达那唑诱导雌性大鼠性早熟模型的建立及其评估

作     者：戴方伟 

作者单位：浙江大学 

学位级别：硕士

导师姓名：方维焕;萨晓婴

授予年度：2009年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：大鼠 达那唑 性早熟 模型组 脏器指数 垂体分泌 溶剂对照组 性腺轴 疾病模型 性发育 

摘      要：儿童性早熟是一种儿童生长发育异常的疾病,该病已成为最常见的小儿内分泌疾病之一。下丘脑-垂体-性腺轴功能的提前激活导致了真性性早熟的发生。目前,大鼠已经成为性发育研究的主要实验动物,大量治疗儿童性早熟药物的研究开发均通过实验动物复制儿童性早熟模型进行,因此掌握性发育疾病模型的背景信息显得尤为重要。然而,到目前为止,国内外几乎没有相关资料可查。本论文首先分析正常雌性SD大鼠性发育早期不同日龄的各项性生理指标和血清性激素水平,以收集大鼠性发育的相关参考数据。在此基础上,我们选用达那唑诱导雌性大鼠真性性早熟模型,检验该模型复制儿童性早熟的各项性生理发育指标,并研究抗早熟颗粒剂对达那唑诱导的性早熟模型大鼠第二性征和生殖激素的影响,初步评估达那唑诱导雌性大鼠真性性早熟模型的应用价值。 ***雌性大鼠性发育早期性器官等脏器和性激素的动态变化 从生产群中取出60窝密度状态一致的SD大鼠,随机选取雌性大鼠,检测15、25、32、40日龄(n=30)时大鼠体重、主要脏器指数、子宫和卵巢组织结构特点,并测定15、25、32、40、60日龄大鼠血清LH、FSH、E2水平。结果显示大鼠卵巢、子宫的增长速度大于体重的增长,而其他脏器增速大都小于体重的增长,提示大鼠性器官在性发育早期得到机体的优先发育。研究记录了血清LH、FSH、E2水平在不同日龄段的变化规律,表明血清LH、E2浓度在32日龄时出现较为明显升高,提示性腺轴功能已经激活。60日龄大鼠血清性激素水平的波动类似于动情周期的规律性变化,推测大鼠在60日龄前即已进入性成熟,这些结果为大鼠性发育的相关研究提供重要的参考数据。 2.达那唑诱导的大鼠真性性早熟模型的建立 选用4～7日龄雌仔鼠,随机分为正常对照组、溶剂对照组和模型组(n=8)。模型组于分组次日注射25μl含300μg达那唑的乙二醇/乙醇溶液;溶剂对照组注射25μl乙二醇/乙醇溶剂。观察并记录各组大鼠的阴门开口和进入第一次发情前期日龄,检测各组大鼠在15、25、32日龄时脏器指数和血清LH、FSH、E2浓度。结果表明一次性给予5～8日龄雌性大鼠皮下注射达那唑300μg,可使雌性大鼠阴门开启和建立动情周期的时间分别从正常状态下的34.45±2.30日龄和40.55±2.94日龄显著提前到21.75±2.12日龄和29.00±2.52日龄(P0.05)。结果显示,达那唑对子宫、卵巢等各种脏器的脏器指数未见有明显作用。达那唑注射大鼠15、25日龄时血清LH水平明显高于正常对照组(P0.05),提示垂体分泌LH功能提前激活,模型组和正常对照组大鼠血清FSH、E2值在15、25和32日龄时变化趋势基本一致。提示达那唑可在正常SD大鼠体内成功复制儿童真性性早熟,因而可作为真性性早熟模型研究开发儿童性早熟治疗药物。 3.抗早熟颗粒剂对达那唑诱导性早熟大鼠第二性征和生殖激素的影响 选用4～7日龄的雌仔鼠由亲母自养。随机分成三组(n=8),分别为模型组、低药组和高药组。分组次日注射25μl达那唑溶液建模。在12日龄和15日龄起,高药组和低药组仔鼠开始每天以25μl/g的剂量分别灌胃0.75 g/ml和0.375 g/ml抗性早熟颗粒溶液。观察并记录各组大鼠的阴门开口和进入第一次发情前期日龄,检测各组大鼠在15、25、32日龄时血清LH、FSH、E2浓度。结果显示,高药组SD大鼠的阴门开启和建立性周期的时间为26.96±3.28日龄和34.27±4.81日龄,低药组分别为31.00±4.96日龄和37.13±5.77日龄,均显著晚于模型组SD大鼠的21.46±3.10日龄和29.50±2.00日龄(P0.05)。在15日龄大鼠中,高药组LH水平为36.82±2.50 IU/L,低药组为36.56±1.01 IU/L,结果显著低于模型组的41.48±2.05 IU/L(P0.05),说明抗性早熟颗粒中药对达那唑诱导的性早熟模型大鼠血清LH的提前分泌具有显著的抑制作用。此外,由结果可知,药物组和模型组间相同日龄的FSH、E2水平也相似,组间比较无统计学差异。研究结果表明抗性早熟颗粒中药对性早熟SD大鼠模型LH有着重要的调节作用从而延缓第二性征发育。 综上所述,本论文研究了正常SD大鼠性成熟过程中各主要脏器的脏器指数变化规律。当SD大鼠进入性成熟过程后,其性器官增长速度超过身体增长速度。血清LH、FSH、E2水平在不同日龄段的动态变化表明血清LH、E2浓度在32日龄时出现较为明显升高。不同日龄大鼠脏器指数的变化提示大鼠性器官在性发育早期得到机体的优先发育。在上述工作基础上,选用达那唑作为诱导剂成功复制了大鼠真性性早熟模型,并研究了抗早熟颗粒剂对达那唑诱导的性早熟模型大鼠第二性征和生殖激素的