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温热化疗对大肠癌细胞的作用及其对肿瘤细胞内HSP70表达的影响

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温热化疗对大肠癌细胞的作用及其对肿瘤细胞内HSP70表达的影响

作者：王佳雷广西医科大学

学位级别：硕士

目的观察温热化疗对大肠癌细胞株(CT26)的最佳作用时间及温度,探讨温热化疗对大肠癌细胞的作用及其细胞内HSP70mRNA表达的变化。方法以BALB/C小鼠大肠癌细胞株CT26为研究对象,将对数生长期的CT26按6个时间点(即0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h... 详细信息

目的观察温热化疗对大肠癌细胞株(CT26)的最佳作用时间及温度,探讨温热化疗对大肠癌细胞的作用及其细胞内HSP70mRNA表达的变化。方法以BALB/C小鼠大肠癌细胞株CT26为研究对象,将对数生长期的CT26按6个时间点(即0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h和3h)分成六组,将六组细胞分别给予化疗、热疗和温热化疗处理,加热温度分别设置为42℃,43℃,44℃和45℃,另设一阴性对照组。(1)利用二甲基噻咪二苯四唑溴盐比色法(MTT法)检测肿瘤细胞的活性;(2)运用RT-PCR方法分析肿瘤细胞内HSP70mRNA的表达情况。结果从MTT水平上看,0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h和3h肿瘤的平均抑制率分别为,58.64±17.67%、63.76±18.19%、72.09±19.75%、74.47±19.77%、73.41±20.47%和73.85±21.09%。1.5h的平均抑制率明显高于0.5h与1h的平均抑制率58.64±17.67%(p=0.001)、63.76±18.19%(p=0.007),与2h、2.5h和3h相比无统计学差异(p＞0.05)。42℃,43℃,44℃和45℃四个温度作用下的平均抑制率为,57.24±19.57%、58.07±19.95%、82.62±13.22%和83.65±11.12%。44℃作用条件下的平均抑制率明显高于42℃和43℃时的平均抑制率57.24±19.57%(p=0.000)、58.07±19.95%(p=0.001),但与45℃时相比较无统计学意义(p＞0.05)。当加热温度达44℃,加热时间达1.5小时,温热化疗作用下的抑制率高达93.35%,明显高于同条件下的热疗或化疗作用下的抑制率74.9±14.45%(p＜0.01)、59.3±0.95%(p＜0.01)。从mRNA水平上看:阴性对照组的HSP70 mRNA只有少量表达;化疗下HSP70 mRNA表达较阴性对照组明显增强;热疗下HSP70mRNA随着温度的升高而呈现高表达;温热化疗下HSP70的mRNA表达随着温度的升高逐渐下降,尤其当温度达到44℃、45℃时下降更为明显。结论(1)温热化疗最佳作用时间为1.5h;(2)温热化疗最佳作用温度为44℃;(3)温热化疗较热疗或化疗更能够有效的抑制CT26肿瘤细胞的生长;(4)温热化疗能够显著的降低大肠癌细胞内HSP70mRNA的表达。

关键词：温热化疗大肠癌 HSP70 RT-PCR MTT

温热化疗对不同分化程度胃癌细胞株作用的实验研究

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温热化疗对不同分化程度胃癌细胞株作用的实验研究

作者：李正荣江西医学院

学位级别：硕士

目的：研究温热化疗对不同分化程度的胃癌细胞株的生长抑制作用和细胞形态的影响。为提高温热化疗的临床疗效提供理论依据。方法：以中分化胃癌细胞株SGC-7901和低分化胃癌细胞株BCG823为研究对象。在体外对不同分化程度的胃癌细胞株S... 详细信息

目的：研究温热化疗对不同分化程度的胃癌细胞株的生长抑制作用和细胞形态的影响。为提高温热化疗的临床疗效提供理论依据。方法：以中分化胃癌细胞株SGC-7901和低分化胃癌细胞株BCG823为研究对象。在体外对不同分化程度的胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823分别实施化疗和温热化疗。（1）应用MTT法比较两种治疗方法对同一胃癌细胞株的生长抑制作用，同时比较相同处理方法对不同分化程度胃癌细胞的生长抑制作用。（2）比较治疗方法对不同分化程度胃癌细胞在光学显微镜和电子显微镜下观察肿瘤细胞形态的变化。结果：（1）温热化疗对中分化胃癌细胞株SGC-7901的生长抑制作用大于低分化胃癌细胞株BGC-823。（2）光镜和电镜下肿瘤细胞内见空泡样改变，且SGC-7901比BGC-823空泡样改变更严重。结论：（1）温热化疗对胃癌细胞有明显的抑制作用明显强于单纯化疗。（2）温热化疗对不同分化程度的胃癌细胞株的作用是有差别的，温热化疗对中分化胃癌细胞的抑制作用要强于低分化腺癌.

关键词：温热化疗胃癌细胞株生长抑制凋亡

温热化疗下调EIF5A2因子改变胃癌细胞基因表达阻止胃癌侵袭转移

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温热化疗下调EIF5A2因子改变胃癌细胞基因表达阻止胃癌侵袭转移

作者：闫昭飞广州医科大学

学位级别：硕士

第一部分EIF5A2因子与胃癌细胞增殖及侵袭转移的相关性研究背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已发生腹膜侵袭转移,传统治疗效果很差[1-4]。真核细胞翻译起始因子5A2(Eukaryotic Initiation Factor5A2,EIF5A2)是一个... 详细信息

第一部分EIF5A2因子与胃癌细胞增殖及侵袭转移的相关性研究背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,多数患者确诊时已发生腹膜侵袭转移,传统治疗效果很差[1-4]。真核细胞翻译起始因子5A2(Eukaryotic Initiation Factor5A2,EIF5A2)是一个真核生物中高度保守的蛋白质[5-6],在结直肠癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中高表达,可通过上调增殖相关基因Cyclin D1、Cyclin D3的表达促进肿瘤细胞增殖;还可以通过上调上皮间质转化基因Vimentin、下调E-cadherin表达,上调侵袭转移相关基因MTA1、c-myc的表达,诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化,促进肿瘤细胞侵袭转移[7],但其与胃癌侵袭转移的相关性尚不清楚。本部分实验通过改变EIF5A2因子的基因表达研究其与胃癌增殖、侵袭转移的相关性。方法:将MKN28细胞(EIF5A2因子高表达)分为:(1)实验组,MKN28-siEIF5A2组,转染EIF5A2 siRNA,(2)对照组,MKN28-CTR组,转染空白siRNA。将MKN45细胞(EIF5A2因子低表达)分为:(1)实验组,MKN45-EIF5A2,转染EIF5A2高表达质粒(PIRES2-EGFP+EIF5A2),(2)对照组,MKN45-CTR,转染空白质粒(PIRES2-EGFP+)。CCK-8法检测胃癌细胞的增殖活性;Transwell及划痕实验检测胃癌细胞的侵袭、迁移能力;实时定量PCR(qRT-PCR)及Western Blot法检测EIF5A2因子及Cyclin D1、Cyclin D3、Vimentin、E-cadherin、MTA1、c-myc的表达情况。结果:与MKN28-CTR组相比,MKN28-siEIF5A2组细胞EIF5A2因子表达下调,增殖相关基因Cyclin D1、Cyclin D3表达下调,侵袭转移相关基因MTAl、c-myc下调,而上皮间质转化基因Vimentin表达下调、E-cadherin表达上调;胃癌细胞的增殖能力及侵袭、迁移能力明显减弱。与MKN45-CTR组相比,MKN45-EIF5A2组胃癌细胞EIF5A2因子表达上调,增殖相关基因Cyclin D1、Cyclin D3上调,侵袭转移基因MTAl、c-myc上调,上皮间质转化基因Vimentin表达上调、E-cadherin下调;胃癌细胞的增殖能力及侵袭、迁移能力相应增强。结论:EIF5A2因子在胃癌细胞中的表达程度与胃癌细胞的增殖能力、侵袭转移能力呈正相关;EIF5A2因子通过上调增殖、侵袭转移及上皮间质转化基因表达促进胃癌细胞增殖和侵袭转移。第二部分温热化疗对EIF5A2因子及增殖、侵袭转移基因表达的影响及其与胃癌侵袭转移的相关性背景:国外研究证实,热疗可抑制肿瘤细胞内EIF5A2因子表达,抑制肿瘤细胞的活性,诱导肿瘤细胞凋亡。本实验第一部分证实,EIF5A2因子可通过上调Cyclin Dl、Cyclin D3表达促进胃癌细胞增殖;通过上调侵袭转移基因MTA1、c-myc的表达,上调上皮间质转化基因Vmentin表达、下调E-cadherin表达促进胃癌细胞侵袭转移。腹腔热灌注化疗(Hyperthemic Intraperitoneal Chemotherapy,HIPEC)作为最常用温热化疗手段,对部分胃癌腹膜转移疗效较好[8-11]。但HIPEC是否通过下调EIF5A2因子从而抑制侵袭转移及上皮间质转化基因表达抑制胃癌细胞侵袭转移目前尚无此类文献报道。本部分实验将探讨温热化疗对EIF5A2因子及增殖、侵袭转移基因表达的影响,以及其与胃癌侵袭转移的相关性。方法:1.细胞实验:将MKN28、MKN45两种胃癌细胞株分别分为4组:(1)对照组,Mock组(2)热疗组,HT组(43℃),(3)化疗组,CT组(L-OHP),(4)温热化疗组,HT+CT组(43℃+L-OHP)。CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell及划痕实验检测胃癌细胞的侵袭及迁移能力;q RT-PCR及Western blot检测EIF5A2及Cyclin D1、Cyclin D3、Vimentin、E-cadherin、MTA1、c-myc基因的表达情况。2.动物模型实验:将MKN28、MKN45胃癌细胞注射至小鼠腹股沟皮下制备移植瘤动物模型,将成瘤的小鼠随机分为4组:(1)对照组,Mock组(2)热疗组,HT(43℃),(3)化疗组,CT组(L-OHP),(4)温热化疗组,HT+CT组(43℃+L-OHP)。制备肿瘤组织切片,HE染色观察各组肿瘤组织坏死情况;q RT-PCR、Western blot及免疫组化法检测EIF5A2因子及Cyclin D1、Cyclin D3、Vimentin、E-cadher

关键词：胃癌侵袭转移 EIF5A2因子基因表达胃癌侵袭转移温热化疗 EIF5A2因子基因表达

线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用

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上海交通大学学报（医学版） 2007年第5期27卷 528-532页

作者：汤睿朱正纲瞿颖蔡劬李建芳刘炳亚燕敏林言箴上海交通大学医学院瑞金医院外科上海消化外科研究所上海200025

目的探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用。方法应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组。Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线... 详细信息

目的探讨线粒体途径在温热化疗诱导胃癌细胞AGS凋亡中的作用。方法应用人胃癌细胞株AGS,根据不同实验处理分为常温对照(NT)、单纯温热(HT)、常温化疗(NTCT)和温热化疗(HTCT)四组。Western blotting法检测AGS细胞中Bax、Bcl-2蛋白及其线粒体胞质蛋白中细胞色素C的表达,实时PCR检测其Bax、Bcl-2的mRNA表达;分别测定各组AGS细胞Caspase3和Caspase9的酶活性变化。结果与NT、HT、NTCT组比较,HTCT组AGS细胞Bcl-2蛋白表达下调而Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2显著上升;线粒体胞质蛋白中细胞色素C表达增加;Caspase9和Caspase3的酶活性显著增高。结论HTCT可引起AGS细胞Bcl-2、Bax基因和蛋白表达水平发生改变,促使其细胞色素C由线粒体释放进入细胞质,从而诱导细胞凋亡。

关键词：胃癌温热化疗凋亡线粒体途径

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静脉常温化疗与温热化疗致静脉炎的临床观察

中国实验方剂学杂志 2009年第11期15卷 25-25,28页

作者：杨靖荆门市第二人民医院肿瘤放化疗一科

化疗是目前治疗恶性肿瘤的重要方法之一,其主要途径是静脉给药,但化疗药物容易引起化学性静脉炎,常影响治疗进程.为预防静脉炎的发生,保证顺利用药,我科于2007年10月至2008年4月采用静脉温热化疗.取得了较好的效果.

关键词：化疗致静脉炎温热化疗临床观察常温化学性静脉炎恶性肿瘤静脉给药化疗药物

BMP-2联合温热化疗对SW480中GDF15和TFF3表达的影响

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重庆医科大学学报 2012年第9期37卷 775-778页

作者：毕德利王亚旭舒宁波谢凯重庆医科大学附属第二医院胃肠外科重庆400010

目的:探讨骨形态发生蛋白-2(Bone morphogenetic protein-2,BMP-2)联合温热化疗对SW480中GDF15和TFF3表达的影响。方法:BMP-2作用于大肠癌SW480细胞系,置于43℃温热化疗30 min,培养6 h。(1)流式细胞法检测SW480细胞的凋亡;(2)Western blot法检测GDF15和TFF3蛋白表达情况;(3)RT-PCR半定量检测GDF15和TFF3的mRNA表达。结果:BMP-2联合43℃温热化疗后SW480细胞凋亡增加,GDF15和TFF3蛋白表达水平下降,GDF15和TFF3的mRNA表达亦下调。结论:BMP-2联合温热化疗通过抑制大肠癌SW480的GDF15和TFF3蛋白及其相关基因表达,增强抑制SW480的增殖及转移复发的作用;温热疗法联合化疗对GDF15和TFF3表达抑制有协同作用。

关键词：骨形态发生蛋白-2 温热化疗 GDF15 TFF3

5-Fu温热化疗对人胃癌细胞株SGC-7901的促细胞凋亡作用及凋亡相关基因表达的影响

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5-Fu温热化疗对人胃癌细胞株SGC-7901的促细胞凋亡作用及凋亡相关...

作者：徐鹏广州医学院

学位级别：硕士

胃癌是我国最常见、多发的腹腔恶性肿瘤,居恶性肿瘤死亡率的第二位,早期难以发现,多数病人在就诊时已为进展期,患者生活质量及预后很差。化疗在胃癌的治疗中占有重要地位,其中5-FU及其同类的化疗药物在胃癌的治疗上发挥着重要作用,是主... 详细信息

胃癌是我国最常见、多发的腹腔恶性肿瘤,居恶性肿瘤死亡率的第二位,早期难以发现,多数病人在就诊时已为进展期,患者生活质量及预后很差。化疗在胃癌的治疗中占有重要地位,其中5-FU及其同类的化疗药物在胃癌的治疗上发挥着重要作用,是主要的、有效的化疗药物,5-FU是剂量依赖性药物,剂量越大疗效越好,但是,总体疗效有限。随着肿瘤热生物学研究和技术的发展,热疗己成为继手术、化疗、放疗及免疫治疗之后的第五种恶性肿瘤治疗方法,但单独应用热疗,效果有限。近年来,腹腔内热灌注化疗在胃癌治疗中的应用越来越广泛,并取得了独特的临床疗效,研究表明,热疗与化疗具有抗肿瘤协同作用,但目前对发挥温热化疗最佳效果的温度尚不清楚,对温热化疗抗肿瘤协同作用的机制更缺乏了解。目的本实验旨在细胞水平上研究发挥温热化疗最佳效果的温度,在基因水平上探讨温热化疗抗肿瘤协同作用的机制,为临床合理联合应用热化疗提供实验依据。材料和方法应用细胞培养技术培养人胃癌SGC-7901细胞;显微镜观察温热化疗对细胞形态的影响;以FCM检测热疗、化疗、温热化疗对肿瘤细胞的促凋亡作用;以人细胞凋亡基因芯片筛选出温热化疗作用后差异表达显著的基因。结果 1、显微镜观察表明,单纯温热和温热化疗协同均有一定的促细胞凋亡作用,而热化疗组出现大量的凋亡细胞;2、5-FU对SGC-7901细胞的促凋亡作用,具有较强的温度依赖关系,随着温度的增加,细胞的促凋亡作用逐渐增强,其作用在43℃～45℃温度区间内随温度升高而加强,与单纯温热组和单纯化疗组相比,差异具有显著性(P温热联合化疗在41℃～45℃区间呈现协同作用;4、基因芯片检测发现,温热化疗作用后比较热疗和化疗有5个基因表达显著上调,包括:Fas-L、Bax、Caspase 3、Caspase 9、Apaf-1;2个基因下调,包括:Bcl-2、Bag-1。结论 1.温热可提高人胃癌SGC-7901细胞株的化疗敏感性,在40℃～43℃区间具有热化疗增敏作用,在较高的处理温度43℃～45℃区间具有明显的热化疗协同作用。 2.热疗和化疗发挥抗肿瘤协同作用的最佳温度为43℃。 3.温热化疗增敏可能通过上调Fas-L、Bax、Caspase 3、Caspase 9、Apaf-1,下调Bcl-2、Bag-1诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡,这可能是包括死亡受体途径和线粒体途径在内的多条通路共同作用的结果。

关键词：胃癌热疗温热化疗 5-氟尿嘧啶基因芯片

温热化疗持续泵入治疗肺腺癌致恶性胸腔积液40例临床护理

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齐鲁护理杂志 2009年第8期15卷 38-39页

作者：徐卉临沂市肿瘤医院山东临沂276001

目的:探讨温热化疗持续泵入治疗肺腺癌致恶性胸腔积液的护理方法。方法:将80例肺腺癌致恶性胸腔积液的患者随机分为治疗组和对照组各40例,治疗组采用胸腔温热持续泵入化疗,对照组采用常规胸腔化疗。结果:治疗组总有效率82.5%,治疗持续... 详细信息

目的:探讨温热化疗持续泵入治疗肺腺癌致恶性胸腔积液的护理方法。方法:将80例肺腺癌致恶性胸腔积液的患者随机分为治疗组和对照组各40例,治疗组采用胸腔温热持续泵入化疗,对照组采用常规胸腔化疗。结果:治疗组总有效率82.5%,治疗持续时间平均12 d,中位生存时间10.8个月;对照组总有效率60.0%,治疗持续时间平均19 d,中位生存时间6.6个月,两组比较有显著性差异(P温热化疗持续泵入患者的健康宣教,系统观察患者的全身状况,随时掌握药物的副反应,及时采取必要的护理措施是有效提高患者治疗质量的有力保证。

关键词：温热化疗持续泵入护理

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温热化疗持续泵入治疗肺腺癌胸水的临床观察

中国现代医生 2008年第8期46卷 89-90页

作者：石建华朱志真王晓燕王静陈维艳山东省临沂市肿瘤医院山东临沂276001

目的观察温热化疗持续泵入DDP治疗肺腺癌胸水的有效性及安全性,并与常规胸腔化疗法相比较,评价两组在总有效率、毒副反应及中位生存期等方面的差异。方法80例经组织学或细胞学确诊的肺腺癌胸水患者,随机分为两组,每组各40例。治疗组:B... 详细信息

目的观察温热化疗持续泵入DDP治疗肺腺癌胸水的有效性及安全性,并与常规胸腔化疗法相比较,评价两组在总有效率、毒副反应及中位生存期等方面的差异。方法80例经组织学或细胞学确诊的肺腺癌胸水患者,随机分为两组,每组各40例。治疗组:B超定位下选两个穿刺点,分别置入中心静脉导管,待放尽胸水后,用加热至41～43℃的生理盐水500mL+顺铂60mg行胸腔温热化疗,持续120min。对照组:B超定位下置入中心静脉导管,放尽胸水后,用顺铂60mg常规胸腔化疗。两组均每周重复1次,3次为1个疗程。结果治疗组总有效率82.5%,中位生存期为10.8个月;对照组总有效率60.0%,中位生存期为6.6个月。总有效率治疗组与对照组相比,统计学上有差异(P温热化疗持续泵入DDP治疗肺腺癌胸水,具有创伤小、操作简便、安全等优点,控制胸水效果明显,副作用小,可明显提高患者的生活质量。

关键词：胸腔化疗温热化疗持续泵入肺腺癌胸水