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牙髓卟啉单胞菌促成骨细胞凋亡的机制初探

牙体牙髓牙周病学杂志 2014年第11期24卷 630-633,664页

作者：田亚光廖天安邓旎郝春波邱乐宏海南省人民医院口腔科海南海口570102

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞凋亡的促进作用,并初步探讨其相关分子机制。方法:用浓度为1、10、100μg/m L牙髓卟啉单胞菌超声提取物作用于成骨细胞,分别采用Hoechst33258染色法观察细胞的形态变化;比色法检测细胞中的C... 详细信息

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞凋亡的促进作用,并初步探讨其相关分子机制。方法:用浓度为1、10、100μg/m L牙髓卟啉单胞菌超声提取物作用于成骨细胞,分别采用Hoechst33258染色法观察细胞的形态变化;比色法检测细胞中的Caspase-3酶活性改变;同时通过Caspase抑制剂阻断实验分析相关成骨细胞的凋亡途径。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提取物能使成骨细胞形态出现染色质浓缩、碎裂等典型的凋亡改变,并可显著提高成骨细胞的Caspase-3酶活性,且具有浓度依赖性(P牙髓卟啉单胞菌提取物对成骨细胞的促凋亡作用,而Caspase-3抑制剂则能完全阻断牙髓卟啉单胞菌对成骨细胞的促凋亡作用。结论:牙髓卟啉单胞菌超声提取物具有促成骨细胞凋亡的作用,细胞内、外凋亡途径都参与了该过程,并且是一种依赖Caspase-3的凋亡通路。

关键词：牙髓卟啉单胞菌超声提取物凋亡 Caspase-3

牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响

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上海口腔医学 2009年第2期18卷 194-197页

作者：杨谛李任仇丽鸿李琛中国医科大学口腔医学院牙体牙髓科辽宁沈阳110002

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)内毒素(LPS)对成骨细胞表达炎症因子白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的影响,探讨P.e-LPS参与根尖周病变牙槽骨吸收的病理机制。方法:应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测在不同浓度P.e-LPS(0～50μ... 详细信息

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)内毒素(LPS)对成骨细胞表达炎症因子白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的影响,探讨P.e-LPS参与根尖周病变牙槽骨吸收的病理机制。方法:应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测在不同浓度P.e-LPS(0～50μg/mL)和不同作用时间(0～24h),P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的水平。应用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnettt检验。结果:当P.e-LPS浓度大于5μg/mL,作用1h后,与0μg/mL和0h组比较,IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的表达水平均显著提高(P胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA具有剂量和时间依赖性。结论:P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA,是加速根尖病变的重要毒力因子。

关键词：牙髓卟啉单胞菌内毒素成骨细胞白介素-1β mRNA 白介素-6 mRNA

牙髓卟啉单胞菌内毒素诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA及其相关信号通路的研究

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牙髓卟啉单胞菌内毒素诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA及...

作者：杨谛中国医科大学

学位级别：硕士

目的慢性根尖周病变的患牙根管为感染根管,其中牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)几乎只在感染根管内出现,且检出率较高,被认为是牙髓感染的特有病原菌。在骨组织改建过程中,成骨细胞的生物学行为至关重要,它既可以分泌... 详细信息

目的慢性根尖周病变的患牙根管为感染根管,其中牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)几乎只在感染根管内出现,且检出率较高,被认为是牙髓感染的特有病原菌。在骨组织改建过程中,成骨细胞的生物学行为至关重要,它既可以分泌基质形成骨组织,又可以产生炎症因子,加速破骨细胞的骨吸收。本实验旨在研究P.e内毒素(Lipopolysaccharides,LPS)对成骨细胞表达白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白介素-6(Interleukin-6,IL-6)的影响,以及可能依赖的信号转导通路,探讨P.e-LPS参与根尖周病变牙槽骨吸收的可能病理机制,为临床治疗奠定理论和实验基础。材料与方法 1、细菌培养应用脑心浸液(Brain heart infusion,BHI)固体培养基在37℃、厌氧条件(含80%N、10%CO、10%H)下复苏培养P.e,BHI液体培养基增菌后收集细菌,-20℃保存。 2、内毒素提取采用热酚水方法提取P.e-LPS,应用经典的凝胶鲎试剂方法对所提取的内毒素进行定性分析。 3、细胞培养 MG63成骨细胞生长于含10%胎牛血清、100u/ml青霉素、100u/ml链霉素的RPMI1640培养基中,置于含5%CO2、37℃、饱和湿度的培养箱中培养。选择生长状态良好的第3、4代细胞用于实验。 4、实验分组实验分为剂量组、时间组和加入抑制剂组。剂量组为终浓度分别为0、1、5、10、20、50μg/ml的P.e-LPS作用于MG63成骨细胞6h;时间组为终浓度为10μg/ml的P.e-LPS分别作用于细胞0、1、3、6、12、24h;加入抑制剂组为细胞外信号调节激酶(Extracellular-signal regulated protein kinase,ERK)1/2激酶抑制剂PD98059和p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)抑制剂SB203580预处理MG63成骨细胞1h后,加入终浓度为10μg/ml的P.e-LPS,继续培养6h。收集细胞,-80℃保存。 5、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA表达水平的检测提取各组细胞的总RNA,应用随机引物反转录反应合成cDNA,聚合酶链式反应(Polymerase Chain reaction,PCR)反应扩增IL-1β、IL-6和β-actin基因的表达,1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像处理系统得到IL-1β、IL-6和β-actin的平均灰度值。 6、统计学分析所有实验数据应用SPSS11.0软件包建立数据库,进行单因素方差分析和Dunnett-t检验。显著水平:P＜0.05时有显著性差异,P＜0.01时有高度显著性差异。结果 1、当P.e-LPS浓度为0μg/ml时,MG63细胞表达少量IL-6 mRNA,不表达IL-1βmRNA,与0μg/ml组比较,1、5、10、20、50μg/ml组P.e-LPS诱导成骨细胞IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的表达水平均有显著提高,且有统计学差异(P＜0.01)。 2、根据剂量组实验结果,选择10μg/ml的P.e-LPS分别作用于MG63细胞0、1、3、6、12、24h,随着作用时间的增加,IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的表达水平均显著增加(P＜0.01)。 3、ERK1/2激酶抑制剂PD98059预处理MG63细胞1h,P.e-LPS诱导的MG63细胞表达IL-1βmRNA水平下降。 4、p38 MAPK抑制剂SB203580预处理MG63细胞1h,P.e-LPS诱导的MG63细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA水平均下降。结论 1、P.e-LPS诱导MG63细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA具有剂量依赖性。 2、P.e-LPS诱导MG63细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA具有时间依赖性。 3、P.e-LPS诱导MG63细胞表达IL-1βmRNA可能依赖ERK1/2和p38MAPK信号转导通路。 4、P.e-LPS诱导MG63细胞表达IL-6 mRNA可能依赖p38MAPK信号转导通路。

关键词：牙髓卟啉单胞菌内毒素成骨细胞白介素-1βmRNA 白介素-6 mRNA 细胞外信号调节激酶1/2 p38丝裂原活化蛋白激酶

牙髓卟啉单胞菌诱导成骨细胞表达RANKL mRNA的研究

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实用口腔医学杂志 2005年第5期21卷 583-586页

作者：李秀兰侯志明艾红军薛明沈阳中国医科大学口腔医学院 110002

目的研究牙髓卟啉单胞菌(porphyromonasendodontalis,Pe)ATCC35406对成骨细胞表达细胞核因子kappaB受体活化因子配基(receptoractivatorofnuclearfactor-kappaBligand,RANKL)的影响,探讨该菌诱导牙槽骨吸收的病理机制。方法采用原代培养的大鼠头盖骨细胞,分别以107、109CFU/ml的Pe感染细胞24h,为了观察细菌毒性作用的动力学变化,以107CFU/ml的Pe作用细胞0、6、12、18及24h,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RANKLmRNA的表达。结果以107和109CFU/mlPe作用成骨细胞24h后,细胞表达RANKLmRNA与βactin的mRNA灰度值的比值分别为1.73、2.44。大鼠头盖骨细胞基础表达RANKLmRNA为0.32。以107CFU/mlPe感染细胞,随着感染时间的增加,细胞RANKLmRNA表达逐渐增强为0.93、2.01、1.97、1.73。结论Pe通过刺激成骨细胞RANKL的表达,激活OPG/RANKL/RANK(骨保护因子osterprotegerinOPG,细胞核因子kB受体活化因子receptoractivatorofnuclearfactor-kappaB,RANK)传导系统,能够诱导牙槽骨吸收,并且其作用具有密度依赖性和时间依赖性。

关键词：牙髓卟啉单胞菌成骨细胞细胞核因子kB受体活化因子配基

牙髓卟啉单胞菌与慢性根尖周炎临床症状的相关性研究

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牙髓卟啉单胞菌与慢性根尖周炎临床症状的相关性研究

牙髓卟啉单胞菌密度感应系统luxS基因的克隆及测序

全国第八次牙体牙髓病学学术会议

作者：刘琨侯本祥杨圣辉首都医科大学口腔医学院牙体牙髓科

目的:采用聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测慢性根尖周炎临床标本中牙髓卟啉单胞菌(po rphyromonas endodontalis,P.e)16S rDNA的水平,探讨其与临床症状的关系。方法:用PCR和FQ-PCR检测100例慢性根尖周炎临床... 详细信息

目的:采用聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测慢性根尖周炎临床标本中牙髓卟啉单胞菌(po rphyromonas endodontalis,P.e)16S rDNA的水平,探讨其与临床症状的关系。方法:用PCR和FQ-PCR检测100例慢性根尖周炎临床标本中P.e16S rDNA的水平,计算P.e16S rDNA相对核酸量和含量,统计分析其与临床指标的相关性。结果:P.e16S rDNA相对核酸量和含量与咬合痛、患牙伸长不适感、根尖骨质吸收、叩痛、窦道形成、窦道脓性分泌物及根尖扪痛之间相关性强。结论:P.e16SrDNA水平与慢性根尖周炎临床症状之间密切相关。

关键词：聚合酶链反应牙髓卟啉单胞菌慢性根尖周炎相关性

来源： cnki会议评论

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北京口腔医学 2014年第2期22卷 83-85页

作者：何艳艳侯本祥首都医科大学口腔医学院牙体牙髓科

目的检测牙髓卟啉单胞菌模式株、临床分离株密度感应系统luxS基因。方法选取牙髓卟啉单胞菌模式株及临床分离株作为研究对象,提取细菌基因组DNA,PCR克隆及测序,并通过基因序列比对,比较临床分离株和模式株的一致性。结果电泳鉴定存在目... 详细信息

目的检测牙髓卟啉单胞菌模式株、临床分离株密度感应系统luxS基因。方法选取牙髓卟啉单胞菌模式株及临床分离株作为研究对象,提取细菌基因组DNA,PCR克隆及测序,并通过基因序列比对,比较临床分离株和模式株的一致性。结果电泳鉴定存在目的条带,克隆测序和序列比对表明,牙髓卟啉单胞菌PCR产物与目的基因完全一致(均为100%)。结论本实验引物设计合理,能较好地扩增出牙髓卟啉单胞菌的luxS基因,并对其进行测序,为进一步研究牙髓卟啉单胞菌luxS基因的功能奠定基础。

关键词：牙髓卟啉单胞菌 luxS基因密度感应

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牙髓卟啉单胞菌内毒素致病性研究进展

中国实用口腔科杂志 2009年第12期2卷 756-758页

作者：李任仇丽鸿中国医科大学口腔医学院口腔内科沈阳110002

牙髓卟啉单胞菌是根尖周病变中的重要致病菌之一,牙髓卟啉单胞菌可产生多种毒力因子,其中内毒素尤为重要。研究证明,在根尖周病变的发展过程中,根尖部炎症反应以及骨吸收的发生等都与牙髓卟啉单胞菌内毒素密切相关。本文针对牙髓卟啉单... 详细信息

牙髓卟啉单胞菌是根尖周病变中的重要致病菌之一,牙髓卟啉单胞菌可产生多种毒力因子,其中内毒素尤为重要。研究证明,在根尖周病变的发展过程中,根尖部炎症反应以及骨吸收的发生等都与牙髓卟啉单胞菌内毒素密切相关。本文针对牙髓卟啉单胞菌内毒素的致病性研究进展加以综述。

关键词：牙髓卟啉单胞菌内毒素脂多糖致病性根尖周病变

iRoot FM对牙髓卟啉单胞菌的抗菌效果评价及对根尖牙乳头干细胞生物学性能的影响

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iRoot FM对牙髓卟啉单胞菌的抗菌效果评价及对根尖牙乳头干细胞生...

2017全国口腔生物医学学术年会

作者：毕静刘尧陈旭中国医科大学口腔医学院儿童口腔科辽宁省口腔疾病重点实验室辽宁省口腔疾病转化医学研究中心

目的:年轻恒牙牙髓病根尖周病治疗成功的关键在于有效的根管消毒,建立有利于牙根继续发育的根管内微环境。根管消毒既要有效控制感染,又要满足对牙齿干细胞无毒性作用,恢复年轻恒牙牙根发育的潜能。传统的根管消毒材料如氢氧化钙(calciu... 详细信息

目的:年轻恒牙牙髓病根尖周病治疗成功的关键在于有效的根管消毒,建立有利于牙根继续发育的根管内微环境。根管消毒既要有效控制感染,又要满足对牙齿干细胞无毒性作用,恢复年轻恒牙牙根发育的潜能。传统的根管消毒材料如氢氧化钙(calcium hydroxide,

关键词：生物陶瓷材料牙髓卟啉单胞菌抗菌作用根尖牙乳头干细胞生物学性能

来源： cnki会议评论

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牙髓卟啉单胞菌的毒力因子及其致病性

北京口腔医学 2007年第1期15卷 50-52页

作者：刘琨侯本祥首都医科大学口腔医学院北京100050

牙髓及根尖周病是最为常见的口腔疾患,主要病因是牙髓的细菌感染及感染菌在根管系统中的持续存在。牙髓卟啉单胞菌是感染根管的优势菌,在牙髓、根尖周组织病的发生、发展中起着重要的作用,并与牙髓坏死、根尖部疼痛肿胀、叩痛等症状和... 详细信息

牙髓及根尖周病是最为常见的口腔疾患,主要病因是牙髓的细菌感染及感染菌在根管系统中的持续存在。牙髓卟啉单胞菌是感染根管的优势菌,在牙髓、根尖周组织病的发生、发展中起着重要的作用,并与牙髓坏死、根尖部疼痛肿胀、叩痛等症状和窦道形成密切相关,近年来成为研究热点。本文从牙髓卟啉单胞菌的毒力因子、致病机制、临床意义等方面综述。

关键词：牙髓卟啉单胞菌毒力因子致病性根尖周组织口腔疾患根尖周病持续存在根管系统