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熊胆粉及熊去氧胆酸对原发免疫性血小板减少症小鼠骨髓和循环血Ly6C^(hi)单核细胞及其细胞因子的影响

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中华中医药杂志 2022年第2期37卷 1154-1157页

作者：王青春关文祥满达额尼日勒萨茹拉高敬贤陈沙娜乌兰内蒙古自治区国际蒙医医院呼和浩特010065 内蒙古医科大学呼和浩特010110

目的:观察熊胆粉及熊去氧胆酸对原发免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠骨髓和循环血Ly6C^(hi)单核细胞分布及相关细胞因子含量的影响,探讨其对ITP的作用机制,为蒙药熊胆替代品研究提供依据。方法:利用豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)复制/建立... 详细信息

目的:观察熊胆粉及熊去氧胆酸对原发免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠骨髓和循环血Ly6C^(hi)单核细胞分布及相关细胞因子含量的影响,探讨其对ITP的作用机制,为蒙药熊胆替代品研究提供依据。方法:利用豚鼠抗小鼠血小板血清(APS)复制/建立ITP模型,将小鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松组、熊胆组和熊去氧胆酸组,治疗10 d。流式细胞仪检测骨髓和循环血Ly6C;单核细胞分布,酶联免疫吸附(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量。结果:与模型组比较,熊胆组和熊去氧胆酸组骨髓Ly6C^(hi)单核细胞表达率显著升高(P熊胆粉及熊去氧胆酸可通过抑制Ly6C^(hi)单核细胞从骨髓进入循环血,改善炎症因子的分泌,从而发挥治疗ITP作用。

关键词：熊胆粉熊去氧胆酸原发免疫性血小板减少症 Ly6C 单核细胞肿瘤坏死因子-α 白介素-1β 机制研究

真伪熊胆粉物种基源分子生物学鉴定方法的建立及评价

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吉林大学学报（医学版） 2022年第3期48卷 801-808页

作者：赵远贾慧建宋顺佳李琦邵学超艾金霞孙丽媛北华大学医学技术学院分子生物学教研室吉林吉林132013

目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立并评价一种可同时快速特异鉴别熊胆粉生物来源的方法,为鉴别人工模拟混合掺假样品提供依据。方法:利用猪、牛和熊线粒体细胞色素b基因,SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)提取胆类DNA,Primer Premier ... 详细信息

目的:基于多重聚合酶链式反应(PCR)技术,建立并评价一种可同时快速特异鉴别熊胆粉生物来源的方法,为鉴别人工模拟混合掺假样品提供依据。方法:利用猪、牛和熊线粒体细胞色素b基因,SDS-蛋白酶K裂解法(SDS-PK)提取胆类DNA,Primer Premier 5.0软件设计可扩增不同大小DNA片段且无交叉反应的物种特异性引物,特异性扩增后,将扩增条带克隆后测序,与GenBank数据库已登记序列比对。建立并优化多重PCR,评价其特异性和灵敏度,并采用该方法鉴别27份模拟混合掺假样品。结果:建立的猪、牛和熊胆粉DNA提取方法可于2 h之内完成操作,DNA纯度分别为2.04、1.69和1.70,浓度分别为158.63、189.34和148.55 mg·L^(-1)。设计可扩增出猪、牛和熊的物种特异性引物。测序结果与GenBank数据库已登记序列同源性达99%以上。PCR体系各物种引物特异性强,无非特异扩增。应用于三重PCR体系中的引物互不干扰,检测灵敏度高,3种靶标样品任意一种DNA浓度降至1 mg·L^(-1)时均可成功检测。27份人工模拟熊胆粉不同物种及不同比例掺假样品的检测结果与预设混合情况相符,盲法随机抽样重复检测5次,结果稳定。结论:成功建立可通过一次实验同时鉴别猪、牛和熊胆粉的方法,具有简便、灵敏及高效的特点,可应用于熊胆粉及其常见动物源性掺伪的鉴别。

关键词：熊胆粉 DNA提取多重聚合酶链式反应基因测序分子鉴别

熊胆粉对肝癌移植瘤裸鼠STAT3通路的影响

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中国中西医结合杂志 2014年第8期34卷 976-981页

作者：赵锦燕刘丽雅沈阿灵林薇曹治云庄群川洪振丰福建中医药大学中西医结合研究院福州350122

目的观察熊胆粉对肝癌皮下移植瘤裸鼠信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路及其下游靶基因的影响,探讨熊胆粉治疗肝癌的作用机制。方法采用人肝癌细胞株HepG_2构建裸鼠皮下移植瘤模型,待皮下移植瘤形成后,将裸鼠随机分为熊胆粉组和对照组... 详细信息

目的观察熊胆粉对肝癌皮下移植瘤裸鼠信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路及其下游靶基因的影响,探讨熊胆粉治疗肝癌的作用机制。方法采用人肝癌细胞株HepG_2构建裸鼠皮下移植瘤模型,待皮下移植瘤形成后,将裸鼠随机分为熊胆粉组和对照组,每天分别给予熊胆粉和生理盐水,连续给药3周,每周测量体重和瘤体积2次,给药结束,剥取瘤体称量瘤重及计算抑瘤率;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测瘤组织的细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl2-associated X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(BcI-2)、周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)mRNA表达;免疫组化测定磷酸化的信号转导与转录活化因子3(p-STAT3)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bax、Bcl-2、CDK4、cyclinD1蛋白表达。结果熊胆粉显著抑制肿瘤的体积和瘤重,与对照组比较,差异均有统计学意义(P熊胆粉显著促进肝癌细胞凋亡。RT-PCR结果显示熊胆粉促进Bax表达而抑制Bcl-2、CDK4、cycIinD1 mRNA表达。免疫组化结果显示熊胆粉促进Bax表达而抑制p-STAT3、PCNA、BcI-2、CDK4、cyclinD1蛋白表达。结论熊胆粉可以通过调控STAT3通路抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。

关键词：熊胆粉肝癌信号转导与转录激活因子3

基于^(1)H-NMR结合LC-MS技术分析熊胆粉及常见胆类中药中的胆酸类成分

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中草药 2022年第17期53卷 5283-5292页

作者：曹妍张佩杰李婷许霞常安琪李军刘地发屠鹏飞宋月林北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029 北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室北京100029 江西青峰药业有限公司创新天然药物与中药注射剂国家重点实验室江西赣州341000

目的建立基于核磁共振氢谱技术(^(1)H-NMR)结合液质联用技术(LC-MS)的分析方法,阐明熊胆粉中胆酸类成分组成,找出熊胆粉与其他常见胆类中药中的差异性成分。方法利用^(1)H-NMR非靶标分析熊胆粉及其他常见胆类中药的化学成分组,通过信... 详细信息

目的建立基于核磁共振氢谱技术(^(1)H-NMR)结合液质联用技术(LC-MS)的分析方法,阐明熊胆粉中胆酸类成分组成,找出熊胆粉与其他常见胆类中药中的差异性成分。方法利用^(1)H-NMR非靶标分析熊胆粉及其他常见胆类中药的化学成分组,通过信号归属表征熊胆粉中胆酸类成分组成,以^(1)H-NMR图谱分段积分后峰面积为变量进行多元统计分析。利用LC-MS对熊胆粉及其他常见胆类中药中10个胆酸类成分(胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸)进行含量测定,并以含量为变量进行多元统计分析。结果基于^(1)H-NMR图谱及多元统计分析发现胆酸类成分为胆类中药的主要成分,也是熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性成分。结合文献及对照品比对,从熊胆粉中初步鉴定出7个胆酸类成分。进一步结合LC-MS含量测定结果和多元统计分析验证熊胆粉与其他常见胆类中药的主要差异性胆酸类成分为熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸。结论熊胆粉与其他常见胆类中药的胆酸类成分存在显著差异。与其他胆类中药相比,熊胆粉中熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸及其牛磺型结合胆酸含量较高。^(1)H-NMR技术具有对化学成分组全面、快速分析的优势,可与LC-MS检测相互补充,共同应用于中药复杂体系成分分析和代谢组学的深入研究。

关键词： ^(1)H-NMR LC-MS 熊胆粉常见胆类中药胆酸类成分多元统计分析熊去氧胆酸鹅去氧胆酸牛磺熊去氧胆酸牛磺鹅去氧胆酸

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熊胆粉中主要胆汁酸类成分的测定及分析

中国药学杂志 2016年第22期51卷 1958-1961页

作者：石岩魏锋林瑞超马双成中国食品药品检定研究院北京100050 沈阳药科大学中药学院沈阳110016 北京中医药大学中药学院北京100102

目的建立适用于对熊胆粉进行质量评价与控制的主要胆汁酸类成分的HPLC-ELSD测定方法。方法使用Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温为40℃,10 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液和乙腈作为流动相,梯度洗脱,流速1.0m L·min^(-1);ELS... 详细信息

目的建立适用于对熊胆粉进行质量评价与控制的主要胆汁酸类成分的HPLC-ELSD测定方法。方法使用Agilent SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温为40℃,10 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液和乙腈作为流动相,梯度洗脱,流速1.0m L·min^(-1);ELSD漂移管温度为110℃,ELSD氮气流速为2.8 L·h^(-1),增益为1。结果牛磺熊去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸的进样量对数值与峰面积对数值分别在0.087 2~0.348 8和0.076 0~0.342 0 mg·m L^(-1)内呈良好的线性关系;平均回收率分别为101.9%和102.2%,RSD值分别为1.9%和1.5%。结论所建立的方法简便、快捷、准确,对结果分析显示该法适用于熊胆粉的质量评价与控制。

关键词：熊胆粉高效液相色谱法蒸发光散射检测器胆汁酸质量评价质量控制

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色度分析鉴别熊胆粉

中成药 2022年第9期44卷 2890-2895页

作者：雷苛露袁明昊周涛李建钢曾大富郭力成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137 成都晶博生物科技有限责任公司四川成都611731

目的探究熊胆粉中的胆红素成分含量与外在颜色的相关性,鉴别熊胆粉。方法采用分光测色仪测定熊胆粉的色度值,采用紫外-分光光度法测定胆红素含量。对其含量与色度值进行相关性、回归分析、主成分分析、聚类分析,建立熊胆粉的真伪判别模... 详细信息

目的探究熊胆粉中的胆红素成分含量与外在颜色的相关性,鉴别熊胆粉。方法采用分光测色仪测定熊胆粉的色度值,采用紫外-分光光度法测定胆红素含量。对其含量与色度值进行相关性、回归分析、主成分分析、聚类分析,建立熊胆粉的真伪判别模型。结果胆红素含量与熊胆粉提取液L*、a*、b*相关,相关性系数分别为0.947(P熊胆粉、禽类动物胆粉及其他哺乳类动物胆粉。主成分分析和聚类分析可将熊胆粉与其他六种动物胆类区分。结论胆红素含量与熊胆粉提取液色度值有显著性相关,可以用色度值和胆红素含量作为一种新的鉴别手段区分熊胆粉正伪品。

关键词：熊胆粉色度分析胆红素判别分析鉴别

DNA条形码技术在动物类药材熊胆粉及其混伪品鉴定中的应用

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中国中药杂志 2018年第4期43卷 645-650页

作者：许亚春熊超姜春丽段永波孙伟刘绍勇薛东升薛建平淮北师范大学生命科学学院淮北235000 中国中医科学院中药研究所北京100700 上海凯宝药业股份有限公司上海201401

应用DNA条形码技术对名贵中药材熊胆粉及混伪品进行DNA条形码鉴定研究，并建立其标准实验流程，以保障熊胆粉的安全有效利用。对收集到的12份熊胆粉样品进行DNA提取、PCR（聚合酶链式反应）扩增并双向测序、运用CodonCodeAlignerV7．0．... 详细信息

应用DNA条形码技术对名贵中药材熊胆粉及混伪品进行DNA条形码鉴定研究，并建立其标准实验流程，以保障熊胆粉的安全有效利用。对收集到的12份熊胆粉样品进行DNA提取、PCR（聚合酶链式反应）扩增并双向测序、运用CodonCodeAlignerV7．0．1进行序列剪切去除引物区得到CO／序列，同时与GenBank中得到棕熊及混伪品COI序列，运用MEGA7．0对研究的5个物种50条序列比对分析，计算变异位点及种内和种问K2P（Kimura2-Parameter）遗传距离并构建邻接（NJ）树。黑熊、棕熊的种内最大K2P遗传距离远小于其混伪品间最小K2P遗传距离；NJ树结果显示黑熊、棕熊各聚为一支，均可以与混伪品明显区分开。DNA条形码技术为一种安全便捷可靠的物种鉴定技术，建立动物类药材COI序列标准话流程，在中药研究领域具有重要的作用。

关键词：熊胆粉 COI序列 DNA条形码技术分子鉴定

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熊胆粉研究进展述评

中国中药杂志 2015年第7期40卷 1252-1258页

作者：周超凡高国建刘颖中国中医科学院基础理论研究所北京100700 中国中医科学院北京100700

该文对近年来关于熊胆粉在化学成分、药理作用、临床应用的相关文献进行了较为详尽的论述,表明熊胆粉在治疗多种疾病方面具有显著的药理作用及临床疗效。由于熊胆粉成分比较复杂,且有一定的毒副作用。因此要在对熊胆粉药理作用和临床应... 详细信息

该文对近年来关于熊胆粉在化学成分、药理作用、临床应用的相关文献进行了较为详尽的论述,表明熊胆粉在治疗多种疾病方面具有显著的药理作用及临床疗效。由于熊胆粉成分比较复杂,且有一定的毒副作用。因此要在对熊胆粉药理作用和临床应用进行深入研究的同时,也要对化学成分、毒副作用详加探讨,旨在为临床广泛而合理地应用熊胆粉提供科学依据。

关键词：熊胆粉药理作用临床应用述评

熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化中的作用机制研究

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中国中西医结合杂志 2015年第9期35卷 1083-1089页

作者：熊敏琪贾成林崔金刚宁冰冰朱玉陵王文健陈瑜张腾上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院上海200437 上海市中医药研究院中西医结合临床研究所上海200437 内蒙古康恩贝药业有限公司上海201318 复旦大学中西医结合研究所上海200040

目的研究熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化的作用机制,为麝香通心滴丸"凉开"法治疗动脉粥样硬化性疾病提供科学依据。方法采用ApoE^(-/-)基因敲除小鼠结合高脂饮食复制动脉粥样硬化动物模型,30只小鼠按体重用随机数字表法分为模型组(... 详细信息

目的研究熊胆粉在麝香通心滴丸抗动脉粥样硬化的作用机制,为麝香通心滴丸"凉开"法治疗动脉粥样硬化性疾病提供科学依据。方法采用ApoE^(-/-)基因敲除小鼠结合高脂饮食复制动脉粥样硬化动物模型,30只小鼠按体重用随机数字表法分为模型组(9只),麝香通心滴丸组(复方组,7只),麝香通心滴丸去熊胆粉组(拆方组,7只),熊胆粉组(7只);另取9只雄性同龄C57BL/6J小鼠设为正常对照组。复方组、拆方组和熊胆粉组分别给予对应药物(30、30、0.33 mg/kg)灌胃,模型和正常对照组予生理盐水灌胃,连续8周。E LISA法检测血清IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)及氧化性低密度脂蛋白(oxygenized low density lipoprotein,oxLDL)含量;采用生化法测定血清谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。二氢乙啶(dihydroethidum,DHE)荧光探针探测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;Real-time PCR检测主动脉miR-20、miR-21、miR-126及miR-155表达。结果模型组小鼠主动脉荧光强度明显增强,复方组、拆方组和熊胆粉组荧光强度明显减弱,以复方组减弱的最为明显。与正常组比较,模型组小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、oxLDL和MDA均升高(P熊胆粉组血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、oxLDL及MDA下降(P熊胆粉组miR-20表达上调(P熊胆粉组小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-γ水平升高(P熊胆粉组GSH和SOD下降(P熊胆粉组miR-20和miR-155表达下调(P熊胆粉在全方的调节作用中发挥了重要作用。

关键词：麝香通心滴丸熊胆粉动脉粥样硬化氧化应激炎症微小RNA