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转基因玉米的多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法研究

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高等学校化学学报 2007年第8期28卷 1458-1463页

作者：周颖黎源倩裴晓方四川大学华西公共卫生学院成都610041

采用三重PCR反应,同时扩增CaMV 35S启动子、hsp70 intron1和CryIA(b)基因之间序列以及Invertase基因,扩增产物用无胶筛分毛细管电泳-激光诱导荧光检测,从而建立了多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测转基因玉米的新方法.对影响多重... 详细信息

采用三重PCR反应,同时扩增CaMV 35S启动子、hsp70 intron1和CryIA(b)基因之间序列以及Invertase基因,扩增产物用无胶筛分毛细管电泳-激光诱导荧光检测,从而建立了多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光快速检测转基因玉米的新方法.对影响多重PCR扩增和毛细管电泳的因素进行了优化.在优化的条件下,本方法可以同时检测转基因玉米样品中3种外源基因.经序列测试证实,三重PCR扩增产物的序列与原基因完全一致,表明扩增结果可靠.该方法能检出0.05%MON810转基因玉米成分,远低于欧盟对转基因食品规定标识的质量分数阈值(1%).该方法对玉米及其制品的检测结果与实时荧光PCR方法的检测结果一致,与传统的琼脂糖凝胶电泳法相比,具有特异性高、快速及灵敏等优点,适用于玉米中转基因成分以及转基因玉米MON810品系的快速筛选、鉴定和检测,能满足我国实施转基因食品标签法规的要求.

关键词：多重PCR 无胶筛分毛细管电泳激光诱导荧光检测转基因玉米

基于适配体亲和毛细管电泳-激光诱导荧光检测的凝血酶分析

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色谱 2009年第3期27卷 333-336页

作者：张月侠宋茂勇李涛赛道建汪海林山东师范大学生命科学学院山东济南250014 中国科学院生态环境研究中心环境化学与生态毒理学国家重点实验室北京100085

以一种高亲和力适配体作为亲和荧光探针,以自建的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测装置为基础,建立了一种高灵敏、快速测定人凝血酶的方法。荧光标记的凝血酶适配体特异性地与凝血酶结合并形成稳定的凝血酶-适配体复合物,采用CE-LI... 详细信息

以一种高亲和力适配体作为亲和荧光探针,以自建的毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)检测装置为基础,建立了一种高灵敏、快速测定人凝血酶的方法。荧光标记的凝血酶适配体特异性地与凝血酶结合并形成稳定的凝血酶-适配体复合物,采用CE-LIF对复合物进行分离检测,从而测定凝血酶浓度。探讨了盐离子种类及浓度对适配体与凝血酶结合的影响,并在选定的电泳条件下对凝血酶检测的线性范围、检出限和重现性进行了测定。结果表明,盐离子存在的条件下适配体与凝血酶的亲和力降低,不利于两者的结合;人血清溶液中,凝血酶浓度在0.25～10nmol/L范围内与复合物峰面积具有良好的线性相关性(r2=0.991),检出限(S/N=3)为55.6pmol/L;精密度和回收率测定结果均能满足分析的要求。

关键词：亲和毛细管电泳激光诱导荧光检测凝血酶适配体血清

毛细管电泳-激光诱导荧光检测分枝杆菌脱氧核糖核酸限制性内切酶谱

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色谱 2005年第1期23卷 103-107页

作者：黎源倩王国庆米建萍周颖曾红燕张朝武四川大学华西公共卫生学院四川成都610041

建立了毛细管电泳分离激光诱导荧光检测(CE LIFD)分析分枝杆菌脱氧核糖核酸(DNA)限制性内切酶谱的新方法。用聚合酶链反应(PCR)扩增分枝杆菌hsp65基因的长度为439bp的片段,该扩增片段经限制性内切酶BstEⅡ和HaeⅢ酶切后,分别用CE LIFD... 详细信息

建立了毛细管电泳分离激光诱导荧光检测(CE LIFD)分析分枝杆菌脱氧核糖核酸(DNA)限制性内切酶谱的新方法。用聚合酶链反应(PCR)扩增分枝杆菌hsp65基因的长度为439bp的片段,该扩增片段经限制性内切酶BstEⅡ和HaeⅢ酶切后,分别用CE LIFD装置和常规琼脂糖电泳(AGE)对比检测酶切片段。对PCR扩增片段的酶切样品的预处理和CE条件进行了优化,获得了8种分枝杆菌DNA的限制性内切酶谱图。DNA片段相对迁移时间的相对标准偏差(RSD)≤3 6%。结果表明,CE的分离效能明显高于AGE,是研究DNA限制性内切酶谱的更有效的检测手段。

关键词：毛细管电泳激光诱导荧光检测限制性内切酶谱分枝杆菌

毛细管电泳-激光诱导荧光检测法分析胃癌组织及癌旁正常组织蛋白质的差异性

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色谱 2013年第10期31卷 1005-1009页

作者：郝颖王荣尹强谢华李文斌贾正平全军高原损伤防治重点实验室兰州军区兰州总医院临床药理基地甘肃兰州730050 兰州大学生命科学学院甘肃兰州730000

胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一。近年来寻找肿瘤相关特异蛋白质是蛋白质组学研究的热点。本文通过考察毛细管动态涂层方法、筛分介质聚环氧乙烷（PEO）的浓度、缓冲液的pH值、分离电压、温度及荧光染料对分离效果的影响，建点了毛细管电... 详细信息

胃癌是临床常见的恶性肿瘤之一。近年来寻找肿瘤相关特异蛋白质是蛋白质组学研究的热点。本文通过考察毛细管动态涂层方法、筛分介质聚环氧乙烷（PEO）的浓度、缓冲液的pH值、分离电压、温度及荧光染料对分离效果的影响，建点了毛细管电泳-激光诱导荧光法分离胃癌组织及癌旁正常组织蛋白质的方法；通过分离检测，获得两者的蛋白质指纹图谱．经分析，两者的指纹图谱相似度达到0．8以上，差异蛋白质分子质量集中在50000～100000Da之间，提示某些小分子蛋白质可能是和肿瘤发生相关的特异蛋白质，从而缩小了特异性分子标记物的筛选范围。病理组织学分型及蛋白质电泳峰数目的统计结果验证了该方法的可靠性。该方法具有临床应用的潜力.

关键词：毛细管电泳激光诱导荧光检测蛋白质差异性胃癌组织癌旁正常组织

毛细管电泳-激光诱导荧光检测用于多个胞内蛋白激酶的抑制剂筛选和选择性评价(英文)

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色谱 2013年第7期31卷 646-655页

作者：张倩倩张雪佩张含智康经武中国科学院上海有机化学研究所上海200032

发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法。CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能。共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽... 详细信息

发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法。CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能。共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽、2种选择性蛋白激酶抑制剂和1种非选择性蛋白激酶抑制剂用于方法的建立。特异性底物肽与细胞裂解液混合后孵育,被其相应的激酶选择性地磷酸化,利用CE-LIF分离检测磷酸化产物和底物肽。同时测定一个抑制剂对几种蛋白激酶的抑制活性,用于评价抑制剂的选择性。与传统的单靶标筛选模式相比,这种基于细胞裂解液的多靶标筛选方法能提供更多的信息,更加高效,且细胞裂解液作为一种廉价的激酶来源大大降低了筛选成本。

关键词：毛细管电泳激光诱导荧光检测蛋白激酶抑制剂筛选选择性评价

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激光诱导荧光检测器用于生物胺检测研究

激光诱导荧光检测器用于生物胺检测研究

作者：杨锐齐齐哈尔大学

学位级别：硕士

激光诱导荧光检测器(LIFD)是目前用于检测化学及生物样品的最灵敏检测技术之一，广泛用于高效液相色谱(HPLC)、微柱液相色谱(Micro-LC)及毛细管电泳(CE)等分离领域。在生物胺的衍生及分离过程中，首先对LIFD的检测灵敏度及其线性关系进... 详细信息

激光诱导荧光检测器(LIFD)是目前用于检测化学及生物样品的最灵敏检测技术之一，广泛用于高效液相色谱(HPLC)、微柱液相色谱(Micro-LC)及毛细管电泳(CE)等分离领域。在生物胺的衍生及分离过程中，首先对LIFD的检测灵敏度及其线性关系进行测试;其次，液体样品前处理方法的探讨研究;研究衍生温度、缓冲液pH、衍生反应时间等因素对生物胺衍生化的影响和色谱条件中流动相、温度的影响，并用于饮料中生物胺的测试。本文采用异硫氰酸荧光素(FITC)作为柱前衍生试剂，对饮料中的生物胺衍生化，采用Sinochrom ODS-BP C18(5μm，4.6mm×200mm)色谱柱，高效液相色谱(HPLC)与激光诱导荧光检测器(LIFD)联用技术，对衍生产物进行检测。以衍生产物的稳定性、线性范围和重复性为检测指标，结果表明： (1)对激光诱导荧光检测器在不连接色谱柱情况下的性能指标进行测试，结果显示检测限为：7.55×10mol/L;检测灵敏度：1.29×10mV/mol/L;线性范围：大于104。 (2)实验中采用液-液萃取(LLE)的方法，对饮料样品的中生物胺进行萃取。选用氯化钠为萃取用盐，在pH=11的碱性条件下，用乙酸乙酯进行萃取取得良好效果。 (3)本文对衍生条件进行了优化，在pH=9.0、恒温50℃下衍生反应18h条件下，以异硫氰酸荧光素(FITC)作为衍生试剂，对生物胺进行测定。并且成功用于饮品中生物胺的定性分离，其色谱条件：流动相为甲醇：水=7：3，流速1mL/min。

关键词：生物胺高效液相色谱异硫氰酸荧光素激光诱导荧光检测

开放式仪器分析教学实验设计——基于LEGO积木的模块化激光诱导荧光检测系统的构建

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大学化学 2023年第4期38卷 291-299页

作者：潘建章张梦婷张箫扬廖育城徐欣然方群浙江大学化学系杭州310058 浙江大学杭州国际科创中心杭州311200

基于市售乐高(LEGO)积木和3D打印积木构建的光学模块,发展了适用于本科生仪器分析教学实验的模块化激光诱导荧光(Laserinducedfluorescence,LIF)检测系统。将该系统的构建过程引入本科生仪器分析的实验教学中,指导学生基于不同功能的积... 详细信息

基于市售乐高(LEGO)积木和3D打印积木构建的光学模块,发展了适用于本科生仪器分析教学实验的模块化激光诱导荧光(Laserinducedfluorescence,LIF)检测系统。将该系统的构建过程引入本科生仪器分析的实验教学中,指导学生基于不同功能的积木块,实现LIF系统的组装和搭建,并应用于对荧光素钠溶液浓度的测定。该系统具有成本低、易构建、操作灵活等特点,模块化的构建形式大大降低了仪器搭建门槛,即使没有前期经验的本科生也可在3 h内搭建完成。将模块化构建思想引入开放式教学环节,可激发学生对仪器分析课程的兴趣和热情,同时有助于加深学生对荧光分析原理和LIF检测系统结构的理解,在系统构建过程中还能锻炼学生的动手能力,提高学生发现问题和和解决问题的能力。

关键词：激光诱导荧光检测模块化设计乐高积木 3D打印开放式教学

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毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测生物胺

分析化学 2008年第1期36卷 24-28页

作者：曹丽伟孟建新刘咏娟暨南大学化学系暨南大学化学系广州510632

采用新合成的6-氧-[(1-琥珀酰亚胺)氧酰甲基]-荧光素乙酯(SOFE)作为柱前衍生试剂,毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测了乙醇胺(EOA)、组胺(His)、甲胺(MA)、乙胺(EA)、酪胺(TYR)及苯乙胺(PEA)6种生物胺。在硼酸-硼砂缓冲溶液(pH8.5)中,室... 详细信息

采用新合成的6-氧-[(1-琥珀酰亚胺)氧酰甲基]-荧光素乙酯(SOFE)作为柱前衍生试剂,毛细管电泳分离-激光诱导荧光检测了乙醇胺(EOA)、组胺(His)、甲胺(MA)、乙胺(EA)、酪胺(TYR)及苯乙胺(PEA)6种生物胺。在硼酸-硼砂缓冲溶液(pH8.5)中,室温(25℃)下衍生10min。用pH8.5的含25mmol/LSDS15%(V/V)乙腈的40mmol/L硼酸盐溶液作为电泳缓冲溶液,6种衍生物在15min内完全分离,检出限在2.5×10-11～8×10-11mol/L之间。该方法应用于酱油中生物胺的测定,结果令人满意。

关键词：毛细管电泳激光诱导荧光检测生物胺荧光衍生试剂

微乳电动色谱-激光诱导荧光检测法快速分离测定麻黄碱和伪麻黄碱

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分析化学 2007年第3期35卷 382-385页

作者：王卫平王树民罗智胡之德兰州大学化学化工学院兰州大学化学化工学院兰州730000

以5-（4,6-三氯-s-三嗪基-2-氨基）荧光素为衍生试剂,建立了一种微乳电动色谱-激光诱导荧光检测法分析麻黄碱和伪麻黄碱的新方法。经过实验条件的优化,使用50mmol/L硼砂,5%微乳液（V/V）(微乳液组成（W/W）3.24%正己烷,3.24%SDS,26.44%... 详细信息

以5-（4,6-三氯-s-三嗪基-2-氨基）荧光素为衍生试剂,建立了一种微乳电动色谱-激光诱导荧光检测法分析麻黄碱和伪麻黄碱的新方法。经过实验条件的优化,使用50mmol/L硼砂,5%微乳液（V/V）(微乳液组成（W/W）3.24%正己烷,3.24%SDS,26.44%正丁醇,57.08%水),14%乙腈（V/V）作为运行缓冲溶液,电压22.5kV,温度为25℃条件下,11min内可实现基线分离。分析物的峰高与浓度（2.5;5μg/L）之间存在较好的线性关系,相关系数为0.9915（麻黄碱）和0.9981（伪麻黄碱）;检出限分别为2.39×10-3和3.85×10-3μg/L。将该法成功用于麻黄及其制剂中两种生物碱的分析,回收率在92.0%;08.4%之间。

关键词：微乳电动色谱激光诱导荧光检测 5-(4,6-三氯-s-三嗪基-2-氨基)荧光素麻黄碱伪麻黄碱

来源：博看期刊