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猫细小病毒JL1-05株的分离与鉴定

中国兽医学报 2009年第6期29卷 716-720页

作者：饶家辉王玉平雷连成李博左静吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

通过细胞培养方法，从疑似患猫泛白细胞减少症而死亡的成年猫体内分离到1株病毒，命名为JL1-05。经细胞敏感试验、形态学观察、血凝及血凝抑制试验、动物感染、特征序列PCR扩增及测序分析，该病毒在猫肾细胞上生长良好，无囊膜，直径为2... 详细信息

通过细胞培养方法，从疑似患猫泛白细胞减少症而死亡的成年猫体内分离到1株病毒，命名为JL1-05。经细胞敏感试验、形态学观察、血凝及血凝抑制试验、动物感染、特征序列PCR扩增及测序分析，该病毒在猫肾细胞上生长良好，无囊膜，直径为20～24nm，对热、乙醚、氯仿、胰蛋白酶有抗性，在4℃对猪红细胞有凝集作用，PCR扩增产物与预期一致，与标准毒株VP2基因序列同源性高达99％以上。该病毒特征与猫细小病毒的基本相符，为猫细小病毒。

关键词：猫细小病毒分离鉴定猫泛白细胞减少症

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猫细小病毒FPV-LN株的分离与鉴定

黑龙江畜牧兽医 2024年第23期 62-67+126-127页

作者：刘昱欣李卓宸王子贤吕文雪吕爽赵传芳中国农业科学院特产研究所

为了确定某动物医院送检的疑似猫细小病毒（Feline parvovirus, FPV）感染死亡猫的病原，试验对采自该动物医院疑似猫细小病毒感染猫的肠道内容物病料无菌处理后进行病毒分离培养，研究分离株的毒力和致病性。结果表明：将病毒分离株接... 详细信息

为了确定某动物医院送检的疑似猫细小病毒（Feline parvovirus, FPV）感染死亡猫的病原，试验对采自该动物医院疑似猫细小病毒感染猫的肠道内容物病料无菌处理后进行病毒分离培养，研究分离株的毒力和致病性。结果表明：将病毒分离株接种至F81细胞后出现明显细胞病变；PCR检测可扩增出大小约为846 bp的特异性目的条带；接种病毒分离株的F81细胞可见特异性绿色荧光；病毒分离株具有血凝性且血凝效价为1∶512;分离株的毒价为1×107.25TCID50/mL,对猫有致病性。说明试验成功从疑似FPV感染猫的肠道内容物中分离出一株FPV,命名为FPV-LN株。

关键词：猫细小病毒分离鉴定血凝效价致病性

猫细小病毒和猫疱疹病毒1型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2023年第4期53卷 455-461页

作者：于孔森周茜林青青李玮卓李文霞王秋霞余琦陈蕾王永强扬州大学兽医学院江苏扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 泰州蕾灵百奥生物科技有限公司江苏泰州225300 北京市动物疫病预防控制中心北京101199

为建立同时检测猫细小病毒(FPV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的双重荧光定量PCR方法,针对FPV的VP2基因、FHV-1的UL21基因设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了双重荧光定量PCR方法,并绘制了标准曲线,其相关系数(R2)均为0.999... 详细信息

为建立同时检测猫细小病毒(FPV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的双重荧光定量PCR方法,针对FPV的VP2基因、FHV-1的UL21基因设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了双重荧光定量PCR方法,并绘制了标准曲线,其相关系数(R2)均为0.999,具有良好的线性关系。结果显示,FPV、FHV-1最低检测限分别为4.87和2.21 copies/μL;对猫的常见病毒及细菌均无非特异反应;批内、批间试验的变异系数均小于2%。证明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好。用建立的方法对178份样本进行检测,结果,FPV和FHV-1的阳性检出率分别为73.65%和16.85%,二者混感阳性率为15.73%,与临床确诊结果一致。上述结果表明,本研究建立的方法可用于FPV、FHV-1感染的早期诊断、定量检测和流行病学调查等。

关键词：猫细小病毒猫疱疹病毒1型 TaqMan探针实时荧光定量PCR

猫细小病毒广西株的分离鉴定及动物发病模型的建立

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中国兽医科学 2020年第1期50卷 26-33页

作者：张振江刘金凤王浩唐海波秦树英李承浩吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

本研究通过利用FK81细胞按常规方法对猫细小病毒进行分离鉴定。选取其中效价最高的分离株以不同剂量经口腔和鼻腔感染猫,通过测定LD50,观察临床症状、白细胞含量变化、组织病理变化等指标,构建动物发病模型。从86份疑似猫瘟粪便样品中... 详细信息

本研究通过利用FK81细胞按常规方法对猫细小病毒进行分离鉴定。选取其中效价最高的分离株以不同剂量经口腔和鼻腔感染猫,通过测定LD50,观察临床症状、白细胞含量变化、组织病理变化等指标,构建动物发病模型。从86份疑似猫瘟粪便样品中成功分离到6株猫细小病毒,其中GX01株TCID50及血凝价均高于其他5株;不同剂量GX01感染猫后均表现出高热、腹泻、呕吐和体重下降等典型临床症状;感染后第3天粪便中检测到病毒;发病后期白细胞严重减少;攻毒第14天测定LD50为1×10-2.2;解剖表现为肠臌气、部分脏器肿大有出血点;组织病理切片观察到十二指肠和肺上皮细胞出现胞浆、胞核侵染、坏死等明显的组织病变,肾出现脂肪变性。本研究成功分离6株广西地区猫细小病毒并建立发病动物模型,为猫细小病毒发病机制和治疗药物的研究奠定了基础。

关键词：猫细小病毒分离临床表征发病模型

猫细小病毒广西分离株FPV-GX01全基因的克隆及遗传进化分析

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中国兽医科学 2018年第10期48卷 1250-1257页

作者：张振江唐海波刘金凤王浩秦树英何怡柳吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

为了解广西地区猫细小病毒（feline parvovirus,FPV）的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征。笔者采集经胶体金检测FPV阳性的粪便样品接种FK81细胞,进行病毒分离及理化特性鉴定,同时利用PCR分段扩增病毒基因组DNA,并与国内外分离... 详细信息

为了解广西地区猫细小病毒（feline parvovirus,FPV）的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征。笔者采集经胶体金检测FPV阳性的粪便样品接种FK81细胞,进行病毒分离及理化特性鉴定,同时利用PCR分段扩增病毒基因组DNA,并与国内外分离株进行同源性及遗传进化比较分析。结果显示,分离株在FK81细胞上盲传3代后出现CPE,猪红细胞血凝价达1∶1 024,第5代病毒TCID50测定为10-5.2/0.1 m L,该毒株对热、酸、氯仿及乙醚有较强的抵抗力,将分离株命名为FPV-GX01。全基因测序结果表明,分离株基因组为4 901 bp,与2007年我国猫源细小病毒株FPV-XJ1同源性高达99.0%,属同一分支。氨基酸位点分析显示,FPV-GX01株VP2蛋白功能较少发生突变,与犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）氨基酸位点存在宿主差异;FPV-GX01 NS1蛋白序列上没有VP2蛋白稳定,第619位异亮氨酸突变成苯丙氨酸。广西地区分离的猫细小病毒也在不断发生遗传变异进化,本研究对该地区猫细小病毒的进化特征提供了一定的参考。

关键词：猫细小病毒分离鉴定全基因组生物学特性

猫细小病毒聚合酶螺旋反应检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2021年第10期43卷 1068-1073页

作者：刘金波魏衍全薛惠文邢小勇孙鹏张勇甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 青岛易邦生物工程有限公司动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114

为建立一种快速、简便检测猫细小病毒(FPV)的聚合酶螺旋反应(PSR)恒温扩增方法,本研究参考GenBank中登录的FPV基因序列(MG924893.1),以其保守基因NS1为靶基因设计并合成分别用于普通PCR和PSR方法的2对特异性引物,以及一对加速引物,经反... 详细信息

为建立一种快速、简便检测猫细小病毒(FPV)的聚合酶螺旋反应(PSR)恒温扩增方法,本研究参考GenBank中登录的FPV基因序列(MG924893.1),以其保守基因NS1为靶基因设计并合成分别用于普通PCR和PSR方法的2对特异性引物,以及一对加速引物,经反应条件优化,建立了检测FPV的PSR方法。优化结果显示,体系内包含6 mmol/LMgSO_(4)、0.8 mol/L甜菜碱,67℃恒温反应45 min结束反应,然后加入终浓度为20×SYBRGreenI染料,肉眼在可见光下观察颜色变化即可判定检测结果。利用该方法检测猫冠状病毒(FCoV)、猫诺如病毒(FNoV)cDNA和FPV,结果显示除了FPV外,与其他病原均无交叉反应,特异性强;将提取的FPV基因组DNA 10倍倍比稀释,利用建立的PSR方法进行敏感性试验,结果显示,该方法对FPV基因组的最低检测限为6.75×10^(3)拷贝/μL,比普通PCR方法检测下限低10倍,敏感性可接受;利用本方法进行组内组间重复试验,结果显示组内与组间重复性试验检测结果一致,均为阳性,重复性好。利用建立的PSR方法对110份疑似感染FPV的猫粪便样品进行检测,结果显示PSR方法与常规PCR方法的检测结果基本一致,二者的总符合率为98.18%,表明本研究建立的PSR方法可用于检测临床样品。本研究首次建立的FPVPSR方法仅需2对引物在67℃下完成,无需复杂的变温仪器,反应后加入染料肉眼即可判定结果,整个过程在45 min内结束,设计引物简单,操作步骤少,用时较短,适合市县级宠物医院FPV感染的快速诊断。

关键词：猫细小病毒聚合酶螺旋反应恒温扩增快速诊断

猫细小病毒(SH2302株)的分离鉴定及其致病性研究

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中国动物传染病学报 2024年

作者：克力木江·艾山江张淼汤傲星尤尚尚李娜朱雯琪虞凌雪孟春春朱杰李传锋李国新刘光清雷程红新疆农业大学动物医学学院中国农业科学院上海兽医研究所

为了解猫细小病毒（FPV）在国内的流行状况及其致病性，本研究对2022-2023年收集的疑似猫瘟的6份样本进行了检测。PCR结果显示1份样品呈阳性。把该阳性样品接种F81细胞，间接免疫荧光试验（IFA）、血凝试验（HA）及电镜负染等方法证实... 详细信息

为了解猫细小病毒（FPV）在国内的流行状况及其致病性，本研究对2022-2023年收集的疑似猫瘟的6份样本进行了检测。PCR结果显示1份样品呈阳性。把该阳性样品接种F81细胞，间接免疫荧光试验（IFA）、血凝试验（HA）及电镜负染等方法证实，分离到了一株FPV，命名为SH2302株。基于基因的遗传进化分析显示，SH2302株属于G2群。动物回归试验结果显示，感染猫出现食欲下降、发热、稀便、精神萎靡、白细胞减少等典型的猫瘟症状，死亡率达到50%（2/4）。发病猫剖检可见明显的肠毒血症。病理组织染色（HE）与免疫组化（IHC）结果进一步证实SH2302株具有较强的致病性。总之，本研究分离到了一株致病性较强的FPV毒株，为FPV疫苗研制奠定了良好的基础。

关键词：猫细小病毒分离鉴定动物回归遗传进化分析

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猫细小病毒适配体的筛选与鉴定

中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 826-831页

作者：董丽丽许鑫燕刘迪郑亚婷康洪涛姜骞杨鸣发刘家森曲连东中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为筛选猫细小病毒(FPV)特异性核酸适配体,本研究利用体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从80 nt的单链DNA随机文库中筛选出与FPV高亲和力、高特异性结合的核酸适配体。对FPV适配体共进行14轮筛选,采用dot blot鉴定,确定其中的Apt27... 详细信息

为筛选猫细小病毒(FPV)特异性核酸适配体,本研究利用体外指数富集的配体系统进化技术(SELEX),从80 nt的单链DNA随机文库中筛选出与FPV高亲和力、高特异性结合的核酸适配体。对FPV适配体共进行14轮筛选,采用dot blot鉴定,确定其中的Apt27和Apt52为候选适配体。MTT试验表明,Apt27和Apt52对CRFK细胞(猫肾细胞)无毒性作用。利用酶联寡核苷酸法(ELONA)测定Apt27和Apt52的解离常数,结果显示分别为18.3249±7.1723 nmol/L和24.7882±10.0067 nmol/L。同时采用dot blot、间接免疫荧光试验(IFA)方法检测Apt27和Apt52对不同病毒的结合情况,结果显示其对猫杯状病毒、猫疱疹病毒的结合力弱,而对FPV的结合能力较强。预测二者二级结构可见,Apt27和Apt52均具有环状、发卡状结构,其中茎环结构可能为适配体特异性识别FPV的基本结构。本研究首次筛选到特异性识别FPV的适配体序列,为FPV的检测与治疗制剂的开发提供了新思路。

关键词：猫细小病毒适配体 SELEX技术

猫细小病毒嵌合抗体基因在CHO-K1细胞中的稳定表达及其特性分析

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中国预防兽医学报 2021年第12期43卷 1318-1323页

作者：王文静薛雨佳陈慧宇姚楠刘明中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069

为降低鼠源单克隆抗体(MAb)在猫体内引起的免疫原性,本研究针对猫细小病毒(FPV)制备具有猫源抗体恒定区基因的鼠-猫嵌合抗体。本研究首先克隆具有FPV中和活性的MAb(4F6)的重、轻链可变区基因及猫天然抗体(NAb)重、轻链恒定区基因,通过融... 详细信息

为降低鼠源单克隆抗体(MAb)在猫体内引起的免疫原性,本研究针对猫细小病毒(FPV)制备具有猫源抗体恒定区基因的鼠-猫嵌合抗体。本研究首先克隆具有FPV中和活性的MAb(4F6)的重、轻链可变区基因及猫天然抗体(NAb)重、轻链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-猫重组重、轻链基因片段(C_(H)/C_(L)),构建嵌合抗体表达载体(pMC-C_(H)、pMC-C_(L)),并经菌落PCR鉴定正确后转染CHO-K1细胞,并使用100μg/mL博来霉素(Zeocin)筛选,经有限稀释法将其克隆纯化后经双抗体夹心ELISA与western blot筛选出同时表达鼠-猫重组重、轻链基因的细胞株并命名为CHO-MC,将CHO-MC上清中表达的嵌合抗体纯化后调整浓度为1 mg/mL,间接ELISA检测嵌合抗体的效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性。结果表明,经SDS-PAGE检测鼠-猫嵌合抗体重链和轻链大小分别为55 ku和25 ku,western blot显示鼠源恒定区替换为猫源NAb的恒定区,双抗夹心ELISA显示CHO-MC细胞系在传代至15代仍能够稳定表达嵌合抗体,间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗猫IgG和FPV特异性结合,ELISA及中和效价分别为1:1280(0.78μg/mL)和1:16(62.5μg/mL)。本研究首次通过哺乳动物细胞表达系统表达了FPV的嵌合抗体,对治疗FPV抗体类药物的研究具有重要指导意义。

关键词：基因工程嵌合抗体猫细小病毒哺乳动物表达系统