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中华麻醉学杂志 2023年第10期43卷 1205-1209页

作者：彭敏敬吴艳琼柯昌斌湖北医药学院附属太和医院麻醉科十堰442000 荆州市第一人民医院麻醉科荆州434000

目的评价脊髓胞质活化/增殖相关蛋白1(Caprin-1)介导的钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡα)表达与小鼠痛觉感知的关系。方法通过Nestin^(CreERT2)小鼠与Caprin-1^(flox/flox)小鼠多代杂交,获得Nestin^(CreERT2);Caprin-1^(flox/flox)纯合子小鼠,采用随机数字表法分为2组(n=5):Nestin^(CreERT2);Caprin-1^(flox/flox)溶剂对照组(SC组)和Caprin-1敲除组(KO组)。KO组连续5 d腹腔注射他莫昔芬100 mg/kg,以诱导性敲除Caprin-1基因,SC组给予等容量溶剂。于连续给药前1 d和给药结束后5 d时测定机械缩足反应阈(MWT)。随后处死小鼠,取脊髓L_(4-6)节段,采用Western blot检测脊髓Caprin-1、CaMKⅡα表达,采用实时定量PCR法检测脊髓Caprin-1、CaMKⅡα的mRNA表达,采用免疫荧光双标染色检测Caprin-1与CaMKⅡα共表达情况。结果与SC组比较,KO组他莫昔分给药结束后5 d时MWT升高,脊髓Caprin-1及其mRNA、CaMKⅡα及其mRNA表达下调(P<0.05),Caprin-1与CaMKⅡα在脊髓背角共定位表达下调。结论脊髓Caprin-1可通过促进CaMKⅡα表达,参与小鼠痛觉感知的形成。

关键词： CaMKⅡα 给药结束溶剂对照组他莫昔芬连续给药脊髓背角 Nestin 小鼠

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达那唑诱导雌性大鼠性早熟模型的建立及其评估

达那唑诱导雌性大鼠性早熟模型的建立及其评估

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作者：戴方伟浙江大学

学位级别：硕士

儿童性早熟是一种儿童生长发育异常的疾病,该病已成为最常见的小儿内分泌疾病之一。下丘脑-垂体-性腺轴功能的提前激活导致了真性性早熟的发生。目前,大鼠已经成为性发育研究的主要实验动物,大量治疗儿童性早熟药物的研究开发均通过实... 详细信息

儿童性早熟是一种儿童生长发育异常的疾病,该病已成为最常见的小儿内分泌疾病之一。下丘脑-垂体-性腺轴功能的提前激活导致了真性性早熟的发生。目前,大鼠已经成为性发育研究的主要实验动物,大量治疗儿童性早熟药物的研究开发均通过实验动物复制儿童性早熟模型进行,因此掌握性发育疾病模型的背景信息显得尤为重要。然而,到目前为止,国内外几乎没有相关资料可查。本论文首先分析正常雌性SD大鼠性发育早期不同日龄的各项性生理指标和血清性激素水平,以收集大鼠性发育的相关参考数据。在此基础上,我们选用达那唑诱导雌性大鼠真性性早熟模型,检验该模型复制儿童性早熟的各项性生理发育指标,并研究抗早熟颗粒剂对达那唑诱导的性早熟模型大鼠第二性征和生殖激素的影响,初步评估达那唑诱导雌性大鼠真性性早熟模型的应用价值。***雌性大鼠性发育早期性器官等脏器和性激素的动态变化从生产群中取出60窝密度状态一致的SD大鼠,随机选取雌性大鼠,检测15、25、32、40日龄(n=30)时大鼠体重、主要脏器指数、子宫和卵巢组织结构特点,并测定15、25、32、40、60日龄大鼠血清LH、FSH、E2水平。结果显示大鼠卵巢、子宫的增长速度大于体重的增长,而其他脏器增速大都小于体重的增长,提示大鼠性器官在性发育早期得到机体的优先发育。研究记录了血清LH、FSH、E2水平在不同日龄段的变化规律,表明血清LH、E2浓度在32日龄时出现较为明显升高,提示性腺轴功能已经激活。60日龄大鼠血清性激素水平的波动类似于动情周期的规律性变化,推测大鼠在60日龄前即已进入性成熟,这些结果为大鼠性发育的相关研究提供重要的参考数据。2.达那唑诱导的大鼠真性性早熟模型的建立选用4～7日龄雌仔鼠,随机分为正常对照组、溶剂对照组和模型组(n=8)。模型组于分组次日注射25μl含300μg达那唑的乙二醇/乙醇溶液;溶剂对照组注射25μl乙二醇/乙醇溶剂。观察并记录各组大鼠的阴门开口和进入第一次发情前期日龄,检测各组大鼠在15、25、32日龄时脏器指数和血清LH、FSH、E2浓度。结果表明一次性给予5～8日龄雌性大鼠皮下注射达那唑300μg,可使雌性大鼠阴门开启和建立动情周期的时间分别从正常状态下的34.45±2.30日龄和40.55±2.94日龄显著提前到21.75±2.12日龄和29.00±2.52日龄(P对照组(P组和正常对照组大鼠血清FSH、E2值在15、25和32日龄时变化趋势基本一致。提示达那唑可在正常SD大鼠体内成功复制儿童真性性早熟,因而可作为真性性早熟模型研究开发儿童性早熟治疗药物。3.抗早熟颗粒剂对达那唑诱导性早熟大鼠第二性征和生殖激素的影响选用4～7日龄的雌仔鼠由亲母自养。随机分成三组(n=8),分别为模型组、低药组和高药组。分组次日注射25μl达那唑溶液建模。在12日龄和15日龄起,高药组和低药组仔鼠开始每天以25μl/g的剂量分别灌胃0.75 g/ml和0.375 g/ml抗性早熟颗粒溶液。观察并记录各组大鼠的阴门开口和进入第一次发情前期日龄,检测各组大鼠在15、25、32日龄时血清LH、FSH、E2浓度。结果显示,高药组SD大鼠的阴门开启和建立性周期的时间为26.96±3.28日龄和34.27±4.81日龄,低药组分别为31.00±4.96日龄和37.13±5.77日龄,均显著晚于模型组SD大鼠的21.46±3.10日龄和29.50±2.00日龄(P组LH水平为36.82±2.50 IU/L,低药组为36.56±1.01 IU/L,结果显著低于模型组的41.48±2.05 IU/L(P组和模型组间相同日龄的FSH、E2水平也相似,组间比较无统计学差异。研究结果表明抗性早熟颗粒中药对性早熟SD大鼠模型LH有着重要的调节作用从而延缓第二性征发育。综上所述,本论文研究了正常SD大鼠性成熟过程中各主要脏器的脏器指数变化规律。当SD大鼠进入性成熟过程后,其性器官增长速度超过身体增长速度。血清LH、FSH、E2水平在不同日龄段的动态变化表明血清LH、E2浓度在32日龄时出现较为明显升高。不同日龄大鼠脏器指数的变化提示大鼠性器官在性发育早期得到机体的优先发育。在上述工作基础上,选用达那唑作为诱导剂成功复制了大鼠真性性早熟模型,并研究了抗早熟颗粒剂对达那唑诱导的性早熟模型大鼠第二性征和生殖激素的

关键词：大鼠达那唑性早熟模型组脏器指数垂体分泌溶剂对照组性腺轴疾病模型性发育

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青蒿琥酯抗血管生成作用及其抑制肿瘤细胞生长和浸润

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作者：王玮琴浙江大学

学位级别：硕士

血管生成（angiogenesis）是指机体内一种生理、病理现象。正常的血管生成被严格控制于某些短暂、特定的生理过程，如生殖过程、发育过程和伤口愈合过程;持续的血管生成是某些病理改变如肿瘤的特性。肿瘤是一种血管生成依赖性疾病，原... 详细信息

血管生成（angiogenesis）是指机体内一种生理、病理现象。正常的血管生成被严格控制于某些短暂、特定的生理过程，如生殖过程、发育过程和伤口愈合过程;持续的血管生成是某些病理改变如肿瘤的特性。肿瘤是一种血管生成依赖性疾病，原发性肿瘤的生长、侵袭和转移都需要新生血管的生成。早期研究表明，肿瘤的生长有两个明显不同的阶段，即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段。无血管的肿瘤通过组织间液获取从毛细血管渗透的营养物质，细胞增殖缓慢，原发肿瘤的体积不会超过1～2mm，这种状态称血管前期;血管化的浸润生长期是一个多步骤多分子参与的癌细胞与宿主细胞间相互作用的复杂连续过程，包括原发瘤增殖、肿瘤新生血管生长;侵袭基底膜，在循环系统形成瘤栓并转移到靶器官，肿瘤血管形成，转移癌灶增殖。近年研究表明，肿瘤侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因，大量实验证明，多种肿瘤包括实体瘤和血液肿瘤的生成、转移、复发和预后均与肿瘤血管生成密切相关，因此，以肿瘤血管生成为靶点，开发血管生成抑制剂在抗肿瘤研究中是一个新的十分活跃的研究领域。青蒿琥酯（Artesunate，Art）是我国科学家从菊科植物黄花蒿（Artemisiaannua L.）中提取的具有过氧桥结构的倍半内酯类抗疟药，在临床上对抢救和治疗脑型疟和恶性疟等疗效显著。鉴于其化学结构中含有过氧桥，近年来有不少关于青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡的报道，认为该药在组织有可能释放氧的机制。但有关青蒿琥酯抑制血管生成而抑制肿瘤作用仅见于本课题组的报道。本文在前期浙江大学硕士论文工作基础上，采用大鼠假孕模型，检测青篙唬酷对蜕膜瘤和骨髓微血管生成和VEGF因子表达的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜模型，检测青篙唬醋对鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的影响，并比较青篙唬酷对生理性血管生成与肿瘤新生血管生成的敏感性;同时采用动脉环无血清培养观察青篙唬酷对新生血管生长、迁移、发育过程的干扰作用。从不同角度验证青篙玻醋对血管生成及肿瘤血管新生的抑制效应，为进一步研究青篙墟醋的抗新生血管生成作用以及抑制肿瘤细胞生长和浸润的作用机制提供导向性实验资料。1、青高玻酣对假孕大鼠蜕膜瘤和骨做血管生成的影响.1对假孕大鼠蜕膜瘤和骨髓的血管密度的影响在假孕大鼠蜕膜瘤实验中，青篙墟醋高剂量组（80mg/kg.d）、中剂量组（40mg/kg.d）和低剂量组（ZOmg/kg.d）皮下注射给药5天后，蜕膜瘤和骨髓的血管密度分别为5.2士3.8，3.4士2.1;10.4士4.3，5.6士2.5;16.8士3.3，8.6士2.1。溶剂对照组分别为15.4士3.8，10.0士2.2，高中剂量组血管计数均明显少于溶剂对照组（P组与溶剂对照组相似（P>0.05）。.2对假孕大鼠蜕膜瘤和骨髓耗GF表达的影响用药组与溶剂对照组VEGF的表达如Figl，FigZ。高剂量组（80mg/kg.d）、中剂量组（40mg/kg.d）、和低剂量组（20mg/kg.d）在蜕膜瘤和骨髓中的vEGF免疫组化染色阳性率与对照组相比呈显著性差异（P溶剂对照组存活率为100%，阳性溶剂对照组（氢化可的松）存活率为93.5%。当浓度>30 pg/胚时，存活率下降。高剂量组与溶剂对照组相比，呈显著性差异（P组与阳性对照组间无差异（P>0 .05）。2.2在鸡胚绒毛尿囊膜对肿瘤细胞诱导血管生成的影响对鸡胚绒毛尿囊膜给药48h后，不同剂量（60 pg/胚、30 pg/胚、1 5 pg/胚、7.5 pg/胚）青篙唬酷的血管数分别为3.8士1.6、9.7士2.7、27.1士8.5、38.7士8.2;溶剂对照组为40.6士2.3

关键词：肿瘤血管生成青蒿琥酯鸡胚绒毛尿囊膜抗血管生成作用溶剂对照组蜕膜瘤青篙唬酷血管网细胞生长主动脉环

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辽东本草牌参灵片毒性实验研究

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人参研究 2016年第3期28卷 10-18页

作者：曾祥云曹志强仇仁春辽宁祥云药业桓仁117200 吉林人参研究院通化134001

依据卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》,辽宁祥云药业研制的＂辽东本草牌参灵片＂在辽宁省疾病预防控制中心进行了急性毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames）、骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、30天... 详细信息

依据卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》,辽宁祥云药业研制的＂辽东本草牌参灵片＂在辽宁省疾病预防控制中心进行了急性毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames）、骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、30天喂养试验。

关键词：遗传毒性试验最大耐受剂量喂养试验小鼠骨髓保健食品检验评价技术规范大鼠 Ames 溶剂对照组血液生化学

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人参片毒性实验研究

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人参研究 2016年第1期28卷 9-18页

作者：曾祥云曹志强仇仁春辽宁祥云药业桓仁117200 吉林人参研究院通化134001

依据卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》,辽宁祥云药业研制的人参片在辽宁省疾病预防控制中心进行了急性毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames）、骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、30天喂养试验。

关键词：遗传毒性试验最大耐受剂量鼠伤寒沙门氏菌喂养试验大鼠小鼠骨髓保健食品检验评价技术规范溶剂对照组 Ames

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辽东本草牌人参片增强免疫力功能实验研究

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人参研究 2015年第4期27卷 25-30页

作者：曾祥云曹志强仇仁春辽宁祥云药业桓仁117200 吉林人参研究院通化134001

依据卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》,辽宁祥云药业研制的＂辽东本草牌人参片＂在辽宁省疾病预防控制中心进行了增强免疫力功能实验。结果表明：送检样品对实验动物体重、体重增重、胸腺重/体重比值、脾重/体重比值无明... 详细信息

依据卫生部2003年版《保健食品检验与评价技术规范》,辽宁祥云药业研制的＂辽东本草牌人参片＂在辽宁省疾病预防控制中心进行了增强免疫力功能实验。结果表明：送检样品对实验动物体重、体重增重、胸腺重/体重比值、脾重/体重比值无明显影响。各实验组均能促进二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应形成,各实验组均未能增强Con A诱导小鼠脾淋巴细胞增殖能力.