牛蒡苷对T.g.HSP70诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤的保护作用及机制

作     者：程小艳 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朴莲荀

授予年度：2016年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：牛蒡苷 弓形虫 弓形虫热休克蛋白70（T.g.HSP70） 急性肝损伤 机制 

摘      要：目的：探讨牛蒡苷对弓形虫热休克蛋白70 （Toxoplasma gondii HSP70, T.g.HSP70）诱导弓形虫感染小鼠急性肝脏损伤的保护作用及其作用机制。研究方法：将20只（20±2）g的KM雌性小鼠随机均匀分为4组,分别是：正常组（Normal）、模型组（Model）、磺胺嘧啶钠阳性对照组（PC）、牛蒡苷组（ARC）,每组5只。除正常组外,其余各组小鼠每只灌胃给予弓形虫弱毒株ME49 20个包囊（cyst）感染。感染后第4天开始每天给药治疗,一天一次,ARC组给予ARC（100mg/kg）,PC组给予磺胺嘧啶钠（200mg/kg）,灌胃给药。感染后第7天腹腔注射T.g.HSP70（500μg/kg）。感染后第8天,给药治疗4 h后,全部小鼠颈动脉取血,解剖,收集血清,取肝称重。计算肝指数。HE染色后,用显微镜观察肝脏的病理变化;用比色法测定血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平、谷氨酸-丙酮酸转氨酶（ALT）的活性,用比色法测定肝脏组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;用酶联法（ELISA）测定血清中白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）的含量;用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测血小板活化因子（PAF-AH） mRNA的表达水平;用Western blotting检测肝组织中p38MAPK, TLR4蛋白表达量。结果：与正常组相比,模型组的肝脏指数和ALT、 AST水平明显升高（P0.01;P0.05）,表明肝脏损伤严重,急性肝损伤造模成功。与模型组相比,给药组均明显降低血清中的ALT、 AST水平和IL-1β, TNF-a含量及肝脏组织中MDA含量、PAF-AH mRNA的表达水平及TLR4、 p38MAPK蛋白的表达（P0.01;P0.05）,明显提高SOD活性（P0.05）。小鼠肝脏HE染色观察病理结果表明,与正常组相比,模型组出现了显著的炎性细胞浸润,肝细胞肿胀,而给药组肝脏的病理学变化得到明显的改善。结论：牛蒡苷对T.g.HSP70诱导弓形虫感染小鼠急性肝损伤具有较好的保护作用。其可能的作用机制为：牛蒡苷能够提高小鼠肝脏组织中SOD活性及降低MDA含量,起到抗脂质过氧化作用;牛蒡苷通过抑制TLR4、 p38MAPK的表达,从而抑制T.g.HSP70/TLR4介导的信号通路,进而抑制炎症因子（PAF、 IL-1β、 TNF-α）的产生,减少对肝脏的损伤。