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邻苯二酚、间苯三酚与牛血清蛋白、肌球蛋白相互作用的机理研究

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邻苯二酚、间苯三酚与牛血清蛋白、肌球蛋白相互作用的机理研究

作者：褚千千上海海洋大学

学位级别：硕士

褐藻多酚是一种从褐藻中提取出来的间苯三酚的聚合物,前期已经证实了褐藻多酚能够提高鱼糜凝胶的凝胶强度。为了进一步研究褐藻多酚与蛋白质之间的反应机理,本文先选择其单体酚—间苯三酚(MP)作为研究对象。间苯三酚由于其结构的特殊性... 详细信息

褐藻多酚是一种从褐藻中提取出来的间苯三酚的聚合物,前期已经证实了褐藻多酚能够提高鱼糜凝胶的凝胶强度。为了进一步研究褐藻多酚与蛋白质之间的反应机理,本文先选择其单体酚—间苯三酚(MP)作为研究对象。间苯三酚由于其结构的特殊性还未见有人研究它和蛋白质的反应,同时我们选择与间苯三酚结构相近的邻苯二酚(OP)作为比较。鱼糜凝胶中起主要作用的蛋白质是肌球蛋白(Myo),由于其结构的复杂性,我们先选择牛血清蛋白(BSA)作为主要蛋白质参照,BSA是一种具有较高的分子量的球蛋白,并且可以与酚类化合物形成可溶性复合物,适合用于这类机理的研究。在此研究基础上再选择肌球蛋白作为研究对象。蛋白质游离氨基含量的变化能够反映蛋白质所发生的化学变化。本文首先研究了三硝基苯磺酸(TNBS)法测定蛋白质游离氨基含量的分析条件,结果显示采用紫外可见吸收光谱法在碱性终止反应条件分析准确性高,蛋白质种类不仅影响到该方法的取样浓度,而且蛋白质中的二硫键会干扰该方法的准确性。其次确定两种酚类化合物氧化程度的监测方法,选择酚类化合物-蛋白质复合物的制备方法。采用Folin-Ciocalteu法和紫外可见吸收光谱法监测OP、MP的氧化过程。采用两种制备方式将氧化和未氧的OP、MP与BSA进行反应制备酚类化合物-蛋白质复合物,通过测定反应前后BSA游离氨基含量的变化评价两种制备方式的可行性。结果表明,OP、MP在氧气存在的碱性条件下(p H 9)即可氧化并且发生聚合,相较Folin-Ciocalteu法,紫外可见吸收光谱能够准确监测OP、MP的氧化程度,OP、MP在25℃下氧化24 h可完全氧化。氧化的OP、MP可使BSA游离氨基含量降低,将OP、MP先氧化再与BSA反应为最佳制备方式。为了研究酚类化合物与蛋白质相互作用的机理,分别用氧化的邻苯二酚(OOP)、间苯三酚(OMP)和未氧化的邻苯二酚(OP)、间苯三酚(MP)和BSA、Myo在25℃下进行反应。分析BSA、Myo与氧化和未氧化的OP、MP反应前后游离氨基、巯基、表面疏水性的变化;BSA与OP、MP反应前后蛋白质之间的非共价相互相互作用力的变化;应用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、圆二色谱(CD)、差式扫描量热仪(DSC)表征蛋白质构象的变化。结果显示:BSA、Myo与OP、MP相互作用后,游离氨基、巯基含量的变化不显著,但是OOP、OMP可使BSA、Myo游离氨基、巯基含量显著降低,并且OOP-BSA的降低量大于OMP-BSA。OP、MP、OOP、OMP都会使BSA、Myo表面疏水性显著降低,并且OP-BSA、OOP-BSA的降低量大于MP-BSA、OMP-BSA,而OPMyo、OOP-Myo的降低量小于MP-Myo、OMP-Myo,这种差异性是由于BSA、Myo结构的不同引起的。OP、MP对BSA的离子键没有显著影响,但会导致BSA的氢键显著升高,并且MP-BSA的增加量大于OP-BSA;OP可使BSA疏水相互作用显著升高,而MP导致疏水相互作用显著降低;FTIR和CD结果显示,OP、MP、OOP、OMP都会导致BSA二级结构的变化,四种复合物中α-螺旋含量降低,β-折叠、β-转角、无规卷曲含量上升,这表明BSA与OP、MP之间的结合破坏了BSA的二级结构,并且OP、OOP的影响大于MP、OMP;DSC结果表明,OP、MP、OOP、OMP的引入提高了BSA的变性温度。这些结果证实了邻苯二酚、间苯三酚既能与BSA、Myo发生共价相互作用也能发生非共价相互作用。最后模拟了鱼糜制品凝胶的形成过程中酚类化合物的作用,对样品采用两段式加热:40℃加热1 h,接着90℃加热30 min,探究热处理对邻苯二酚、间苯三酚和BSA相互作用的影响。通过分析热处理前后BSA及其复合物游离氨基、巯基含量的变化,表面疏水性的变化,非共价相互作用力的变化以及二级结构的变化来表征热处理对于酚类化合物和BSA的相互作用的影响。结果表明:温度升高促进了OP、MP的氧化,氧化后的产物也就是醌类物质能够和BSA的巯基、游离氨基发生共价相互作用,因而促进了酚类化合物与BSA的共价相互作用;温度升高促进了酚类化合物与BSA疏水性氨基酸的共价和非共价反应,使BSA表面疏水性降低;加热对OP、MP与BSA之间的离子键影响不显著,会导致OP-BSA、MP-BSA氢键含量显著降低,疏水相互作用升高;温度升高促进了酚类化合物和BSA的结合并且BSA分子发生聚集,从而使BSA的二级结构发生变化,主要表现为α-螺旋含量降低,无规卷曲含量升高,当温度达到BSA变性温度时酚类化合物在一定程度上抑制了BSA的变性聚集。

关键词：牛血清蛋白肌球蛋白邻苯二酚间苯三酚作用机理

水滑石/染料分子复合薄膜的构筑及其对牛血清蛋白的荧光响应

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水滑石/染料分子复合薄膜的构筑及其对牛血清蛋白的荧光响应

作者：王腾利北京化工大学

学位级别：硕士

本论文选取两种荧光染料分子直接黄12(DY12)和赤藓红(ER)为客体，以水滑石为基质，采用静电层层组装的方法分别构筑了(LDH/DY12)和(LDH/ER)两种复合超薄膜。通过紫外-可见光谱和荧光光谱监测两种薄膜的组装过程，结果表明组装过程是规... 详细信息

本论文选取两种荧光染料分子直接黄12(DY12)和赤藓红(ER)为客体，以水滑石为基质，采用静电层层组装的方法分别构筑了(LDH/DY12)和(LDH/ER)两种复合超薄膜。通过紫外-可见光谱和荧光光谱监测两种薄膜的组装过程，结果表明组装过程是规则有序的，且薄膜具有a、b面平行于基底的高取向性。通过对(LDH/ER)不同层数薄膜的荧光光谱可知，26层的(LDH/ER)薄膜显示出最佳的荧光发射谱。进一步通过扫描电镜、原子力显微镜和X射线衍射的表征，探讨了薄膜的形貌和结构，可知(LDH/ER)复合薄膜的厚度约为44nm，每一层的厚度约为1.65nm，据此推测染料分子ER在水滑石层板间呈现单层排列。选择复合薄膜(LDH/ER)为研究对象，考察薄膜对牛血清蛋白(BSA)的荧光响应。结果发现，在BSA较宽的浓度范围内(5-90μg/ml)，(LDH/ER)复合超薄膜对BSA荧光响应具有较好的线性关系，线性方程为I=663.63-6.40C2[BSA]，R=0.9859，且检测限达到2.51μg/ml;进一步的研究发现，(LDH/ER)复合薄膜展示出良好的选择性、稳定性、可再生性和循环性。通过荧光偏振、圆二色谱和荧光光谱，研究(LDH/ER)超薄膜荧光化学传感器检测BSA及其再生的反应机理，表明该无机-有机复合薄膜(LDH/ER)在生物传感分析领域具有潜在的应用前景。

关键词：水滑石赤藓红薄膜牛血清蛋白荧光传感器

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牛血清蛋白与肉桂酸和阿魏酸的相互作用研究

广州化工 2012年第20期40卷 70-72,86页

作者：刘一辛何天稀王立光娄方赖容王志民重庆燃气集团股份有限公司技术中心重庆400068 后勤工程学院军事油料应用与管理工程系重庆400016

采用亲和毛细管电泳法,研究了牛血清蛋白(BSA)与两种结构相似的羧酸类化合物肉桂酸(CA)和阿魏酸(FA)间的相互作用。采用淌度比计算得到25℃时CA与FA的结合常数分别为3.5318×104L/mol、8.0158×104L/mol,并根据不同温度的结合常数计算了... 详细信息

采用亲和毛细管电泳法,研究了牛血清蛋白(BSA)与两种结构相似的羧酸类化合物肉桂酸(CA)和阿魏酸(FA)间的相互作用。采用淌度比计算得到25℃时CA与FA的结合常数分别为3.5318×104L/mol、8.0158×104L/mol,并根据不同温度的结合常数计算了ΔS、ΔH、ΔG等热力学参数。热力学参数表明,CA、FA与BSA体系间的相互作用力以氢键作用力和范德华作用力为主。

关键词：肉桂酸阿魏酸牛血清蛋白结合常数

牛血清蛋白壳聚糖自组装纳米胶束的制备及理化性质研究

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牛血清蛋白壳聚糖自组装纳米胶束的制备及理化性质研究

2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周

作者：霍美蓉周建平陆建男钱红艳

目的:两亲性壳聚糖衍生物N-辛基-O,N-羟乙基壳聚糖（OGC）对牛血清蛋白（BSA）的负载及物化性质研究。方法:采用超声法制备BSA自组装纳米胶束（BSA-OGC纳米胶束）,高速冷冻离心和荧光法测定包封率和载药量,并测定粒径、zeta-电位,透射... 详细信息

目的:两亲性壳聚糖衍生物N-辛基-O,N-羟乙基壳聚糖（OGC）对牛血清蛋白（BSA）的负载及物化性质研究。方法:采用超声法制备BSA自组装纳米胶束（BSA-OGC纳米胶束）,高速冷冻离心和荧光法测定包封率和载药量,并测定粒径、zeta-电位,透射电镜（TEM）观察其形态,荧光扫描、红外光谱（FT-IR）、差示扫描量热分析（DSC）和广角x-粉末衍射（WARD）研究其理化性质。结果:BSA-OGC包封率、载药量分别为42～81%、11～4.85%;载药后胶束粒径由194.8±6.0nm降至160.3±8.9nm～186.6±7.9nm,zeta-电位由16.8±3.8mV降至3.3±0.2mV～8.2±0.3mV;TEM照片显示OGC和BSA-OGC皆为规则球体,粒径分布均匀;荧光扫描、FT-IR、DSC、WARD结果表明BSA包裹在OGC中,证明两者是通过电荷和疏水双重作用自组装成纳米胶束。结论:两亲性壳聚糖衍生物（OGC）作为蛋白类药物的传递载体具有潜在应用价值。

关键词：牛血清蛋白壳聚糖自组装纳米胶束

牛血清蛋白对蓝莓花色苷稳定性的保护作用研究

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牛血清蛋白对蓝莓花色苷稳定性的保护作用研究

中国食品科学技术学会第十八届年会

作者：藏志焕田金龙丑述睿李斌沈阳农业大学食品学院

花色苷作为蓝莓中重要的功能活性物质备受人们关注,但是花色苷加工稳定性差、生物可及性低,制约了其产业化应用。本研究利用牛血清蛋白与花色苷进行特异性结合,旨在评估加工和贮藏过程中牛血清蛋白对花色苷稳定性的影响。将牛血清蛋白... 详细信息

花色苷作为蓝莓中重要的功能活性物质备受人们关注,但是花色苷加工稳定性差、生物可及性低,制约了其产业化应用。本研究利用牛血清蛋白与花色苷进行特异性结合,旨在评估加工和贮藏过程中牛血清蛋白对花色苷稳定性的影响。将牛血清蛋白与花色苷以1:1的比例混合后,测定牛血清蛋白一花色苷复合物在光照、蔗糖、维生素C处理后的稳定性及抗氧化活性,然后采用体外模拟消化的方法加以验证。结果表明,加入0.15 mg/mL的牛血清蛋白对花色苷保护效果最好。与单独的花色苷样品相比,复合物在光照、蔗糖、维生素C处理后的稳定性分别提高了28.26%、40.54%、11.68%。细胞内抗氧化能力及过氧自由基清除能力的结果表明,牛血清蛋白保护了花色苷的抗氧化活性。体外模拟消化结果表明,牛血清蛋白对花色苷的保护效果在小肠消化时较为明显。本研究为解决蓝莓花色苷在加工和贮藏过程中的稳态化问题提供理论基础。

关键词：蓝莓花色苷牛血清蛋白稳定性抗氧化活性体外模拟消化

牛血清蛋白壳聚糖自组装纳米胶束的制备及理化性质研究

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牛血清蛋白壳聚糖自组装纳米胶束的制备及理化性质研究

中国药理学会药学监护专业委员会第一届第四次学术研讨会

作者：霍美蓉周建平陆建男钱红艳

目的:两亲性壳聚糖衍生物N-辛基-O,N-羟乙基壳聚糖(OGC)对牛血清蛋白(BSA)的负载及物化性质研究。方法:采用超声法制备BSA自组装纳米胶束(BSA-OGC纳米胶束),高速冷冻离心和荧光法测定包封率和载药量,并测定粒径、zeta-电位,透射电镜(TEM... 详细信息

目的:两亲性壳聚糖衍生物N-辛基-O,N-羟乙基壳聚糖(OGC)对牛血清蛋白(BSA)的负载及物化性质研究。方法:采用超声法制备BSA自组装纳米胶束(BSA-OGC纳米胶束),高速冷冻离心和荧光法测定包封率和载药量,并测定粒径、zeta-电位,透射电镜(TEM)观察其形态,荧光扫描、红外光谱(FT-IR)、差示扫描量热分析(DSC)和广角x-粉末衍射(WARD)研究其理化性质。结果:BSA-OGC包封率、载药量分别为42～81%、11～4.85%;载药后胶束粒径由194.8±6.0nm降至160.3±8.9nm～186.6±7.9nm。zeta-电位由16.8±3.8 mV降至3.3±0.2 mV～8.2±0.3 mV;TEM照片显示OGC和BSA-OGC皆为规则球体,粒径分布均匀;荧光扫描、FT-IR、DSC、WARD结果表明BSA包裹在OGC中,证明两者是通过电荷和疏水双重作用自组装成纳米胶束。结论:两亲性壳聚糖衍生物(OGC)作为蛋白类药物的传递载体具有潜在应用价值。

关键词：牛血清蛋白壳聚糖自组装纳米胶束

牛血清蛋白介导合成荧光金纳米团簇用于诺氟沙星的检测

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牛血清蛋白介导合成荧光金纳米团簇用于诺氟沙星的检测

第十一届全国高聚物分子与结构表征学术研讨会

作者：李强张桂峰李云皓莫康伟卫妮易昌凤徐祖顺鲁植艳严微功能材料绿色制备与应用教育部重点实验室高分子材料湖北省重点实验室有机化工新材料湖北省协同创新中心湖北大学材料科学与工程学院武汉大学中南医院放射科

金纳米团簇(Au NCs)是一种新型的荧光纳米材料,由几个到几百个原子组成,尺寸在1～3 nm。作为一类新兴的荧光探针可将其用于一些重要的小分子化合物的检测。本文以牛血清蛋白(BSA)为还原剂和稳定剂,采用"绿色一锅法"合成了稳定的水溶性... 详细信息

金纳米团簇(Au NCs)是一种新型的荧光纳米材料,由几个到几百个原子组成,尺寸在1～3 nm。作为一类新兴的荧光探针可将其用于一些重要的小分子化合物的检测。本文以牛血清蛋白(BSA)为还原剂和稳定剂,采用"绿色一锅法"合成了稳定的水溶性金纳米团簇(AuNCs@BSA),该团簇发射明亮的红色荧光(λ=640 nm),在水溶液中荧光量子产率达到4.6%。实验发现,诺氟沙星(NFLX)对Au NCs的荧光有明显地响应,基于此构建了荧光探针检测NFLX的新方法。实验结果表明,Au NCs的荧光强度变化量与NFLX的浓度呈良好的线性关系。这一检测方法可用于一些特定环境下如土壤、细胞组织中痕量诺氟沙星的检测分析。

关键词：金纳米团簇牛血清蛋白荧光探针诺氟沙星

碱性介质中茜素黄R与牛血清蛋白相互作用研究

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西南科技大学学报 2007年第3期22卷 14-19页

作者：胡亚敏蒋琪英张欢迟燕华李小凯西南科技大学材料科学与工程学院化学系四川绵阳621010

在碱性条件下，采用紫外一可见分光光度法研究了茜素黄R（Alizarin Yellow R）与牛血清白蛋白（BSA）的结合反应。研究表明，AYR—BSA二元配合物的最大吸收波长为386nm，比AYR紫移约108nm；建立了碱性条件下以AYR测定蛋白质的光谱分析... 详细信息

在碱性条件下，采用紫外一可见分光光度法研究了茜素黄R（Alizarin Yellow R）与牛血清白蛋白（BSA）的结合反应。研究表明，AYR—BSA二元配合物的最大吸收波长为386nm，比AYR紫移约108nm；建立了碱性条件下以AYR测定蛋白质的光谱分析法，对样品分析表明，回收率为96．4％～106．6％，相对标准偏差为0．28％～1．13％；采用双波长法、平衡透析法和单波长法对AYR与BSA的相互作用的研究结果基本一致，在386nm处，AYR—BSA配合物均结合比为nAYR：nBSA=5：1，摩尔吸光系数ε=9．12×10^3L·mol^-1·cm^-1，相互作用的条件平衡常数K=8.13×10^5。

关键词：茜素黄R 牛血清蛋白分光光度法双波长法平衡透析法

Bola表面活性剂与牛血清蛋白相互作用的光谱研究

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武汉工程大学学报 2017年第2期29卷 120-126页

作者：王璇张旗方成周泽坤刘治田武汉工程大学材料科学与工程学院湖北武汉430205 等离子体化学与新材料湖北省重点实验室(武汉工程大学) 湖北武汉430205

采用荧光光谱法、紫外吸收光谱法和圆二色谱法研究了在Na_2HPO_3-NaH_2PO_3缓冲溶液(pH=7.4,298 K)中三种不同头基的Bola表面活性剂Bola(Me)、Bola(Et)、Bola(Pr)与牛血清蛋白(BSA)的相互作用,考察了表面活性剂浓度、结构对相互作用的影... 详细信息

采用荧光光谱法、紫外吸收光谱法和圆二色谱法研究了在Na_2HPO_3-NaH_2PO_3缓冲溶液(pH=7.4,298 K)中三种不同头基的Bola表面活性剂Bola(Me)、Bola(Et)、Bola(Pr)与牛血清蛋白(BSA)的相互作用,考察了表面活性剂浓度、结构对相互作用的影响,初步阐明了Bola表面活性剂与BSA的结合机理.结果表明:三种Bola表面活性剂均对BSA的荧光强度有静态猝灭作用,并导致其最大发射波长蓝移;表面活性剂的加入主要影响BSA的色氨酸(Trp)残基;表面活性剂头基的烷基链越长,Stern-Volmer猝灭常数越大,表明具有较长头基烷基链的表面活性剂与BSA具有更强的相互作用.

关键词： Bola表面活性剂牛血清蛋白荧光光谱圆二色谱