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特异at序列结合蛋白2对肾癌细胞生物学行为的影响

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中华实验外科杂志 2024年第6期41卷 1152-1155页

作者：赵鹏程杨栋何朝红田沛郑州大学附属肿瘤医院泌尿外科郑州450008

目的探讨特异at序列结合蛋白2(SATB2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞生物学行为的影响。方法选取人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2和肾癌细胞786-O、ACHN,荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测HK-2、786-O和ACHN细胞SATB2 mRNA的表达水平;... 详细信息

目的探讨特异at序列结合蛋白2(SATB2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞生物学行为的影响。方法选取人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2和肾癌细胞786-O、ACHN,荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测HK-2、786-O和ACHN细胞SATB2 mRNA的表达水平;将重组过表达质粒pcDNA3.1-SATB2及空载质粒pcDNA3.1-NC分别转染至786-O肾癌细胞中,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞增殖活力;采用Transwell实验检测两组细胞迁移与侵袭水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞SATB2及N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、抗波形蛋白(Vimentin)的表达。组间比较采用t检验。结果786-O细胞(0.50±0.06)和ACHN细胞(0.57±0.07)中SATB2 mRNA的表达水平明显低于HK-2细胞(1.54±0.10),差异有统计学意义(t=23.13、20.23,P2细胞(0.24±0.02)和pcDNA3.1-NC细胞(0.28±0.03)在第24小时的吸光度(A)值差异无统计学意义(t=2.06,P>0.05),而在第48、72小时,pcDNA3.1-SATB2细胞(0.52±0.03、0.80±0.05)的A值明显低于pcDNA3.1-NC细胞(0.69±0.04、1.11±0.08),差异有统计学意义(t=7.67、8.22,P2细胞迁移细胞数[(76.83±6.82)个]和侵袭细胞数[(53.33±5.35)个]明显低于pcDNA3.1-NC细胞[(135.83±7.96)、(112.67±5.82)个],差异有统计学意义(t=13.78、18.38,P2细胞SATB2(2.01±0.12)、E-cadherin(1.53±0.08)蛋白表达水平明显高于pcDNA3.1-NC细胞(0.38±0.03、0.50±0.05),差异有统计学意义(t=31.82、27.76,P2细胞N-cadherin(0.86±0.05)、Vimentin(0.66±0.05)蛋白表达水平明显低于pcDNA3.1-NC细胞(1.66±0.08、1.29±0.05),差异有统计学意义(t=20.16、20.84,P2在肾癌细胞中表达下降,过表达SATB2可通过调控肾癌细胞的上皮-间充质转化抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。

关键词：肾细胞癌特异at序列结合蛋白2 上皮-间充质转化迁移侵袭

特异at序列结合蛋白2在结直肠癌诊断中的价值

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中国研究型医院 2022年第6期9卷 60-64页

作者：邓鑫童玲内蒙古医科大学赤峰临床医学院病理科赤峰024000

特异at序列结合蛋白2(SATB2)是一种特异性结合在DNA核基质附着区,继而进行调控转录和染色质重塑的转录因子。结直肠癌(CRC)的发病机制可能与微卫星不稳定性(MSI)状态、炎症、激活Wnt通路和免疫微环境等有关。多项研究表明SATB2与CRC的... 详细信息

特异at序列结合蛋白2(SATB2)是一种特异性结合在DNA核基质附着区,继而进行调控转录和染色质重塑的转录因子。结直肠癌(CRC)的发病机制可能与微卫星不稳定性(MSI)状态、炎症、激活Wnt通路和免疫微环境等有关。多项研究表明SATB2与CRC的发病机制显著相关,下面就SATB2在CRC中的表达、与其发病机制的相关性以及诊断价值等方面进行综述。

关键词：结直肠肿瘤发病机制病理诊断特异at序列结合蛋白2

miR599靶向特异at序列结合蛋白2对非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响

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当代医学 2022年第29期28卷 29-31页

作者：占志强黄行志李婷罗湘温莹浩彭辉罗锋珩萍乡市人民医院肿瘤科江西萍乡337055

目的探讨miR599靶向特异at序列结合蛋白2对非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响。方法取冻存A549细胞复苏、培养,取对数生长期细胞用于实验。随机将对数生长期A549细胞分为对照组、miR-599 mimics组、miR-599 inhibitor组、miR-59... 详细信息

目的探讨miR599靶向特异at序列结合蛋白2对非小细胞肺癌A549细胞迁移和侵袭能力的影响。方法取冻存A549细胞复苏、培养,取对数生长期细胞用于实验。随机将对数生长期A549细胞分为对照组、miR-599 mimics组、miR-599 inhibitor组、miR-599 mimics联合pGV141-SATB2组,分别转染空白试剂、miR-599 mimics、miR-599 inhibitor和miR-599 mimics联合pGV141-SATB2。采用qPCR法检测转染前后A549细胞中miR-599 mRNA表达水平,采用Transwell小室检测法测定A549细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot法测定细胞SATB2、E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。结果对照组、miR-599 mimics组、miR-599 inhibitor组和miR-599 mimics联合pGV141-SATB2组A549细胞miR-599 mRNA表达水平比较差异有统计学意义(P2组迁移和侵袭细胞数量比较差异有统计学意义(P2、E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P2,促进上皮间质转化,增强A549细胞迁移和侵袭能力。

关键词： miR599 特异at序列结合蛋白2 非小细胞肺癌 A549细胞

LncRNA MALAT1通过miR-34c/SATB2轴对脂肪间充质干细胞成骨分化的促进作用

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吉林大学学报（医学版） 2020年第5期46卷 963-971,I0002,I0003页

作者：郭玮玮秦悦杨海波米占虎宁夏医科大学总医院创伤骨科宁夏银川750001

目的:探讨长非编码RNA肺癌转移相关转录本1(LncRNA MALAT1)通过微小RNA(miR)-34c/特异at序列结合蛋白2(SATB2)轴对脂肪来源的间充质干细胞(ADSCs)成骨分化的影响,并阐明其作用机制。方法:人ADSCs转染Lenti-NC、Lenti-MALAT1、sh-NC、sh-MALAT1、miR-NC和miR-34c,RT-PCR法检测ADSCs中LncRNA MALAT1、miR-34c和SATB2 mRNA表达水平;miRcode和TargetScan 7.1网站预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-34c与LncRNA MALAT1、miR-34c与SATB2之间的靶向结合作用;Western blotting法检测ADSCs中成骨标志物Runt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙蛋白(OCN)表达水平;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S(ARS)染色检测ADSCs中ALP和ARS水平及钙盐沉积。结果:与第0天比较,ADSCs成骨诱导第3、7、14和21天后,细胞中LncRNA MALAT1、SATB2、Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平明显升高(P蛋白表达水平,ALP和ARS水平明显升高(P蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与Lenti-NC+miR-NC组比较,Lenti-SATB2+miR-NC组ADSCs中Runx2、OPN和OCN蛋白表达水平及ALP和ARS水平明显升高(P0.05)。结论:LncRNA MALAT1通过miRNA-34c/SATB2轴促进ADSCs的成骨分化。

关键词：长链非编码RNA 肺癌转移相关转录本1 脂肪间充质干细胞成骨分化微小RNA-34c 特异at序列结合蛋白2

SATB2促进BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化

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中国生物工程杂志 2015年第10期35卷 20-26页

作者：冯巧灵王玉凤刘晓骅吉彩霞罗进勇重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016

目的:研究特异at序列结合蛋白2(Special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C2C12成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9感染C2C12细胞,RT-PCR检测SATB2在基因水平上的表达变化,Western blot检测SATB2在蛋白水平上的变化;构建过表达SATB2重组腺病毒Ad-SATB2,感染C2C12细胞后,Western blot验证Ad-SATB2表达情况;用AdSATB2处理BMP9诱导的C2C12细胞,碱性磷酸酶(ALP)活性和染色检测成骨早期ALP的变化,茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积的变化。结果:Ad-BMP9处理C2C12细胞后,比对照组SATB2在基因水平和蛋白水平上表达量上调;Ad-SATB2可以在细胞中成功表达SATB2蛋白;用Ad-SATB2处理BMP9诱导的C2C12细胞后,ALP以及钙盐的沉积与对照比较均上调。结论:SATB2可以促进BMP9诱导的间充质干细胞C2C12的成骨分化。

关键词：骨形态发生蛋白9 特异at序列结合蛋白2 C2C12细胞

Satb2过表达对牙髓干细胞增殖和迁移能力的影响

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口腔医学研究 2017年第6期33卷 597-600页

作者：杨旭何丽娜潘爽李艳萍牛玉梅哈尔滨医科大学口腔医学院牙体牙髓病科黑龙江哈尔滨1540000

目的:通过慢病毒介导Satb2(special AT-rich binding protein 2,Satb2)感染人牙髓干细胞(human Dental pulp stem cells,hDPSCs),观察Satb2过表达对人牙髓干细胞迁移和增殖能力的影响。方法:构建Satb2过表达慢病毒感染人牙髓干细胞,通... 详细信息

目的:通过慢病毒介导Satb2(special AT-rich binding protein 2,Satb2)感染人牙髓干细胞(human Dental pulp stem cells,hDPSCs),观察Satb2过表达对人牙髓干细胞迁移和增殖能力的影响。方法:构建Satb2过表达慢病毒感染人牙髓干细胞,通过筛选得到稳定过表达Satb2细胞克隆。CCK8实验检测过表达Satb2对人牙髓干细胞的增殖能力的影响。划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察细胞迁移能力的变化。免疫荧光染色观察细胞骨架微管的变化。结果:过表达Satb2的人牙髓干细胞相比对照组增殖能力增强(P2能使人牙髓干细胞的增殖和迁移能力增强。

关键词：特异at序列结合蛋白2 人牙髓干细胞增殖迁移

SATB2调控牙源性干细胞成骨分化的初步研究

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SATB2调控牙源性干细胞成骨分化的初步研究

作者：程倩钰重庆医科大学

学位级别：硕士

牙源性干细胞被认为是修复颅面骨组织缺损的重要种子细胞,其具有多向分化潜能,能再生不同的组织,并且可以通过相对非侵入性的方法获得。特异at序列结合蛋白2（special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2）是一种核基质蛋白,其... 详细信息

牙源性干细胞被认为是修复颅面骨组织缺损的重要种子细胞,其具有多向分化潜能,能再生不同的组织,并且可以通过相对非侵入性的方法获得。特异at序列结合蛋白2（special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2）是一种核基质蛋白,其参与染色质重塑和转录调控,已被证实可以正向调节成骨分化、骨形成和骨再生。本实验系统地研究了SATB2促进牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）,牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）和脱落乳牙牙髓干细胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED）成骨分化的作用。RNA-seq分析和实时定量PCR结果表明,调节成骨分化的基因在三种细胞中差异表达,并发现SATB2在三种细胞中表达水平较高。用过表达SATB2的腺病毒（Ad SATB2）感染三种细胞,表现出剂量依赖性,随着感染率的增加,显示出更强的ALP染色、ALP活性、茜素红染色和定量;当用沉默表达SATB2的腺病毒（Adsi SATB2）感染三种细胞时,实验结果相反。RNA-seq分析表明下游骨相关基因的表达受到过表达SATB2的影响,实时定量PCR证实了在SATB2过表达后9种骨相关基因（Spp1,Sema7a,Atf4,Ibsp,Col1a1,Sp7,Igfbp3,Dlx3和Alpl）不同程度表达上调。此外,实时定量PCR结果表明SATB2还影响间充质干细胞标志物的表达。这些结果表明SATB2在PDLSCs,DPSCs和SHED的成骨分化过程中起重要作用。后续将进一步研究SATB2调控成骨分化的具体机制、在颅面骨缺损再生修复以及骨组织替代中的临床应用。

关键词：牙源性干细胞特异at序列结合蛋白2 成骨

hMSH6、hPMS2和SATB2蛋白在胃癌中的表达及意义

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hMSH6、hPMS2和SATB2蛋白在胃癌中的表达及意义

作者：李欢大理大学

学位级别：硕士

【背景和目的】胃癌(Gastric carcinoma,GC)是消化道最常见的恶性肿瘤之一,在全球所有癌症中发病率排在第五位,其死亡率排在第三位。胃癌是一种高度异质性的疾病,其发生发展是一个多步骤、多阶段的复杂过程。目前国内外多项研究表明胃... 详细信息

【背景和目的】胃癌(Gastric carcinoma,GC)是消化道最常见的恶性肿瘤之一,在全球所有癌症中发病率排在第五位,其死亡率排在第三位。胃癌是一种高度异质性的疾病,其发生发展是一个多步骤、多阶段的复杂过程。目前国内外多项研究表明胃癌的发生与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.P)感染、EB病毒感染、遗传、理化、饮食、表观遗传修饰等因素均有关,但具体的发病机制尚未完全阐明。近年来,随着分子病理学的发展及应用其进行的相关研究发现,胃癌的发生与微卫星不稳定(Microsatellite instability,MSI)密切相关,MSI可直接或间接引起相关癌基因的激活和抑癌基因的失活,最终诱发癌变。微卫星(Microsatellites,MS)是重复的短串联DNA序列,当错配修复基因(Mismatch repair gene,MMR)缺陷或突变时,微卫星序列容易出现复制错误进而导致MSI。错配修复基因是一组高度保守的基因,其功能是修复DNA复制或损伤时发生的错误,如碱基错配、缺失以及插入等,在维持DNA信息传递的保真度中发挥重要作用。MMR基因的缺陷或异常改变可引起基因组的不稳定性以及突变的积累,导致肿瘤的发生发展。研究表明,MMR基因缺陷是遗传性非息肉性结直肠癌发病的主要机制,在其他肿瘤如子宫内膜癌、肺癌和胃癌中也发现MMR基因的缺陷参与肿瘤的形成。错配修复基因hMSH6和hPMS2是修复系统中两个重要的基因,可启动细胞的错配修复过程。已有研究学者提出hPMS2蛋白的表达缺失可能在胃的实体型低分化腺癌的发生发展中起重要作用,而在胃黏膜组织中检测hMSH6蛋白的表达情况可能有助于胃黏膜异型增生和浸润性胃癌的早期鉴别。富含AT序列的特异性结合蛋白2(Special AT-rich sequence binding protein 2,SATB2)是新发现的与核基质附着区结合的转录因子,SATB2蛋白在基因重组、染色质重构以及细胞分化中等多个过程中起着较重要的生物学作用,成为目前国内外研究人员探索其在癌症发生发展中潜在作用的热点。有研究表明SATB2参与多种恶性肿瘤的发生,包括结直肠癌、乳腺癌、食管鳞状细胞癌、口腔鳞癌、胃癌、骨肉瘤等。对于SATB2蛋白在恶性肿瘤中的作用机制,目前的文献表明SATB2即可以作为肿瘤抑制因子,也可以作为致癌因子,究其原因可能是SATB2蛋白在不同类型的肿瘤组织细胞中其能调节不同的下游基因表达,从而发挥不同的生物学作用。有研究显示在胃癌中SATB2可能发挥抑癌基因的作用并因此可能成为潜在的治疗新靶标。然而SATB2蛋白具体在胃癌发生发展中是如何发挥作用、其相关的机制或途径尚未见相关文献报道。有研究报道,在结直肠癌中SATB2表达的缺失更容易在错配修复基因缺陷的肿瘤中观察到,在胃癌中是否也存在SATB2蛋白表达缺失与错配修复基因缺陷肿瘤相关?二者在胃癌发生发展过程中是否起着协同抑或完全不相关?目前MMR基因hMLH1、hMSH2蛋白在胃癌中研究较多,并证实了其在胃癌的发生发展中起重要作用,但hMSH6和hPMS2蛋白具体在胃癌发生发展中如何发挥作用,二者之间有无关联等目前尚未见明确研究报道,有待进一步深入研究。故本研究拟通过免疫组织化学方法检测胃癌组织中错配修复蛋白hMSH6、hPMS2以及SATB2蛋白的表达情况,分析三种蛋白之间及其与临床病理特征的关系,并进一步探讨胃癌的发生发展机制,为促进胃癌的早期诊断和治疗方法提供基础研究数据。【材料和方法】1.收集2015年9月至2017年9月云南省昆明金域医学检验所有限公司病理诊断部行胃癌根治术并最终诊断为胃癌患者的石蜡包埋标本100例作为实验组;选取50例非癌胃黏膜石蜡包埋标本作为本实验的对照组。2.通过免疫组织化学法检测150例实验标本中hMSH6、hPMS2和SATB2蛋白的表达情况,并在高年资的病理医生指导下进行临床病理分析。3.统计学分析:采用SPSS17.0统计软件包进行数据的分析,hMSH6、hPMS2和SATB2蛋白的表达与各临床病理特征之间的关系用计数资料?检验,采用Spearman直线相关进行三者之间的相关性分析,以P蛋白在胃癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系1.1 hMSH6蛋白在100例胃癌组织中9例表达缺失,缺失率为9%(9/100)、在50例非癌黏膜组织中均呈阳性表达,缺失率为0%(0/50),比较hMSH6蛋白在胃癌组织与非癌黏膜组织中的表达缺失率,差异有统计学意(P=0.029)。1.2 hMSH6蛋白的表达与胃癌患者的性别(P=0.493)、年龄(P=0.355)、分化程度(P>0.999)、肿瘤大小(P=0.727)、脉管癌栓(P>0.999)

关键词：胃癌错配修复微卫星不稳定性特异at序列结合蛋白2 免疫组织化学

结直肠癌中靶向调控SATB2的有关miRNAs的研究

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临床和实验医学杂志 2019年第16期18卷 1728-1732页

作者：王军梅朱李茹郝世勇襄阳市中心医院检验科

目的探讨结直肠癌中靶向调控特异at序列结合蛋白2(SATB2)有关的miR-31和miR-182的表达水平的意义,并分析其与SATB2的关系。方法从病检确诊为结直肠癌的标本中随机选取6例为实验组,从非癌症的标本中随机选取6例为对照组。利用荧光原位杂... 详细信息

目的探讨结直肠癌中靶向调控特异at序列结合蛋白2(SATB2)有关的miR-31和miR-182的表达水平的意义,并分析其与SATB2的关系。方法从病检确诊为结直肠癌的标本中随机选取6例为实验组,从非癌症的标本中随机选取6例为对照组。利用荧光原位杂交技术和RT-PCR技术,分别检测结直肠癌细胞组织中miRNA的表达情况,以及正常对照组织中候选miRNA的表达情况,分析miRNA和SATB2之间的关系及其临床意义。CCK-8法检测miRNA对体外细胞增值的影响。流式细胞术检测miRNA对细胞周期的影响。裸鼠皮下成瘤比较miRNA对肿瘤增值的影响。结果导入miR-182和miR-31的模拟物后,降低细胞内SATB2表达水平(P20和M5细胞中的SATB2表达(P2和miR-31表达明显增高(P20/miR-31和M5/miR-31细胞增殖能力明显高于对照组细胞的增殖能力(P20/miR-182和M5/miR-182细胞增殖能力明显高于对照组细胞的增殖能力(P2组,停留在G1期的细胞减少(P20/miR-31和SW620/miR-182与对照组细胞相比,皮下成瘤速度较快(P2在结直肠癌中高表达与SATB2表达具有显著性相关,同时miR-31和miR-182能反向调控SATB2的表达。

关键词：结直肠癌特异at序列结合蛋白2 miR-31 miR-182 RT-PCR