检索结果-南通市图书馆

作者：邵新宇扬州大学

学位级别：硕士

奶牛产后子宫细菌感染会导致子宫内膜炎的发生,影响子宫复旧及卵巢功能,扰乱生理周期,导致生育力下降。大肠杆菌（Escherichia coli,***）是引起奶牛子宫内膜炎的常见致病菌,其内毒素主要成分脂多糖（Popolysaccharides,LPS）可与Toll... 详细信息

奶牛产后子宫细菌感染会导致子宫内膜炎的发生,影响子宫复旧及卵巢功能,扰乱生理周期,导致生育力下降。大肠杆菌（Escherichia coli,***）是引起奶牛子宫内膜炎的常见致病菌,其内毒素主要成分脂多糖（Popolysaccharides,LPS）可与Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）结合并激活MAPK和NF-κB信号通路,促进炎性因子的表达和释放。临床研究表明,孕酮可抑制奶牛子宫先天免疫,使产后子宫易受病原体侵袭。本课题组前期研究发现,孕酮可抑制炎性反应条件下奶牛子宫内膜上皮细胞（Bovine endometrial epithelial cells,BEEC）炎性因子基因表达和相关通路活化,但其对子宫内膜基质细胞（Bovine endometrial stromal cells,BESC）的作用机制尚不清楚。本研究选取体外培养的原代BESC为研究对象,分别使用热灭活***（108 CFU/mL）和LPS（1μg/mL）建立细胞炎性模型,并与不同浓度的孕酮（1、3、5 ng/mL）共处理,检测MAPK和NF-κB通路及其下游炎性因子基因的表达,探究孕酮对BESC炎性反应的影响,为奶牛子宫内膜炎的防治提供理论依据。（1）孕酮单独处理对BESC炎性反应的影响使用1、3和5 ng/mL孕酮分别处理细胞12 h,采用qPCR法检测炎性因子基因IL1B、IL6、CXCL8、PTGS2、NOS2和TNF的表达;孕酮（1、3、5 ng/mL）处理细胞30 min,用Western Blot法检测MAPK和NF-κB信号通路关键蛋白的表达。结果表明,与空白对照组相比,孕酮处理组细胞除IL1B表达下调外（P＜0.05）,其余细胞因子的基因表达均无明显变化（P＞0.05）;孕酮对MAPK和NF-κB通路关键蛋白无明显影响（P＞0.05）。（2）孕酮对LPS和热灭活***诱导的BESC NF-κB和MAPK信号通路的影响采用1 μg/mLLPS和不同浓度孕酮（1、3、5 ng/mL）共处理BESC,分别于45 min和60 min检测NF-κB和MAPK信号通路关键蛋白的磷酸化水平;用108CFU/mL热灭活***处理细胞0、30、60、90和120 min,观察通路关键蛋白的时程变化规律;用108 CFU/mL热灭活***与不同浓度孕酮共处理细胞120 min,检测通路关键蛋白变化;分别用LPS和热灭活***与3 ng/mL孕酮共处理细胞45 min、120 min,用免疫荧光技术检测BESC P65蛋白核转位。结果表明,与空白对照组相比,LPS组细胞 P-P65/P65、P-IκBα/IκBα、P-ERK/ERK、P-JNK/JNK 和 P-P38/P38 的比值上升（P＜0.05）;与LPS组相比,共处理组细胞P65和IκBα以及ERK和P38的磷酸化水平下调（P＜0.05）,但JNK下调不显著（P＞0.05）。热灭活***可诱导细胞MAPK和NF-κB通路活化,其中各关键蛋白磷酸化水平在120 min最高（P＜0.05）,因此选用120 min时间点进行后续实验;与热灭活***处理组相比,共处理组细胞P65和IκBα以及ERK、JNK和P38的磷酸化水平下调（P＜0.05）。LPS和热灭活***可促进NF-κB通路P65入核,加入3 ng/mL孕酮共处理可抑制由LPS或热灭活***引起的P65核转位。（3）孕酮对LPS和热灭活***诱导的BESC炎性因子基因表达的影响采用qPCR法检测L1B、IL6、CXCL8、PTGS2、NOS2和TNF基因的表达情况:使用 1μg/mLLPS 和孕酮（1、3、5 ng/mL）共处理 BESC 12 h、24 h;用 108CFU/mL热灭活***处理细胞0、6、9、12、18和24 h,观察各炎性因子基因表达的时程变化规律;使用108 CFU/mL热灭活***与不同浓度孕酮共处理BESC 18h、24h。结果表明,与空白对照组相比,LPS组细胞炎性因子基因表达量均升高（P＜0.05）,孕酮共处理组各炎性因子基因表达量较LPS组均有下降,除TNF外均差异显著;热灭活***可促进细胞炎性因子基因的表达,其中各炎性因子基因在18h、24h表达量最高（P＜0.05）,故选择18 h、24 h作为后续实验的时间点;与热灭活***处理组相比,共处理组细胞各炎性因子的基因表达量均下调（P＜0.05）。综上可见,孕酮单独处理BESC细胞,对细胞MAPK和NF-κB通路及其下游炎性因子基因IL6、CXCL8、PTGS2、NOS2和TNF的表达无显著影响;孕酮能够抑制LPS或热灭活***诱导的B

关键词：奶牛子宫内膜基质细胞孕酮热灭活大肠杆菌脂多糖炎症

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青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用

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中国临床药理学与治疗学 2007年第2期12卷 156-158页

作者：张蓉李斌张乐之李军丁国富和生琦罗平周红第三军医大学基础部药理教研室重庆400038

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48... 详细信息

目的:观察青蒿琥酯(Artesunate,AS)对热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用以及对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的影响。方法:采用尾静脉注射LD90剂量的热灭活大肠杆菌攻击小鼠,于注射热灭活大肠杆菌后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察给药后7d内小鼠的死亡率;体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,培养体系中预先加入不同浓度AS2h后,观察AS对热灭活大肠杆菌诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6情况。结果:AS可明显推迟热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡时间,并降低小鼠死亡率,死亡率由100%降低至50%(P热灭活大肠杆菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和IL-6,并呈明显量效关系。MTT实验结果显示24h内AS对细胞活力无影响。结论:AS对热灭活大肠杆菌攻击小鼠具有显著保护作用,该保护作用可能与其明显抑制促炎细胞因子释放有关。

关键词：青蒿琥酯热灭活大肠杆菌小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6

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青蒿素防治细菌脓毒症的实验研究

青蒿素防治细菌脓毒症的实验研究

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作者：王俊第三军医大学

学位级别：硕士

目的:脓毒症是由严重细菌感染引起的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),是严重烧伤、创伤和感染的常见并发症,进一步发展可导致脓毒症性休克(septic shock)、多器官功能障碍综合症(multiple organ dysf... 详细信息

目的:脓毒症是由严重细菌感染引起的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),是严重烧伤、创伤和感染的常见并发症,进一步发展可导致脓毒症性休克(septic shock)、多器官功能障碍综合症(multiple organ dysfuction syndrome, MODS),病死率高达50%-60%,至今尚无有效的治疗手段。革兰阴性菌细胞外膜成分脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin)和存在于革兰阴性、阳性细菌的基因组DNA 被认为是导致细菌脓毒症发生的主要致炎因子。有关细菌脓毒症拮抗措施的研究较多,但均未取得突破性进展,因此寻找有效防治脓毒症的药物和方法具有重要意义。在中国,青蒿提取物用来治疗疟疾相关发热已有两千多年的历史。1972 年我国科研人员最早从植物黄花蒿中分离得到其含倍半萜内酯结构的活性单体青蒿素(artemisinin),其衍生物包括二氢青蒿素、蒿甲醚、蒿乙醚及青蒿琥酯。除传统的抗恶性疟作用外,青蒿类物质还具有其它方面的作用,如抗肿瘤、抗血吸虫及调节免疫系统等作用。本课题旨在明确青蒿素防治细菌脓毒症的作用及机制,为青蒿素的老药新用提供实验依据。方法:①体外培养小鼠RAW264.7 细胞,观察青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌诱导RAW264.7 细胞释放TNF-α和IL-6 的抑制作用,并明确其量效和时效关系;②建立小鼠脓毒症模型,观察青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护作用;③流式细胞术观察青蒿素对CpG DNA 结合RAW264.7 细胞表面及内化的影响;④RT-PCR 检测青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌刺激RAW264.7 细胞TLR9 和TLR4 mRNA 表达的影响。⑤电泳迁移率改变分析(EMSA)方法观察青蒿素对CpG DNA、LPS 和热灭活大肠杆菌诱导RAW264.7 细胞NF-κB 活化的抑制作用。结果:①青蒿素显著抑制CpG DNA、LPS、热灭活大肠杆菌诱导的TNF-α和IL-6释放,并呈明显的量效和时效关系;②50、100、200 mg/kg 青蒿素显著降低CpG DNA、LPS、热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡率,青蒿素联合抗生素氨苄青霉素对活大肠杆菌攻击的小鼠具有协同保护作用;③青蒿素对CpG DNA 与RAW264.7 细胞表面结合及内化无明显影响;④青蒿素对CpG DNA、LPS 或热灭活大肠杆菌诱导RAW264.7

关键词：青蒿素脓毒症 CpG DNA LPS 热灭活大肠杆菌氨苄青霉素 TNF-α内化 TLR9 NF-κB

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青蒿琥酯对大肠杆菌脓毒症模型小鼠的治疗作用及其机制研究

青蒿琥酯对大肠杆菌脓毒症模型小鼠的治疗作用及其机制研究

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作者：张蓉第三军医大学

学位级别：硕士

目的:由战/创伤、感染引起的脓毒症(Sepsis)是临床病人死亡的主要原因之一,其病死率高达50-60%,至今尚无有效的治疗手段。其中由革兰阴性菌引起的脓毒症死亡率近年逐渐上升,革兰阴性菌外膜成分脂多糖/内毒素(Lipopolysaccharide)和细菌... 详细信息

目的:由战/创伤、感染引起的脓毒症(Sepsis)是临床病人死亡的主要原因之一,其病死率高达50-60%,至今尚无有效的治疗手段。其中由革兰阴性菌引起的脓毒症死亡率近年逐渐上升,革兰阴性菌外膜成分脂多糖/内毒素(Lipopolysaccharide)和细菌基因组DNA/CpG DNA被认为是导致细菌脓毒症发生的主要致炎因子。虽然国内外有关其拮抗措施的研究较多,但未取得突破性进展。研究发现,青蒿琥酯除抗疟作用外还具有抗炎、抗肿瘤和免疫调节等作用。我们的前期工作证实,抗疟药青蒿素能通过抑制细胞NF-κB的转录活性,减少多种致炎细胞因子的产生,对脓毒症小鼠产生显著的保护作用。但青蒿素不溶于水或油,仅能口服给药,不利于临床重症脓毒症病人的急救。而青蒿素的衍生物青蒿琥酯(artesunate,AS)抗疟作用优于青蒿素,还可静注、肌注、口服和直肠等多种方式给药,起效快,使用方便。因此本研究拟以青蒿素防治脓毒症为基础,探讨青蒿琥酯对大肠杆菌脓毒症的治疗作用及机制,为青蒿琥酯的老药新用提供实验依据。方法:①观察青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌脓毒症小鼠的保护作用;②检测青蒿琥酯对亚致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠血清内毒素和细胞因子TqF-α的影响;③检测青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODN1826刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α、IL-6的影响;④检测青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODN1826刺激RAW264.7细胞TLR4mRNA、TLR9 mRNA表达的影响;结果:①5、15、45 mg/kg青蒿琥酯肌肉注射能延迟热灭活大肠杆菌脓毒症小鼠的死亡时间,降低脓毒症小鼠的死亡率,其中15、45 mg/kg青蒿琥酯作用显著;②5、15、45 mg/kg青蒿琥酯肌肉注射能降低热灭活大肠杆菌攻击小鼠血清内毒素和TNF-α的水平,并呈现明显的量效关系;③青蒿琥酯能抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpGODN1826刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α、IL-6,并呈现明显的量效关系;④青蒿琥酯可抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODN1826刺激RAW264.7细胞TLR4mRNA和TLR9 mRNA的表达。结论:青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌脓毒症模型小鼠具有明显保护作用,其作用机制可能与降低体内LPS水平,抑制TLR4 mRNA和TLR9 mRNA的表达,最终抑制致炎细胞因子的释放有关。

关键词：青蒿琥酯脓毒症热灭活大肠杆菌内毒素 TNF-α IL-6 TLR4 TLR9

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青蒿琥酯对细菌脓毒症模型小鼠的保护作用

青蒿琥酯对细菌脓毒症模型小鼠的保护作用

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全国危重病急救医学学术会议

作者：周红张蓉张乐之李军丁国富和生琦罗平第三军医大学药理学教研室

目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用,探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型,观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响;采用 ELISA 法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠血清 T... 详细信息

目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用,探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型,观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响;采用 ELISA 法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠血清 TNF-α及内毒素水平的影响;采用小鼠腹腔巨噬细胞和 RAW264．7细胞从离体水平观察青蒿琥酯对不同致炎因子 LPS、CpG ODN 和热灭活大肠杆菌诱导细胞因子 TNF-α和 IL-6 释放的影响;采用生物传感器技术、流式细胞技术及 RT-PCR 分别研究青蒿琥酯与 LPS 和 CpG ODN 的直接结合、对细胞表面结合及内吞及 TLR4和 TLR9 mRNA 表达的影响。结果：青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌脓毒症小鼠具有明显保护作用,可明显降低血清 TNF-α及内毒素水平;青蒿琥酯在体外不能直接中和或结合 LPS 和 CpG ODN,但可抑制抑制热灭活大肠杆菌、LPS 和 CpG ODN1826诱导的促炎细胞因子 TNF-、IL-6 的释放;青蒿琥酯对细胞内吞或表面结合没有影响,但可抑制热灭活大肠杆菌、LPS 和 CpG ODN1826诱导的 RAW264．7细胞 TLR4和 TLR9 mRNA 高表达。结论：青蒿琥酯可通过降低血清 TNF-α释放及内毒素水平保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠,其作用可能与降低 TLR4和 TLR9mRNA 表达有关。

关键词：青蒿琥酯热灭活大肠杆菌 CpG ODN LPS 脓毒症 TLR4 TLR9 细胞因子

来源： cnki会议评论

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