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牛蒡苷对皮质酮诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞系细胞损伤的保护作用及其机制

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延边大学医学学报 2022年第4期45卷 235-239页

作者：王雨鲁京梅赵新宇金光男郭佳晴朴硕彭娟张美玲徐翔朴莲荀延边大学药学院吉林延吉133002

[目的]探讨牛蒡苷(ARC)对皮质酮(CORT)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞系(PC12)细胞损伤的保护作用及其机制.[方法]将PC12细胞分为正常组(未给予任何处理)、模型组(CORT处理未给药)、ARC低剂量组(CORT+50μmol/L ARC)及ARC高剂量组(CORT+100μmo... 详细信息

[目的]探讨牛蒡苷(ARC)对皮质酮(CORT)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞系(PC12)细胞损伤的保护作用及其机制.[方法]将PC12细胞分为正常组(未给予任何处理)、模型组(CORT处理未给药)、ARC低剂量组(CORT+50μmol/L ARC)及ARC高剂量组(CORT+100μmol/L ARC).采用MTS法检测细胞存活率,LDH法检测LDH释放率,Annexin V染色法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)及高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白的表达情况.[结果]与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低(P<0.001),LDH释放率、细胞凋亡率均显著升高(P<0.001),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.001),Bax、Caspase-3及HMGB1蛋白表达水平显著升高(P<0.001).与模型组比较,给予不同浓度的ARC(100、50μmol/L)组细胞存活率均显著升高(P<0.001,P<0.01),LDH释放率、细胞凋亡率及坏死率均显著降低(P<0.001,P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.001,P<0.05),Bax、Caspase-3及HMGB1蛋白表达水平均显著降低(P<0.001,P<0.01).[结论]ARC对CORT诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节凋亡通路抑制凋亡和抑制HMGB1向细胞质转移有关系.

关键词：抑郁神经元损伤牛蒡苷皮质酮嗜铬细胞瘤细胞系大鼠

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牛蒡苷对小鼠急性毒性及神经系统的影响

时珍国医国药 2014年第6期25卷 1281-1283页

作者：张淑雅颜贝王小萍芦晓红张宏裴秀英宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室/生物化学与分子生物学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院宁夏银川750004 第二军医大学药学院上海200433

目的观察牛蒡苷对小鼠急性毒性及神经系统的影响,为牛蒡苷及牛蒡子的临床安全用药提供依据。方法采用灌胃和腹腔注射方法确定小鼠的半数致死剂量（LD50）。应用自发活动测试、戊巴比妥钠阈下催眠试验和协同催眠试验观察牛蒡苷对小鼠神... 详细信息

目的观察牛蒡苷对小鼠急性毒性及神经系统的影响,为牛蒡苷及牛蒡子的临床安全用药提供依据。方法采用灌胃和腹腔注射方法确定小鼠的半数致死剂量（LD50）。应用自发活动测试、戊巴比妥钠阈下催眠试验和协同催眠试验观察牛蒡苷对小鼠神经系统的影响。结果小鼠口服牛蒡苷的LD50为7.13g/kg,相当于人临床剂量的580倍;腹腔注射LD50为0.74g/kg,相当于人日口服剂量的60倍。口服0.122∽0.488g/kg剂量的牛蒡苷（相当于临床剂量的10,20和40倍）对神经系统无明显影响。结论牛蒡子药材临床口服途径应用安全,但非口服途径应慎重使用。

关键词：牛蒡苷毒性神经系统

牛蒡苷单克隆抗体的制备及其ELISA免疫分析方法的建立

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牛蒡苷单克隆抗体的制备及其ELISA免疫分析方法的建立

作者：闫昕北京中医药大学

学位级别：硕士

研究目的:（1）合成中药小分子牛蒡苷（ARC）的人工抗原。（2）筛选能够特异性分泌抗牛蒡苷抗体的单克隆细胞株,并制备抗牛蒡苷单克隆抗体。（3）基于获得的单克隆抗体建立酶联免疫分析方法（ELISA）,并对其进行方法学考察。研究方法:... 详细信息

研究目的:（1）合成中药小分子牛蒡苷（ARC）的人工抗原。（2）筛选能够特异性分泌抗牛蒡苷抗体的单克隆细胞株,并制备抗牛蒡苷单克隆抗体。（3）基于获得的单克隆抗体建立酶联免疫分析方法（ELISA）,并对其进行方法学考察。研究方法:采用依照本实验需求改进的高碘酸钠氧化法,制备牛蒡苷的人工抗原（免疫原和包被原）。用薄层色谱法（TLC）以及飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）法对以上的合成产物进行鉴定,以确定其偶联结果。而后用合成的人工免疫原免疫小鼠,与等体积弗氏佐剂乳化均匀后背部皮下多点注射,每隔两周加强免疫一次,以充分诱导小鼠的免疫应答。四次免疫后尾尖取血,ELISA法检测抗血清的效价,评价免疫效果;间接竞争检测抗血清的特异性。取免疫后小鼠的脾脏制备脾单细胞悬液,采用PEG法将脾细胞与SP2/0杂交瘤细胞融合,筛选可分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞。有限稀释法进行单克隆化以获得单克隆细胞株,采用体内腹水诱导法完成抗体的扩大生产。基于生产的牛蒡苷单克隆抗体建立间接竞争ELISA检测方法,考察该方法的特异性、灵敏度、交叉反应率、回收率等相关指标。研究结果:（1）薄层色谱鉴定和飞行时间质谱的结果说明,合成的产物ARC-BSA和ARC-OVA偶联成功;飞行时间质谱检测结果显示,人工抗原合成成功,偶联比为6:1。（2）小鼠抗血清效价在1:16000以上,标准竞争抑制曲线表明,血清中的抗体可与ARC产生特异性结合。取免疫的小鼠脾细胞进行细胞融合,筛选出了能特异性分泌抗ARC抗体的单克隆细胞株。腹水诱导法制备了大量ARC单克隆抗体（3）基于制备的ARC单克隆抗体,建立相应的ELISA分析法。包被原ARC-OVA以1:8000的浓度稀释,腹水以1:40000的浓度稀释,得到ARC单克隆抗体的抑制率与线性关系曲线,回归方程为:y =-0.2031n（x）+ 2.1102,R2=0.9969。线性范围为125~3981 ng/mL,半数抑制率IC50为1466.0ng/mL。方法学考察结果显示,加样回收率在97.5~107.4%之间（均值为102.2%）,板内差异＜4.62%,板间差异＜8.67%。通过ELISA法测试ARC单抗与它中药活性成分反应的交叉反应率。结果显示ARC单抗与其他成分的交叉反应率均小于0.10%。说明制备的ARC单克隆抗体有良好的特异性。研究结论及意义:本实验首次成功合成了 ARC的人工抗原,为ARC单克隆抗体的筛选和制备以及相关免疫方法的建立奠定基础;首次筛选出ARC的单克隆细胞株;首次制备出了 ARC的单克隆抗体;首次利用生产出的ARC单克隆抗体建立ELISA酶联免疫吸附分析方法。本研究为牛蒡苷的检测提供了一种全新的技术手段,同时为中药牛蒡子以及含有牛蒡子的中药复方的质量控制、物质基础、体内代谢与分布、药理药效等多方面的研究奠定了基础。

关键词：牛蒡苷人工抗原单克隆抗体酶联免疫分析法牛蒡子

牛蒡苷对T.g.HSP70通过TLR4信号通路诱导弓形虫感染肝细胞的影响

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牛蒡苷对T.g.HSP70通过TLR4信号通路诱导弓形虫感染肝细胞的影响

作者：张明月延边大学

学位级别：硕士

目的:探讨牛蒡苷（Arctiin,ARC）对弓形虫热休克蛋白 70（T.g.HSP70）诱导弓形虫感染肝细胞NCTC 1469损伤的保护作用及其作用机制。研究方法:通过体外实验培养小鼠正常肝细胞NCTC 1469,以2.5×105的细胞密度均匀铺在6 cm培养皿中,随机... 详细信息

目的:探讨牛蒡苷（Arctiin,ARC）对弓形虫热休克蛋白 70（T.g.HSP70）诱导弓形虫感染肝细胞NCTC 1469损伤的保护作用及其作用机制。研究方法:通过体外实验培养小鼠正常肝细胞NCTC 1469,以2.5×105的细胞密度均匀铺在6 cm培养皿中,随机分为正常组（Normal）,弓形虫感染组（T.gondii）,弓形虫热休克蛋白70组（T.g.HSP70）,模型组（T.gondii+T.g.HSP70）,以及牛蒡苷低、中、高三个不同剂量组（ARC 25 μM,50 μM,100 μM）。当 NCTC 细胞贴壁生长至 60-70%时,除正常组与弓形虫热休克蛋白70组外,其余组按弓形虫:细胞为5:1的比例感染RH株速殖子（1.25×106个/皿）,感染4 h后,洗去游离的弓形虫,换液加药治疗36h,除正常组与T.gondii组外,其余各组在收集细胞前加入T.g.HSP70诱导30 min,观察各组细胞变化,收集细胞上清和沉淀。用MTT法检测ARC和T.g.HSP70对肝细胞NCTC 1469的毒性;用ELISA法检测细胞上清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶（ALT）,天冬氨酸氨基转移酶（AST）;用H/E染色法在显微镜下观察肝细胞的病理变化;用蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测细胞中Toll样受体4（TLR4）,髓样分化因子88（MyD88）,磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶（p-MAPKs）,核转录因子（NF-κB）,磷酸化的胞浆型磷脂酶A2（p-cPLA2）,血小板活化因子（PAF）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等蛋白的表达;用免疫荧光法在荧光显微镜下观察肝细胞中NF-κB基因的核转录变化;用RT-PCR法检测细胞中T.g.HSP70和SAG1 mRNA的表达水平。结果:MTT细胞毒性实验结果表明:ARC（25 μM,50 μM,100 μM）对正常肝细胞均无毒性,T.g.HSP70（1μg/rnL,2 μg/mL,3μg/mL）对肝细胞均无毒性。转氨酶实验结果表明:与正常组相比,T.gondii组ALT、AST水平均明显升高（P＜0.05,P＜0.01）;T.g.HSP70组无显著性差异,比较没有统计学意义（P＞0.05）;而模型组转氨酶水平显著升高（P＜0.001,P＜0.001）,并与弓形虫感染组相比有显著性差异（P＜0.001,P＜0.01）。结果表明,T.g.HSP70对正常肝细胞无损伤作用,但能够加重弓形虫感染的肝细胞受损。而ARC组可呈一定剂量依赖性的降低模型组中ALT、AST水平,其中高剂量组与模型组相比有明显的抑制作用（P＜0.001）。H/E染色结果表明:正常组肝细胞排列整齐,核仁清晰可见。弓形虫感染组,细胞中存在少量的弓形虫,肝细胞有轻度受损。T.g.HSP70组与正常组相比无明显变化。模型组中,细胞中存在大量弓形虫,核仁缩小,肝细胞严重受损。而经过不同浓度的ARC干预之后,细胞中的弓形虫数量明显减少,肝细胞排列相对整齐,其中高浓度组几乎接近于正常组。Western Blotting实验结果表明:与正常组相比,模型组中TLR4、MyD88、p-MAPKs（p-p38、p-ERK）、核蛋白中 NF-κB 的核转录、cPLA2、PAF的活化和炎症因子TNF-α的产生明显增强（P＜0.001,P＜0.05）,同时促进胞浆蛋白IκB-α的降解（P＜0.001）;而ARC组可明显抑制模型组中TLR4、p-MAPKs（p-p38,p-ERK）、p-cPLA2、PAF 及 TNF-α等蛋白的表达和NF-κB的核转录,激活IκB-α的表达（P＜0.05）。免疫荧光结果表明,在模型组中NF-κB蛋白主要存在于细胞核中;而ARC可明显抑制T.g.HSP70诱导的NF-κB核转录。RT-PCR结果表明:与正常组相比,模型组肝细胞中T.g.HSP70 mRNA和SAG1 mRNA转录水平均明显增加（P＜0.001,P＜0.001）;与模型组相比,ARC组可明显抑制T.g.HSP70 mRNA 和 SAG1 mRNA 的转录水平（P＜0.001,P＜0.001）。结论:牛蒡苷对T.g.HSP70诱导弓形虫感染的肝细胞损伤具有很好的保护作用;其作用机制是抑制T.g.HSP70通过TLR4/MAPK/NF-κB信号通路诱导炎症因子的产生。

关键词：弓形虫弓形虫热休克蛋白70 牛蒡苷肝损伤 TLR4

牛蒡苷对T.g.HSP70诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤的保护作用及机制

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牛蒡苷对T.g.HSP70诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤的保护作用及机制

作者：程小艳延边大学

学位级别：硕士

目的：探讨牛蒡苷对弓形虫热休克蛋白70 （Toxoplasma gondii HSP70, T.g.HSP70）诱导弓形虫感染小鼠急性肝脏损伤的保护作用及其作用机制。研究方法：将20只（20±2）g的KM雌性小鼠随机均匀分为4组,分别是：正常组（Normal）、模型组（... 详细信息

目的：探讨牛蒡苷对弓形虫热休克蛋白70 （Toxoplasma gondii HSP70, T.g.HSP70）诱导弓形虫感染小鼠急性肝脏损伤的保护作用及其作用机制。研究方法：将20只（20±2）g的KM雌性小鼠随机均匀分为4组,分别是：正常组（Normal）、模型组（Model）、磺胺嘧啶钠阳性对照组（PC）、牛蒡苷组（ARC）,每组5只。除正常组外,其余各组小鼠每只灌胃给予弓形虫弱毒株ME49 20个包囊（cyst）感染。感染后第4天开始每天给药治疗,一天一次,ARC组给予ARC（100mg/kg）,PC组给予磺胺嘧啶钠（200mg/kg）,灌胃给药。感染后第7天腹腔注射T.g.HSP70（500μg/kg）。感染后第8天,给药治疗4 h后,全部小鼠颈动脉取血,解剖,收集血清,取肝称重。计算肝指数。HE染色后,用显微镜观察肝脏的病理变化;用比色法测定血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平、谷氨酸-丙酮酸转氨酶（ALT）的活性,用比色法测定肝脏组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;用酶联法（ELISA）测定血清中白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）的含量;用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测血小板活化因子（PAF-AH） mRNA的表达水平;用Western blotting检测肝组织中p38MAPK, TLR4蛋白表达量。结果：与正常组相比,模型组的肝脏指数和ALT、 AST水平明显升高（P＜0.01;P＜0.05）,表明肝脏损伤严重,急性肝损伤造模成功。与模型组相比,给药组均明显降低血清中的ALT、 AST水平和IL-1β, TNF-a含量及肝脏组织中MDA含量、PAF-AH mRNA的表达水平及TLR4、 p38MAPK蛋白的表达（P＜0.01;P＜0.05）,明显提高SOD活性（P＜0.05）。小鼠肝脏HE染色观察病理结果表明,与正常组相比,模型组出现了显著的炎性细胞浸润,肝细胞肿胀,而给药组肝脏的病理学变化得到明显的改善。结论：牛蒡苷对T.g.HSP70诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用。其可能的作用机制为：牛蒡苷能够提高小鼠肝脏组织中SOD活性及降低MDA含量,起到抗脂质过氧化作用;牛蒡苷通过抑制TLR4、 p38MAPK的表达,从而抑制T.g.HSP70/TLR4介导的信号通路,进而抑制炎症因子（PAF、 IL-1β、 TNF-α）的产生,减少对肝脏的损伤。

关键词：牛蒡苷弓形虫弓形虫热休克蛋白70（T.g.HSP70）急性肝损伤机制

牛蒡苷与牛蒡苷元的荧光性质及中药牛蒡子中牛蒡苷的荧光法测定

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分析测试学报 2014年第2期33卷 138-143页

作者：王淑静张晴王立屏魏永巨河北师范大学化学与材料科学学院河北石家庄050024

牛蒡苷和牛蒡苷元的三维荧光图谱中均呈现2个荧光峰，激发波长λex分别为230nm和280nm，发射波长（λem）均为310nm。牛蒡苷的荧光远强于牛蒡苷元的荧光。溶液酸度对牛蒡苷和牛蒡苷元的荧光强度有明显影响。在pH〉13．0时，牛蒡苷的荧... 详细信息

牛蒡苷和牛蒡苷元的三维荧光图谱中均呈现2个荧光峰，激发波长λex分别为230nm和280nm，发射波长（λem）均为310nm。牛蒡苷的荧光远强于牛蒡苷元的荧光。溶液酸度对牛蒡苷和牛蒡苷元的荧光强度有明显影响。在pH〉13．0时，牛蒡苷的荧光增强，而牛蒡苷元的荧光猝灭。牛蒡子药材的三维荧光图谱和薄层荧光色谱表明，牛蒡子的荧光成分主要为牛蒡苷，而牛蒡苷元及其他共存组分在强碱性条件下对牛蒡苷的荧光无影响。据此，以甲醇为溶剂制备牛蒡子样品提取液，用水适当稀释并调节至pH13．0，在λex／λem=280nm／310nm波长下测定牛蒡苷的含量。在0．0145～2．03mg·L-1范围内，荧光强度与牛蒡苷浓度问呈良好线性，其线性方程为I-F=2．7＋148．7p（mg·L-1），相关系数（r）为0．999。用本法测得牛蒡子对照药材中牛蒡苷的含量为6．01％，平均加标回收率为98．1％。用薄层荧光扫描法对本方法进行验证，结果表明，本法结果可靠，可用于牛蒡子药材的质量检验。

关键词：牛蒡苷牛蒡苷元牛蒡子荧光分析三维荧光

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牛蒡苷元抗帕金森的药理作用机制研究

牛蒡苷元抗帕金森的药理作用机制研究

超滤法测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率

第九届中国药理学会补益药药理专业委员会学术研讨会

作者：窦德强张娜李东薇辽宁中医药大学药学院

牛蒡Arctum appaL.为菊科二年生草本植物,牛蒡的主要药用部位为牛蒡子(亦称恶实、大力子),收载于历版《中国药典》,为常用中药。研究组经过多年研究,对牛蒡的炮制机理、生态适宜性及生产产区区划、牛蒡苷元的制备工艺、牛蒡苷元的药物... 详细信息

牛蒡Arctum appaL.为菊科二年生草本植物,牛蒡的主要药用部位为牛蒡子(亦称恶实、大力子),收载于历版《中国药典》,为常用中药。研究组经过多年研究,对牛蒡的炮制机理、生态适宜性及生产产区区划、牛蒡苷元的制备工艺、牛蒡苷元的药物动力学、抗癌、抗炎作用进行研究。近年来,我们对牛蒡苷元抗帕金森作用及作用机制进行研究。通过鱼藤酮所致的帕金森模型研究表明牛蒡苷元可显著提高PD大鼠机体能量代谢率,并可通过调节氧化应激、炎症和自噬水平对PD起治疗作用,并可缓解鱼藤酮中毒大鼠的肝损伤和肾损伤。代谢组学研究表明牛蒡苷元可有效改善PD大鼠脑内三羧酸循环、氨基酸、糖酵解、脂代谢和嘌呤代谢等途径异常的代谢状况。

关键词：牛蒡苷牛蒡苷元帕金森

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国中药杂志 2013年第3期38卷 432-434页

作者：韩雪莹王巍谭日秋窦德强辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的:测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率。方法:采用超滤法结合高效液相色谱法对牛蒡苷及牛蒡苷元与大鼠血浆以及健康人血浆蛋白结合率进行测定。结果:牛蒡苷与大鼠血浆在64.29,32.14,16.07 mg.L-1下的血浆蛋白结合率分别为(71.2±2... 详细信息

目的:测定牛蒡苷及牛蒡苷元的血浆蛋白结合率。方法:采用超滤法结合高效液相色谱法对牛蒡苷及牛蒡苷元与大鼠血浆以及健康人血浆蛋白结合率进行测定。结果:牛蒡苷与大鼠血浆在64.29,32.14,16.07 mg.L-1下的血浆蛋白结合率分别为(71.2±2.0)%,(73.4±0.61)%,(78.2±1.9)%,与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为(64.8±3.1)%,(64.5±2.5)%,(77.5±1.7)%;牛蒡苷元与大鼠血浆在77.42,38.71,19.36 mg.L-1下的血浆蛋白结合率分别为(96.7±0.41)%,(96.8±1.6)%,(97.3±0.46)%,与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为(94.7±3.1)%,(96.1±0.3)%,(97.9±1.3)%。结论:牛蒡苷与大鼠血浆蛋白有中等强度的结合,略高于与人血浆蛋白结合率;牛蒡苷元与大鼠血浆和健康人血浆均有很强的结合。

关键词：牛蒡苷牛蒡苷元血浆蛋白结合率超滤法高效液相色谱法

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牛蒡苷元新制备工艺

中国新药杂志 2011年第10期20卷 871-873,880页

作者：侯蔷何凡窦德强康廷国李洪福辽宁中医药大学药学院沈阳116000

目的:优化筛选牛蒡苷元的酶水解条件、提取工艺和大孔树脂型号,得到适合工业生产的工艺流程。方法:以时间、温度、溶媒量为考查因素,用单因素和正交试验设计法,对牛蒡苷元水解条件进行优化;以乙醇浓度、用量、提取次数、提取时间为因素... 详细信息

目的:优化筛选牛蒡苷元的酶水解条件、提取工艺和大孔树脂型号,得到适合工业生产的工艺流程。方法:以时间、温度、溶媒量为考查因素,用单因素和正交试验设计法,对牛蒡苷元水解条件进行优化;以乙醇浓度、用量、提取次数、提取时间为因素,对提取方法优化;以吸附率和解吸附率对不同型号的大孔树脂优选。结果:牛蒡苷元最佳水解条件为42℃,12倍量水,水解12 h;最佳提取工艺为10倍量40%乙醇提取3次,每次0.5 h;AB-8大孔树脂纯化效果理想。结论:通过对牛蒡苷元的水解提取纯化工艺研究,确定了适合的工业生产的最佳工艺,该工艺方法简单方便,通过该工艺和进一步的硅胶柱层析分离,可得到纯度大于98%的牛蒡苷元。

关键词：牛蒡苷牛蒡苷元水解提取大孔树脂转化