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热休克蛋白a12b降低脂多糖诱导的血管内皮细胞通透性

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第二军医大学学报 2015年第5期36卷 483-487页

作者：康秋香陈依余桂芳张旭朱科明第二军医大学长海医院麻醉科ICU 上海200433 上海交通大学医学院附属第三人民医院麻醉科上海201999

目的探讨脂多糖诱导下血管内皮细胞热休克蛋白a12b（HSPAl2b）表达的改变及其对血管内皮通透性的影响。方法体外传代培养人脐静脉内皮细胞，并将其分为空白组（未进行任何处理）、脂多糖（1μg／mL）诱导组、脂多糖＋HSPAl2b高表达组（... 详细信息

目的探讨脂多糖诱导下血管内皮细胞热休克蛋白a12b（HSPAl2b）表达的改变及其对血管内皮通透性的影响。方法体外传代培养人脐静脉内皮细胞，并将其分为空白组（未进行任何处理）、脂多糖（1μg／mL）诱导组、脂多糖＋HSPAl2b高表达组（转染HSPAl2b过表达质粒）和脂多糖＋阴性质粒对照组（转染阴性对照质粒）。采用电阻抗检测仪检测脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗，流式细胞仪检测血管内皮钙黏素（VE-cadherin）的表达，蛋白质印迹、PCR检测HSPAl2b的表达改变。结果脐静脉内皮细胞经脂多糖诱导后，细胞中HSPAl2b表达在O～12h内上调，12h时达高峰。HSPAl2b能使脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗值明显升高（P〈O．001），并能完全对抗脂多糖诱导造成的跨内皮电阻抗值的下降（P〈O．001）。HSPAl2b能使脐静脉内皮细胞细胞膜上VE-cadherin的表达上调。结论HSPAl2b可能通过上调VE-cadherin表达降低血管内皮细胞的通透性，从而保护血管内皮的屏障功能。

关键词：热休克蛋白a12b 脂多糖类人脐静脉内皮细胞跨内皮电阻抗

热休克蛋白a12b在大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中的表达

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眼科新进展 2015年第3期35卷 223-226页

作者：康丽华管怀进张国伟秦柏陈佳张俊芳杨铃南通大学附属医院眼科江苏省南通市226001

目的观察大鼠角膜、晶状体、视网膜中热休克蛋白a12b(heat shock protein a12b,HSPa12b)的表达。方法取SPF级SD大鼠9只,用水合氯醛处死后立即摘取眼球,采用Western blot和RT-PCR分别检测大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中HSPa12b蛋白和mRN... 详细信息

目的观察大鼠角膜、晶状体、视网膜中热休克蛋白a12b(heat shock protein a12b,HSPa12b)的表达。方法取SPF级SD大鼠9只,用水合氯醛处死后立即摘取眼球,采用Western blot和RT-PCR分别检测大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中HSPa12b蛋白和mRNA的表达情况;免疫荧光化学法观察HSPa12b在角膜、晶状体和视网膜组织中的表达及定位。结果Western blot和RT-PCR检测结果显示:HSPa12b在大鼠角膜、晶状体、视网膜均有少量表达,其中角膜组织(0.280±0.034、0.374±0.031)中表达强度相对最低,晶状体(0.331±0.036、0.453±0.040)次之,视网膜组织(0.453±0.029、0.680±0.045)中表达强度最高。免疫荧光化学法结果表明,在角膜组织中HSPa12b主要表达于上皮层,其中基底细胞染色最强,而角膜基质细胞上仅有弱表达;在晶状体组织中HSPa12b主要表达于上皮细胞和皮质;在视网膜组织中HSPa12b主要表达于视网膜神经纤维层、神经节细胞层和内核层,并与NeuN标记的神经元及GS标记的Müller细胞存在共定位。结论HSPa12b在大鼠角膜、晶状体、视网膜组织中均有表达,且呈特异性表达。

关键词：角膜晶状体视网膜热休克蛋白a12b 大鼠

热休克蛋白a12b对缺血再灌注损伤心肌微血管内皮完整性的保护作用

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热休克蛋白A12B对缺血再灌注损伤心肌微血管内皮完整性的保护作用

作者：李楠南京医科大学

学位级别：硕士

背景和目的:急性心肌梗死因其高发病率,高死亡率和高住院费用的特点,亟需引起我们的关注,为其治疗提供更为完善的方案。尽早恢复梗死心肌血流,挽救受损心肌细胞,即再灌注疗法是目前治疗急性心肌梗死的标准治疗方法。心肌缺血后再灌注可... 详细信息

背景和目的:急性心肌梗死因其高发病率,高死亡率和高住院费用的特点,亟需引起我们的关注,为其治疗提供更为完善的方案。尽早恢复梗死心肌血流,挽救受损心肌细胞,即再灌注疗法是目前治疗急性心肌梗死的标准治疗方法。心肌缺血后再灌注可以减少心肌梗死面积,改善长期心肌功能,并减少死亡率。但是心肌缺血后再灌注是一把“双刃剑”,它可加重心脏功能损害,加速心肌细胞的死亡和引起各种恶性心律失常,造成心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤。因此,及早治疗心肌I/R损伤对于改善急性心肌梗死患者的预后至关重要。心肌I/R损伤的发展过程涉及多种机制,其中内皮细胞(Endothelial cells,ECS)的损伤,微血管屏障的破坏已被证实是心肌I/R损伤的关键过程。心肌I/R损伤可上调表面粘附分子的表达并招募嗜中性粒细胞聚集,破坏内皮屏障功能增加微血管内皮的通透性,从而加重I/R损伤后引起的心肌炎症和无复流现象。因此,维持内皮细胞的完整性是治疗心肌I/R损伤的潜在靶点。热休克蛋白a12b(heat shock protein a12b,HSPa12b)是新发现的热休克蛋白家族的成员,特异性表达于血管内皮细胞,可能参与内皮相关的病理生理过程,并可减轻心肌不可逆再灌注慢性缺血阶段的心脏重塑。但是心肌I/R损伤不同于心肌永久性缺血,有其独特的病理生理过程。课题组前期研究发现HSPa12b对心肌I/R损伤具有保护作用,然而其对急性心肌I/R损伤引起的内皮细胞完整性的影响及其机制并不清楚。本课题在前期实验的结果上进一步研究了 HSPa12b对心肌I/R损伤引起的内皮细胞的完整性的作用,旨在探讨HSPa12b是否通过维持I/R期间内皮细胞的完整性来保护心肌I/R损伤。实验方法:1.实验动物模型:实验采用课题组前期构建的8～10周龄高表达人类hspa12b基因的转基因小鼠(HSPa12b Transgenic,Tg),同窝生雄性野生型鼠(Wild type,WT)做对照。本课题采用南京大学动物模式研究所合作的方式,所用实验动物均饲养于南京大学动物模式所SPF级动物房。2.I/R模型:小鼠用1.5%～2%异氟烷吸入麻醉后,开胸,结扎心脏冠脉左前降支,45 min后解除结扎线为再灌注开始。假手术组(sham组)不结扎心脏冠状动脉左前降支血管,余手术步骤与I/R组相同。3.再灌注期间心肌微血管血流检测:心肌缺血开始再灌注时,用25μ1 FITC标记的番茄血凝素(FITC-labeled Tomato lectin)直接从尾静脉注入小鼠体内。血流重建30min后,取心脏制成新鲜冰冻切片,在乳头肌水平制成4μm横切片,荧光显微镜观察分析。4.伊文斯兰渗透实验(Evan's blue dye extravasation):心肌缺血后开始再灌注时,按照3.2 μg/g小鼠体重从尾静脉向小鼠体内注射伊文斯兰染料。心肌再灌注30min后,用4%的多聚甲醛从左心室灌注冲洗冠状动脉网,直至右心室流出的灌注液澄清;分离心脏,拍照。心室组织用甲酰胺在60℃条件下震荡溶解24h;离心、取上清读(610nm)吸光度定量渗漏的伊文斯兰量。5.内皮细胞超微结构观察:心脏组织切成1mm2小块,经固定、脱水、包埋、固化等步骤,然后用超微切片机切成60-70nm超薄切片,200目铜网收集,醋酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色,透射电子显微镜观察。6.紧密连接蛋白ZO-1的表达:实时定量PCR方法检测心肌组织中ZO-1的mRNA的表达水平,同时采用ZO-1和CD31双重免疫荧光染色方法观察心肌内皮细胞中ZO-1的表达情况。7.中性粒细胞浸润:免疫荧光染色法标记心肌细胞间中性粒细胞浸润情况。8.粘附分子表达水平:实时定量PCR检测心肌粘附分子ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达水平。9.统计学分析:采用GraphPad Prism6.0处理各组数据。所有数据均以均数±标准差(X±SD)表示,两组数据之间的比较采用t检验,多组数据之间的比较采用单因素方差分析(ANOVA)检验。Pa12b减少心肌缺血再灌注期间微血管的无复流现象。2.高表达HSPa12b降低心肌I/R损伤引起的血管高通透性。3.高表达HSPa12b升高心肌I/R损伤后抗通透性分子mRNA表达,降低促通透性分子mRNA表达。4.高表达HSPa12b保护心肌I/R损伤后的微血管内皮结构功能的完整性。5.高表达HSPa12b维持心肌I/R损伤后内皮细胞ZO-1的表达。6.高表达HSPa12b减少I/R损伤后心肌中性粒细胞浸润。***12b通过调节VCAM-1表达减少I/R损伤后心肌中性粒细胞浸润。结论:HSPa12b减少心肌缺血再灌注损伤引起的中性粒细胞浸润

关键词：热休克蛋白a12b 微血管内皮细胞心肌缺血/再灌注损伤

热休克蛋白a12b对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制研究

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热休克蛋白A12B对小鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制研究

作者：马玉洁南京医科大学

学位级别：硕士

背景热休克蛋白(HSPs)是进化保守的、在多种组织细胞均有表达的一种分子伴侣,在多种刺激后表达增加,以保护机体不受或少受伤害,大量研究显示某些热休克蛋白参与神经元的保护作用。热休克蛋白a12b (Heat Shock Protein a12b, HSPa12b)是... 详细信息

背景热休克蛋白(HSPs)是进化保守的、在多种组织细胞均有表达的一种分子伴侣,在多种刺激后表达增加,以保护机体不受或少受伤害,大量研究显示某些热休克蛋白参与神经元的保护作用。热休克蛋白a12b (Heat Shock Protein a12b, HSPa12b)是一种新发现的特异性表达于血管内皮细胞的基因,目前尚不清楚其在缺血性脑损伤中的作用。前期我们采用HSPa12b转基因鼠复制脑缺血/再灌注损伤模型,观察到高表达HSPa12b对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,本研究旨在探讨其保护机制。目的探讨HSPa12b对脑缺血/再灌注损伤的保护作用及作用机制内容与方法采用高表达人类HSPa12b基因的转基因鼠,以线栓法堵塞左侧大脑中动脉(Middle Cerebral Artery Occlusion, MCAO)诱导局部脑缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion, I/R)损伤模型,观察和比较不同表达水平的HSPa12b对脑缺血/再灌注损伤的影响,从而明确HSPa12b对缺血性脑损伤是否有保护作用,并探讨其可能的机制。1. HSPa12b转基因鼠：高表达人类HSPa12b基因的转基因鼠(HSPa12b transgenic mice, HSPa12b Tg)由本课题组、南京大学模式动物研究所、美国东田纳西大学韩志华教授实验室共同构建,饲养于南京大学模式动物研究所的SPF级动物房中。2.局灶性脑缺血/再灌注模型：采用8-10周龄、雄性HSPa12b转基因鼠(HSPa12b Transgenic mice, HSPa12b Tg)以及同窝所生的雄性野生型鼠(Wild Type, WT),以MCAO构建局灶性脑缺血模型。缺血时间1h,再灌注时间为3-24h(因具体实验而定)。3.脑损伤评价：(1)脑梗塞面积：分离脑组织,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)染色、照相、分析软件(Alpha Ease FC)统计梗塞面积。(2)神经行为学评分：采用Garcia量表,对小鼠的运动、感觉等功能进行评价。4.血脑屏障通透性：以伊文斯蓝(Evans blue)通过血脑屏障(blood brain barrier, bbb)向脑组织渗透的量表示;免疫印迹法测定参与构成血脑屏障的紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1, ZO-1)、紧密连接蛋白-2(zonula occludens-2、促血管生成素(Angiopoietin-1, Ang-1)的蛋白水平。5.神经元凋亡：(1)分离脑组织并制备成石蜡切片,运用TUNEL法进行神经元凋亡染色。(2)免疫印迹法测定脑促凋亡蛋白bax和抑凋亡蛋白bcl-2的表达水平,凋亡信号通路上ERK、P38、JNKs及其磷酸化表达水平。6.统计学处理：数据以均数±标准差(x±s)表示,用Stata7.0软件进行统计学分析,多组间比较采用ANOVA分析,多组间两两比较post-hoc检验,Pa12b Tg鼠脑梗塞体积显著缩小、神经行为学功能障碍显著改善;2.与MCAO的WT鼠比较,MCAO的HSPa12b Tg鼠血脑屏障通透性显著降低,且HSPa12b Tg鼠脑组织中ZO-1、ZO-2. Ang-1的表达水平显著升高。3.与MCAO的WT鼠比较,MCAO的HSPa12b Tg鼠的神经元凋亡数目显著减少,而且HSPa12b Tg鼠脑组织中P38和ERKs的磷酸化水平显著降低、bcl-2/bax比值显著升高。结论高表达HSPa12b对MCAO引起的局灶性脑缺血/再灌注损伤具有保护作用,该保护作用可能与降低bbb通透性、减轻神经元凋亡有关。

关键词：脑缺血/再灌注损伤热休克蛋白a12b 血脑屏障神经元凋亡 MAPK

热休克蛋白a12b对脓毒症小鼠肺血管内皮损伤的影响及其作用机制

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热休克蛋白A12B对脓毒症小鼠肺血管内皮损伤的影响及其作用机制

作者：陈依第二军医大学

学位级别：硕士

脓毒症(sepsis)是影响多种器官功能的全身炎症反应,严重的脓毒症可导致脓毒性休克,并危及生命。呼吸系统是最易受到累及的器官系统,将近50%的严重脓毒症患者可以发展为急性肺损伤(ALI),甚至急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。其中,肺实质弥漫... 详细信息

脓毒症(sepsis)是影响多种器官功能的全身炎症反应,严重的脓毒症可导致脓毒性休克,并危及生命。呼吸系统是最易受到累及的器官系统,将近50%的严重脓毒症患者可以发展为急性肺损伤(ALI),甚至急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。其中,肺实质弥漫性炎症和严重的肺功能障碍是导致多脏器功能衰竭和脓毒症死亡的首要原因。急性肺损伤涉及多个病理过程,其中包括:血管完整性缺失,中性粒细胞浸润,富蛋白液在肺内堆积。尽管对于脓毒症潜在的病理产生机制的研究已有不同程度的进展,但并未完全明确。因此,对于脓毒症急性肺损伤的有效防治,仍是亟待解决的临床问题。近年来,对于热休克蛋白70家族新成员热休克蛋白a12b(HSPa12b)的研究受到关注。HSPa12b主要表达于内皮细胞,并且广泛分布在哺乳动物不同的组织内。大量研究表明HSPa12b可以保护不同危险因素对于内皮细胞的侵害,比如脑缺血再灌注损伤,心脏功能障碍等。除此之外,HSPa12b可以减弱LPS诱导的内皮细胞损伤;并且,HSPa12b作为一种新型的内皮生物标志物,可以一定程度上预测脓毒症及严重脓毒症患者的预后。但是,HSPa12b对脓毒症时肺内皮功能有无保护作用及其可能的机制,尚未完全明确。本研究拟通过在体与离体实验,探讨HSPa12b对脓毒症肺血管内皮损伤小鼠的影响及其可能的作用机制。首先,验证经鼻吸入HSPa12b siRNA对脓毒症小鼠肺组织内HSPa12b表达的干扰效率;其次,探讨HSPa12b对脓毒症肺损伤模型小鼠生存率,病理损伤及炎症反应的影响;最后,进一步探讨HSPa12b对脓毒症肺血管内皮损伤产生影响可能的机制。第一部分经鼻吸入HSPa12b siRNA对小鼠在体干扰效率的验证目的验证HSPa12b siRNA经鼻吸入后对小鼠肺内HSPa12b表达的影响及其干扰效率。方法将C57bL/6小鼠随机分为2组,分别经鼻吸入经过2-Ome修饰的HSPa12bsiRNA和阴性对照siRNA(Negative Control siRNA,NC siRNA),24h后取小鼠心脏、肺、肝、肾组织,应用RT-q PCR法及Western blot法分别检测小鼠不同组织内HSPa12b m RNA表达及肺组织内HSPa12b蛋白的表达水平。结果***12b siRNA经鼻吸入的C57bL/6小鼠,不同组织(心脏、肺、肝脏、肾脏)内HSPa12b m RNA的表达水平较NC siRNA组小鼠呈现不同程度地降低,但肺组织表达水平明显降低(p12b siRNA经鼻吸入的C57bL/6小鼠,肺组织内HSPa12b蛋白的表达水平较NC siRNA组小鼠明显降低(pa12b siRNA对小鼠肺内HSPa12b表达具有下调作用,并可有效地将敲减作用特异性发挥于肺组织,为后续实验提供了可靠的依据。第二部分HSPa12b对脓毒症肺损伤模型小鼠生存率的影响目的研究HSPa12b体内敲减对脓毒症肺损伤模型小鼠生存率的影响。方法将C57bL/6小鼠随机分为4组,每组15只,分别为:阴性对照组(Sham组)、CLP模型组(CLP组)、CLP+HSPa12b siRNA组(HSPa12b干扰组)、CLP+NC siRNA组(NC干扰组)。经鼻吸入经过2-Ome修饰的HSPa12b siRNA和阴性对照siRNA(NC siRNA),24h后行CLP术,并于术后连续7天观察不同处理组小鼠的生存率,并绘制生存曲线。结果经过连续7天观察和记录的生存率显示:HSPa12b干扰组小鼠生存率为0,明显低于NC siRNA(生存率为40%)组,CLP组(生存率为33.33%)和Sham组(生存率为100%)(pa12b体内敲减明显增加脓毒症肺损伤小鼠的死亡率,说明HSPa12b在脓毒症诱导的肺损伤中具有一定的保护作用。第三部分HSPa12b对脓毒症肺损伤模型小鼠肺病理损伤及炎症反应的影响目的探讨HSPa12b体内敲减对脓毒症肺损伤模型小鼠肺病理损伤及炎症反应的影响。方法将C57bL/6小鼠随机分为4组,每组8只,分别为:阴性对照组(Sham组)、CLP模型组(CLP组)、CLP+HSPa12b siRNA组(HSPa12b干扰组)、CLP+NC siRNA组(NC干扰组)。经鼻吸入经过2-Ome修饰的HSPa12b siRNA和阴性对照siRNA(NC siRNA)24h后行CLP术。1.于术后24h和48h取小鼠肺组织行HE染色,并进行病理学评分。2.于术后24h行支气管肺泡灌洗,通过ELISA法检测炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α水平。3.于术后24h行支气管肺泡灌洗,通过ELISA法检测MPO活性及流式细胞术进行中性粒细胞和肺泡单核巨噬细胞计

关键词：热休克蛋白a12b 干扰效率经鼻吸入 siRNA CLP 生存率炎症病理损伤支气管肺泡灌洗内皮损伤 TUNEL 凋亡 MAPK

热休克蛋白a12b对心脏缺血/再灌注损伤保护作用的初步研究

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热休克蛋白A12B对心脏缺血/再灌注损伤保护作用的初步研究

作者：戴乐杨南京医科大学

学位级别：硕士

背景和目的:冠心病是世界范围内的主要死亡原因之一,其发病率与死亡率逐年增加且近年呈年轻化的趋势。目前,再灌注疗法已经成为治疗冠心病的重要手段,重新恢复缺血心肌的血流能够有效缩小梗死面积,改善长期预后,降低死亡率。然而,在血... 详细信息

背景和目的:冠心病是世界范围内的主要死亡原因之一,其发病率与死亡率逐年增加且近年呈年轻化的趋势。目前,再灌注疗法已经成为治疗冠心病的重要手段,重新恢复缺血心肌的血流能够有效缩小梗死面积,改善长期预后,降低死亡率。然而,在血流恢复的早期,可能进一步加重原有的心肌缺血性损伤,包括梗死面积扩大、心律失常、猝死等,这种现象被称为心肌缺血/再灌注(Ischemia/reperfusion,I/R)损伤。因此只有减轻I/R损伤,才能有效保证血流再灌注的治疗效果。I/R损伤的病理机制尚未完全阐明,但资料显示可能与内皮细胞的功能障碍、氧化应激、细胞内钙超载等有关。此外,I/R能够通过上调促凋亡蛋白水平,下调抗凋亡蛋白水平,或者通过激活细胞的死亡信号受体而引起心肌细胞凋亡,导致心肌细胞数量减少,心功能障碍。因此心肌细胞凋亡是I/R损伤重要的病理机制之一,减少细胞凋亡即有保护受损心肌的作用。近年来研究发现,在动脉粥样斑块中克隆到的热休克蛋白a12b(Heat shock protein a12b,HSPa12b)可以通过保持血脑屏障的完整性,减少细胞凋亡,减轻大脑I/R损伤;通过调节血管再生,增加毛细血管和小动脉的密度,改善心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后心室重塑。HSPa12b在心肌I/R损伤中的生物学作用尚未明确。本实验采用课题组前期构建的高表达HSPa12b转基因小鼠,探索HSPa12b在心肌I/R损伤中的作用及可能机制。方法:1.构建实验动物模型:本课题组与南京大学模式动物研究所合作,通过哺乳动物基因转移方法,将含有人hspa12b基因的基因表达片段通过显微注射注入C57bL/6小鼠受精卵原核中,得到携带有人hspa12b基因的转基因动物。通过蛋白质免疫印迹法测定野生型(Wild type,WT)和转基因小鼠(Transgenic mice,Tg)心肌组织中HSPa12b蛋白表达水平以确定模型构建成功。通过免疫荧光确定HSPa12b特异性表达于内皮细胞。2.构建心肌I/R模型:吸入1.5-2%异氟烷麻醉小鼠在达到麻醉状态后,开胸暴露心脏,结扎冠脉左前降支引起心肌缺血,于45 min后解除结扎进行血流再灌注。假手术(Sham)组除不结扎血管外,其他步骤均与I/R手术一致。3.检测心肌HSPa12b的表达:通过实时定量PCR检测小鼠心肌组织中HSPa12b mRNA的表达量。4.评价心功能:利用超声心动图检测小鼠心功能。5.检测梗死面积:采用TTC染色法测定I/R小鼠的心肌梗死面积。6.评价心肌细胞凋亡状况:制作小鼠心脏石蜡切片并进行TUNEL法染色,观察TUNEL阳性的细胞个数,通过蛋白质免疫印迹法测定凋亡相关蛋白的表达水平:bcl-2,bax。7.探索信号通路:通过蛋白免疫印记技术检测心肌组织中目标蛋白表达水平:PI3K/Akt/mTOR信号通路。通过注射小鼠PI3K的拮抗剂预处理,观察阻断该信号通路对HSPa12b改善I/R心功能不全的影响。8.统计学分析:本课题组运用GraphPad Prism6处理实验数据。所有数据均以均数±标准差(χ±SD)表示,两组数据之间采用均数检验(t检验),多组实验数据之间采用方差分析(ANOVA)进行比较及Tukey事后比较法进行两两比较,Pa12b的表达水平升高。2.高表达HSPa12b改善I/R后小鼠心脏的收缩功能。3.高表达HSPa12b缩小心肌梗死面积。4.高表达HSPa12b减少I/R后心肌细胞凋亡。5.高表达HSPa12b激活PI3K/Akt/mTOR信号通路。6.阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路后,HSPa12b对I/R小鼠心功能的保护作用消失。结论:I/R上调心肌组织HSPa12b表达,而高表达HSPa12b显著改善I/R小鼠心功能,缩小梗死面积,减少心肌细胞凋亡。HSPa12b对心肌I/R损伤的这些保护作用依赖于对PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活。结果提示,HSPa12b可能是心肌I/R损伤新的干预靶点。

关键词：热休克蛋白a12b 心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡

热休克蛋白a12b介导COX-2表达调控心肌缺血再灌注损伤中心肌细胞线粒体自噬的作用研究

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局解手术学杂志 2022年第9期31卷 759-765页

作者：王书君谭慧琼袁杰海南医学院第一附属医院老年医学科海南海口570102 中国医学科学院阜外医院心血管内科北京100037 新疆维吾尔自治区人民医院心内科新疆乌鲁木齐830001

目的探讨热休克蛋白a12b(HSPa12b)对心肌缺血再灌注(MI/R)损伤中心肌细胞线粒体自噬的影响及可能的分子机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、p LVX-NC组和p LVX-HSPa12b组,每组10只。其中,假手术组大鼠仅暴露心脏,不进行... 详细信息

目的探讨热休克蛋白a12b(HSPa12b)对心肌缺血再灌注(MI/R)损伤中心肌细胞线粒体自噬的影响及可能的分子机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、p LVX-NC组和p LVX-HSPa12b组,每组10只。其中,假手术组大鼠仅暴露心脏,不进行MI/R处理;模型组大鼠给予心肌内注射0.9%氯化钠注射液20μL,7 d后构建MI/R模型;p LVX-NC组大鼠给予心肌内注射20μL p LVX-NC慢病毒液,7 d后构建MI/R模型;p LVX-HSPa12b组大鼠给予心肌内注射20μL p LVX-HSPa12b慢病毒液,7 d后构建MI/R模型。ELISA检测各组大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-Mb)和乳酸脱氢酶(LDH)含量,HE染色观察各组大鼠心肌组织病理学形态,TUNEL染色检测各组大鼠心肌组织内细胞凋亡情况,免疫组织化学染色检测各组大鼠心肌组织内环氧化酶-2(COX-2)和微管相关蛋白1轻链3β(LC3β)表达,Western blot检测各组大鼠心肌组织内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Parkin、PINK1蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清中CK-Mb和LDH的含量均升高,心肌组织损伤较为严重,心肌组织内TUNEL阳性细胞率升高,COX-2阳性表达率上升,而LC3β阳性表达率下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降,Parkin、PINK1蛋白的表达水平均下调(P a12b组大鼠血清中CK-Mb和LDH的含量均降低,心肌组织损伤现象明显减轻,心肌组织内TUNEL阳性细胞率降低,COX-2阳性表达率下降,同时LC3β阳性表达率上升,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,Parkin、PINK1蛋白的表达水平均上调(P a12b能够通过增加心肌细胞线粒体自噬途径来缓解MI/R模型大鼠心肌损伤,其作用机制可能与抑制COX-2表达有关。

关键词：心肌缺血再灌注热休克蛋白a12b 环氧化酶-2 线粒体自噬

热休克蛋白a12b对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

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实用老年医学 2017年第8期31卷 728-730,734页

作者：戴乐杨孔秋月李楠丁正年南京医科大学第一附属医院麻醉科江苏省南京市210029

目的探讨热休克蛋白a12b(heat shock protein a12b,HSPa12b)在心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用。方法本实验采用8~10周龄、雄性高表达HSPa12b转基因鼠(HSPa12b transgenic mice,Tg鼠),一窝所生的雄性野生型(wild type,WT)鼠作为对照,随机分配后行假手术或I/R手术,结扎冠状动脉左前降支45 min(缺血)、松开结扎线4 h(再灌注)。通过聚合酶链式反应(PCR)检测WT鼠I/R手术与假手术后4 h,心肌HSPa12b mRNA的表达水平;通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定I/R手术后4 h,WT鼠与Tg鼠的心肌梗死面积;通过免疫印迹法检测WT鼠与Tg鼠分别行I/R手术与假手术的4组心肌中bcl-2和bax蛋白水平。结果 I/R损伤引起WT鼠心肌HSPa12b mRNA表达水平增高。在共同经历I/R损伤后,Tg鼠较WT鼠的心肌梗死面积缩小,并且Tg鼠心肌组织抗凋亡能力(bcl-2/bax比值)明显高于WT鼠。结论高表达HSPa12b可能通过减少细胞凋亡,减轻心肌I/R损伤,发挥心肌保护的功能,提示HSPa12b可能是干预心肌I/R损伤的潜在靶点。

关键词：热休克蛋白a12b 心肌缺血/再灌注损伤细胞凋亡

热休克蛋白a12b对缺血/再灌注损伤心肌微血管内皮完整性的保护作用

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实用老年医学 2018年第7期32卷 613-615页

作者：李楠孔秋月戴乐杨丁正年南京医科大学第一附属医院麻醉科江苏省南京市210029

目的探讨热休克蛋白a12b(heat shock protein a12b,HSPa12b)对心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后微血管无复流现象、血管通透性及其微血管内皮结构完整性的影响。方法实验选用同窝、8~10周龄雄性HSPa12b转基因鼠(HSPa12b... 详细信息

目的探讨热休克蛋白a12b(heat shock protein a12b,HSPa12b)对心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后微血管无复流现象、血管通透性及其微血管内皮结构完整性的影响。方法实验选用同窝、8~10周龄雄性HSPa12b转基因鼠(HSPa12b Transgenic,Tg)和野生型鼠(wild type,WT)。所有小鼠均接受手术,即结扎冠状动脉左前降支诱导心肌缺血(45 min),松开结扎为I/R开始。I/R 30 min后,采用番茄血凝素免疫荧光标记检测心肌微血管血流灌注情况,伊文斯兰染料检测心肌微血管渗透性。I/R 4 h后取小鼠心脏组织,电子显微镜观察心肌微血管内皮细胞超微结构变化。结果 I/R损伤后,与WT鼠相比,Tg鼠心肌无复流面积显著减少,血管通透性明显降低,微血管内皮细胞损伤减少且细胞间连接更加完整。结论高表达HSPa12b显著减轻心肌I/R诱导的心肌微血管内皮细胞结构和功能损伤,从而保护心肌I/R损害,提示HSPa12b可能为治疗心肌I/R损伤的新靶点。

关键词：热休克蛋白a12b 心肌缺血/再灌注损伤微血管内皮细胞