析方法的核心。因此,本研究设计、合成了ZEN和3-MCPD半抗原,利用杂交瘤技术获得了高特异性的单克隆抗体,建立了基于聚集诱导发光微球（Aggregation-induced emission fluorescent microsphere,AIEFMs）的多重免疫层析检测方法,首次实现了对玉米油中ZEN和3-MCPD的免疫学方法的同时检测,主要研究结果如下:（1）半抗原的设计与合成。针对ZEN进行羧基化修饰得到ZEN半抗原;针对3-MCPD进行衍生,引入含单个苯环结构的连接臂得到3-MCPD半抗原。使用薄层色谱法和质谱进一步鉴定,表明成功获得ZEN和3-MCPD半抗原。将成功制备的半抗原,分别与钥孔血蓝蛋白（KLH）、牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,使用紫外分光光度法进行鉴定,得到人工全抗原。（2）单克隆抗体的制备与鉴定。经小鼠免疫、细胞融合和亚克隆等过程,成功筛选到分泌ZEN抗体的1-8F-G4-H2、1-D10-B11-F10和5-H2-C9-C9细胞株;分泌高特异性识别3-MCPD半抗原抗体的2-5F-H6-E3、3-4G-D10-C10细胞株。抗体性质鉴定表明:5株单克隆抗体均为Ig G1型;其中抗ZEN的单克隆抗体,在最佳工作浓度下,1-8F-G4-H2、1-D10-B11-F10、5-H2-C9-C9的IC50分别为0.51 ng/m L,6.90 ng/m L和0.72 ng/m L,与α-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉烯醇交叉反应率分别为87.18%,64.31%、18.87%、4.28%,与其他真菌毒素无明显交叉;抗3-MCPD半抗原的单克隆抗体在最佳工作浓度下,2-5F-H6-E3、3-4G-D10-C10的IC50分别为45.66 ng/m L、55.85 ng/m L,与衍生剂4-氨甲基苯甲酸和3-MCPD及其结构类似物无明显的交叉反应。选取单克隆抗体1-8F-G4-H2、2-5F-H6-E3进行AIEFMs多重检测免疫层析方法（AIEFMs-LFIA）研发。（3）基于AIEFMs标记的多重免疫层析检测方法研究。以激发波长365 nm、发射600 nm的AIEFMs作为标记探针偶联抗体,构建了基于AIEFMs标记的检测3-MCPD和ZEN的多重免疫层析方法。在最佳实验条件下,所建立的AIEFMs-LFIA对3-MCPD衍生物的IC50为6.03 ng/m L,线性范围(IC20-80)为2.26～20.94ng/m L;对ZEN的IC50为1.14 ng/m L,线性范围(IC20-80)为0.43～4.23 ng/m L。选用玉米油为添加样进行方法验证,使用建立的AIEFMs-LFIA进行检测,根据3-MCPD衍生率计算得出加标回收率为75.2～88.5%,变异系数为6.5～10.2%;ZEN加标回收率为81.2～90.3%,变异系数为7.4～9.6%。所建立的AIEFMs-LFIA方法与LC-MS/MS检测结果具有较好的一致性,方法可靠性。本项研究通过设计合成了ZEN和3-MCPD半抗原,获得了高特异性的单克隆抗体,所建立的AIEFMs-LFIA方法实现了对玉米油中3-MCPD和ZEN的检测,具有较高的应用潜力。

关键词：玉米赤霉烯酮 3-氯-1,2丙二醇单克隆抗体多重免疫层析

玉米赤霉烯酮、呕吐毒素重组单克隆抗体的构建及表达研究

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玉米赤霉烯酮、呕吐毒素重组单克隆抗体的构建及表达研究

作者：王何瑶南昌大学

学位级别：硕士

免疫分析方法（Immunoassay）广泛应用于食品安全快速检测领域,抗体是免疫分析的核心元件。然而,目前食品安全领域所使用的抗体主要基于多克隆抗体或基于杂交瘤细胞体内培养而大量获得的单克隆抗体,不仅面临动物福利及病毒污染,而且存... 详细信息

免疫分析方法（Immunoassay）广泛应用于食品安全快速检测领域,抗体是免疫分析的核心元件。然而,目前食品安全领域所使用的抗体主要基于多克隆抗体或基于杂交瘤细胞体内培养而大量获得的单克隆抗体,不仅面临动物福利及病毒污染,而且存在非靶向抗体污染和细胞抗体基因丢失等问题。因此,对抗体基因测序制备重组抗体,是目前有效避免上述缺陷的抗体制备的主要方式。本研究以食品中常见的真菌毒素玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）、呕吐毒素（Deoxynivalenol,DON）的杂交瘤细胞株Z14、D16为研究对象,采用简并引物法对抗体基因进行测定,构建以p CDNA3.4为骨架载体的重、轻链表达载体,分别在Expi 293F哺乳动物细胞系中进行瞬时转染表达和鉴定;在此基础上,以ZEN重组单克隆抗体为研究对象,基于CHO-S贴壁细胞系开展稳定转染细胞株的筛选及表达;此外,还基于“knob in hole”和“crossover”技术开展了双特异性抗体表达载体的构建及表达研究,取得的主要研究进展及结果如下:1)通过简并引物法获得ZEN、DON抗体的基因序列,成功构建DON、ZEN重组单克隆抗体的表达载体并实现了在哺乳动物细胞EXpi293F中的瞬时转染表达,基于ELISA的检测结果发现DON、ZEN重组单克隆抗体均保留了对其检测抗原的特异性结合能力,两者的IC50分别为56.8 ng/m L和2.525 ng/m L,线性检测范围IC20～IC80分别为14.67～219.78 ng/m L和0.66～8.88 ng/m L。2)以ZEN重组单克隆抗体为研究对象,转染CHO-S贴壁细胞,通过添加含G418抗生素的培养基筛选,成功获得稳定表达ZEN重组单克隆抗体的CHO-S细胞株（CHO-ZEN）。对其采用降血清的方法进行悬浮驯化,采用ELISA方式测定纯化的抗体,结果显示其亲和常数Ka为5.51×10～9 L/mo L、热稳定性良好。3)基于DON、ZEN抗体的基因序列,基于“knob in hole”和“crossover”技术成功构建ZEN-DON双特异性抗体表达载体并将其共转染至CHO-S和Expi293F贴壁细胞中,通过对转染的细胞上清进行ELISA检测,结果表明ZEN-DON双特异性重组抗体只与ZEN抗原结合,共转染过程中产生了“ZEN-knob”同源抗体。

关键词：玉米赤霉烯酮呕吐毒素重组抗体真核表达双特异性抗体