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新流腺三联灭活疫苗对禽流感病毒和禽腺病毒流行株攻毒的免疫保护试验

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动物医学进展 2024年第2期45卷 90-94页

作者：杨灵芝李本科朱杰李振清李桂芹山东博莱威生物技术研究所山东滨州256606 山东滨州沃华生物工程有限公司山东滨州256606 滨州市农业技术推广中心山东滨州256600 滨州职业学院山东滨州256603

为了验证鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗对H9亚型禽流感、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株的免疫保护效果,采用三联灭活疫苗免疫3周龄SPF鸡,免疫后21 d采血测定禽流感H9亚型HI抗体效价,同时分别用H9亚型禽流... 详细信息

为了验证鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗对H9亚型禽流感、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株的免疫保护效果,采用三联灭活疫苗免疫3周龄SPF鸡,免疫后21 d采血测定禽流感H9亚型HI抗体效价,同时分别用H9亚型禽流感病毒YT株、HD株、CX株和DL株以及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)QD株、NJ株、HA株和CZ株进行攻毒,观察疫苗对H9亚型禽流感及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株的免疫保护效果。结果显示,免疫组禽流感H9亚型HI抗体效价几何平均值为1∶676~1∶832,对照组试验鸡HI抗体均流行毒株感染具有良好的免疫保护效果。

关键词：鸡三联灭活疫苗流行毒株免疫保护

2019～2022年禽呼肠孤病毒流行毒株的分离及毒株致弱特性研究

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2019～2022年禽呼肠孤病毒流行毒株的分离及毒株致弱特性研究

作者：刘芮中国农业科学院

学位级别：硕士

禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)可在家禽中引起多种疾病,其中病毒性关节炎、生长迟缓和吸收不良综合征较为常见。近年来,我国养殖场肉鸡群中ARV的感染不断增加,为我国养鸡业带来严峻的挑战。目前,我国分离的ARV流行毒株较少,且流行... 详细信息

禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)可在家禽中引起多种疾病,其中病毒性关节炎、生长迟缓和吸收不良综合征较为常见。近年来,我国养殖场肉鸡群中ARV的感染不断增加,为我国养鸡业带来严峻的挑战。目前,我国分离的ARV流行毒株较少,且流行毒株的分子信息、遗传演化规律以及生物学特性等系统性的相关报道也较少。本研究对2019～2022年收集的我国11个省份627份疑似病毒性关节炎的样本进行检测,结果显示,阳性病例共122份,样品阳性率为19.46%,阳性样品大多来源于福建、山东、吉林等省份。鸡肝癌细胞系(Leghorn male hepatoma cells,LMH)可快速有效地分离ARV病毒,通过反转录-聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)鉴定、纯净性检测、间接免疫荧光试验和负染电镜观察,成功分离获得了31株纯净性良好的ARV流行毒株。ARV主要保护性抗原σC基因遗传演化分析表明,31株流行毒株分属于6个不同的基因型簇(Genotype Cluster,GC):GC1、GC1-sub、GC2、GC3、GC4和GC5。其中GC4型和GC5型流行毒株占比最高,其次是GC1-sub型和GC2型,占比最低的是GC1型和GC3型。σC基因同源性分析显示,这些流行毒株中除GC1型毒株外,其余基因型毒株的σC基因序列与经典疫苗株S1133核苷酸序列相似性仅为52.0%～76.5%。以上结果揭示了2019～2022年我国ARV流行毒株的遗传多样性,多基因型毒株共存为其流行特点。多株不同基因型流行毒株的获得丰富了我国ARV流行毒株库,为我国ARV遗传演化规律的探索提供了毒株来源。体外复制动力学研究表明,不同基因型ARV流行毒株在鸡胚成纤维细胞(Chicken Embryo Fibroblast,CEF)上增殖良好,且病毒拷贝数均在1×10拷贝/m L以上。致病性试验中,不同基因型ARV流行毒株均可感染雏鸡,但不同基因型流行毒株致病性不同,其中GC1型和GC4型流行毒株可100%致死雏鸡。现有商品化疫苗仅能够对GC1型流行毒株提供良好免疫保护,对其它基因型流行毒株均不能提供完全保护且不同基因型之间血清交叉中和能力较差。以上研究结果表明,近年来我国ARV流行毒株在发生不断变异,临床病毒性关节炎病的频发与ARV不同基因型流行毒株的不断涌现有关。除GC1型外,其他基因型流行毒株已获得逃逸商品疫苗有效免疫保护的能力,这对ARV的有效防控和疫苗研发提出迫切需求。分别选取ARV 4个基因型流行毒株(GC1-sub、GC2、GC4和GC5)在CEF细胞上进行连续传代致弱。在培育过程中发现,随着传代代次的增加,不同基因型流行毒株在细胞上的细胞病变(Cytopathic Effect,CPE)越来越明显,复制能力显著提高,病毒滴度达到10～10 TCID/100μL。基因组测序结果显示,在传代的过程中,σC基因核苷酸和氨基酸序列均发生了多位点突变。致病性试验与免疫保护试验结果显示,ARV GC1-sub型和GC4型F100代传代毒初步评价安全性与有效性良好,雏鸡接种后未发病,可对同基因型毒株提供100%免疫保护,可以诱导机体产生良好的免疫应答反应;而GC2型和GC5型F100代传代毒仍存在较强致病性。本研究结果为ARV弱毒疫苗株培育提供了实践经验,为研制针对我国当前ARV流行毒株安全有效的新型疫苗提供了理论基础。

关键词：禽呼肠孤病毒流行毒株分离与鉴定致弱毒株致弱特性

甘肃地区一株PCV-3流行毒株的全基因序列测定及遗传演化分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第13期 80-87,93页

作者：张辉马雪青袁红李勇生魏达礼卢曾军刘在新韩庆彦孙普甘肃省动物疫病预防控制中心兰州730046 中国农业科学院、兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/国家口蹄疫参考实验室兰州730046

为了了解甘肃地区猪圆环病毒(PCV)的基因特征,试验采用PCR方法和基因测序技术,对甘肃省2018—2022年期间发生流行性腹泻的死亡仔猪病料进行回顾性检测,并对获得的毒株进行全基因测序,同时与参考毒株序列进行基因特征分析。结果表明:试... 详细信息

为了了解甘肃地区猪圆环病毒(PCV)的基因特征,试验采用PCR方法和基因测序技术,对甘肃省2018—2022年期间发生流行性腹泻的死亡仔猪病料进行回顾性检测,并对获得的毒株进行全基因测序,同时与参考毒株序列进行基因特征分析。结果表明:试验成功获得一株PCV-3毒株,将其命名为GSJN/2/2018毒株,该毒株的全基因组序列长度为1 999 nt,在1 149 nt处缺失碱基G,与参考毒株全基因序列的核苷酸相似性为97.8%~99.8%;ORF1和ORF2基因与参考毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.8%~99.9%/97.0%~100%和96.4%~99.7%/94.4%~100%;基于全基因组序列、ORF1和ORF2基因序列分别构建的系统进化树均将GSJN/2/2018毒株划分为PCV-3a基因型;该毒株主要线性抗原表位和3个滚环复制基序FTINN、HLQG、YCKK没有发生变异。说明通过回顾性检测获得的甘肃地区流行较早的GSJN/2/2018毒株属于PCV-3a基因型,并发现了新的基因缺失,丰富了PCV-3的基因组信息。

关键词：猪圆环病毒3型流行毒株全基因组遗传变异基因缺失

猪场不同流行毒株对猪流行性腹泻免疫和驯化效果的影响

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猪场不同流行毒株对猪流行性腹泻免疫和驯化效果的影响

作者：李想山东农业大学

学位级别：硕士

猪病毒性腹泻在我国流行日趋严重,给养猪业带来巨大的经济损失。猪病毒性腹泻包括猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）、猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒病等,以PED的危害最为严重。PED是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic d... 详细信息

猪病毒性腹泻在我国流行日趋严重,给养猪业带来巨大的经济损失。猪病毒性腹泻包括猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）、猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒病等,以PED的危害最为严重。PED是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种以腹泻、呕吐、后期脱水以及死亡为典型症状的急性、高度传染性肠道疾病。各个生长阶段的猪均能感染PEDV,但感染后的临床症状不同。哺乳仔猪感染PEDV后死亡率可高达100%,成年猪感染PEDV后死亡率较低,感染后表现的临床症状较轻。PED的发病与猪只机体、饲养管理、免疫、生物安全以及新变异毒株的出现等诸多因素有关。一般而言,疫苗免疫能够有效提升猪群抗体水平。然而,PEDV是一种基因组较大的RNA病毒,很容易发生核酸变异且该病毒亚型较多,使猪流行性腹泻的疫苗免疫效果不理想。本研究通过对河北省某养殖公司不同区域的4个猪场进行采样,通过PCR技术检测病原,并通过基因测序,分析猪场流行性腹泻的流行毒株;评估免疫效果,并进一步进行强毒株驯化免疫试验,最终为猪场防控PED提供有效的防控方案,以降低该病的发生率,为养猪业防控PED提供技术指导。本研究通过采集河北省某养殖公司4个猪场的猪只粪便,进行PCR鉴定并对PEDV分离株基因序列进行测序分析。试验结果如下:A场阳性率为20.00%,基因测定结果与AJ1102同源性为99.1%,与NHTa-2020同源性为97.4%;B场阳性率为93.33%,基因测定结果与S-INDEL同源性为97.3-97.5%,与AJ1102同源性为95.2%-95.4%,与NHTa-2020同源性为95.8%-96.0%;C场阳性率为91.11%,基因测定结果与PLK分离株同源性为98.8%,与AJ1102同源性为97.4%;D场阳性率为62.22%,基因测定结果与NHTa-2020同源性为99.1%,与AJ1102同源性为96.5%。本研究的猪群每年进行3次PED普免,并于产前3周进行一次跟胎免疫。于4个猪场各随机选取30头头胎分娩母猪作为研究对象,采集分娩第7 d的母猪乳汁,进行乳汁中免疫球蛋白A（Immunoglobulin A,IgA）含量的检测。结果显示,4个猪场中A场的免疫效果最好,乳汁IgA抗体水平可达95.00%;B场、C场与D场免疫效果相对较差,乳汁中的IgA抗体水平分别为58.33%、35.00%与13.33%。经过强毒株驯化试验,评估驯化免疫效果。随机选择30头强毒驯化的母猪,在分娩后第3 d、7 d以及14 d的乳汁样品,合计90份。结果显示,经驯化后的母猪乳汁中IgA抗体水平显著升高,且产后14 d的乳汁中IgA抗体水平依旧较高;驯化2次的乳汁中IgA抗体水平最高;根据IgA抗体水平由高到低排序为:驯化2次＞驯化1次＞未驯化。综上所述,猪场不同流行毒株的基因序列分析结果显示:A场与AJ1102同源性为99.1%,B场与S-INDEL同源性为97.3%-97.5%,C场与PLK分离株同源性为98.8%,D场与NHTa-2020同源性为99.1%。母猪乳汁中IgA抗体水平监测结果显示,A场的免疫效果最优,表明选择与流行毒株一致的疫苗株,可取得较好的防控效果。同时,使用强毒株疫苗进行驯化免疫,可显著增强免疫效果。因此,猪场首先进行流行毒株测定,其次选择相近的疫苗毒株,同时结合强毒驯化,最后结合合理的免疫程序,才能更有效地防控PED。

关键词：猪流行性腹泻流行毒株免疫方案免疫驯化免疫效果

猪流行性腹泻病毒变异毒株的分离鉴定及遗传演化分析

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生物学杂志 2022年第3期39卷 12-17,35页

作者：辛忠昊郭效珍逯晓寒焦安琪刘丽萍于江黄兵孙淑红吴家强山东农业大学动物科技学院泰安271018 山东省农业科学院家禽研究所山东省家禽疫病诊断与免疫重点实验室济南250000 山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室济南250000

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性肠道传染病。为了解山东地区PEDV的遗传进化趋势,对2020—2021年收集的疑似猪流行性腹泻的临床病料进行RT-PCR检测。随后将处理好的病料上清液接种于Vero细胞进... 详细信息

猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性肠道传染病。为了解山东地区PEDV的遗传进化趋势,对2020—2021年收集的疑似猪流行性腹泻的临床病料进行RT-PCR检测。随后将处理好的病料上清液接种于Vero细胞进行PEDV病毒分离,并利用间接免疫荧光(IFA)进行验证,成功分离到一株PEDV毒株,命名为QH-202105。将分离株传代培养至第10代,提取RNA后进行扩增并全基因组测序,结合NCBI下载的参考序列对分离株的全基因组和S基因进行核苷酸同源性比对、系统发育树构建分析,结果显示,分离株与美国分离株USA/Colorado/2013核苷酸同源性最高,为99.1%,与CHM2013株同源性最低,为96.5%。经S基因氨基酸序列分析显示,分离株QH-202105在S基因的N端有60多处突变,两处氨基酸插入(包括第59~62位氨基酸的QGVN 4个氨基酸插入,第145位氨基酸N的插入)和两处氨基酸缺失(第115~118氨基酸的缺失,第167~168氨基酸的缺失)。进化树分析结果显示,分离毒株QH-202105为G2基因群,与CH/HNAY/2015和CH/ZJCX-1/2012亲缘关系最近,属同一进化分支。在此基础上,应用PROVEAN对QH-202105的S蛋白突变氨基酸进行功能预测,结果显示,在1361处(G→C)被判定为“Deleterious”,可以推测此处的突变对病毒的侵袭力可能存在间接影响。研究结果可为我国PEDV变异株的流行情况及防控提供参考。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行毒株分离鉴定遗传变异

PEDV流行毒株JS2013诱导Vero细胞凋亡

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南京农业大学学报 2021年第3期44卷 514-520页

作者：梁荣宋海鑫黄佳玲费荣梅张金秋南京农业大学动物医学院江苏南京210095 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所江苏南京210014 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

[目的]本试验旨在研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株JS2013诱导Vero细胞凋亡的相关机制。[方法]用添加5μg·mL^(-1)胰酶的Vero细胞成功扩增PEDV JS2013毒株后,采用倒置显微镜、间接免疫荧光、流式... 详细信息

[目的]本试验旨在研究猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株JS2013诱导Vero细胞凋亡的相关机制。[方法]用添加5μg·mL^(-1)胰酶的Vero细胞成功扩增PEDV JS2013毒株后,采用倒置显微镜、间接免疫荧光、流式细胞术、Hoechst染色、细胞活性计数(CCK-8)以及Western blot等方法,检测Vero细胞感染JS2013后产生的病变、凋亡细胞比例、细胞活性、凋亡相关蛋白的表达等。[结果]PEDV JS2013感染Vero细胞后6 h即有少量病毒进入细胞,24 h后出现典型合胞体病变,PEDV JS2013诱导Vero细胞凋亡呈剂量依赖性,并且显著抑制Vero细胞活性。Hoechst染色后可以观察到明显的凋亡小体。Western blot结果表明,感染PEDV JS201348 h后激活Caspase 8和Caspase 9,60 h左右激活Caspase 3。[结论]PEDV流行毒株JS2013可以诱导Vero细胞凋亡。

关键词：猪流行性腹泻病毒流行毒株细胞凋亡 Caspase

新冠KP.2变异株短期内引发新感染高峰可能性低 007

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新冠KP.2变异株短期内引发新感染高峰可能性低

新华每日电讯

作者：顾天成

新华社北京5月14日电（记者顾天成）14日，国家疾控局发布新冠病毒KP.2变异株健康科普问答。根据问答，专家研判认为，当前KP.2亚分支感染病例在我国本土病例中的占比极低，短期内成为我国优势流行株的可能性低，引发新一次感染高峰的... 详细信息

新华社北京5月14日电（记者顾天成）14日，国家疾控局发布新冠病毒KP.2变异株健康科普问答。根据问答，专家研判认为，当前KP.2亚分支感染病例在我国本土病例中的占比极低，短期内成为我国优势流行株的可能性低，引发新一次感染高峰的可能性低。 KP.2致病力有无变化？KP.2是新

关键词：变异株流行毒株

来源： cnki报纸评论

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C株猪伪狂犬病疫苗免疫效果评价

猪业科学 2024年第5期41卷 62-63页

作者：李勇汪志恒万春云于福来卢华韩志伟赖庆光陈文钦向金梅松滋市畜牧兽医服务中心湖北荆州434200 罗牛山畜牧股份有限公司海南海口570000 浙江美保龙生物技术有限公司浙江金华321000 湖北生物科技职业学院湖北武汉430000

越来越多的文献证实,国内流行的猪伪狂犬病毒株已经发生变异,其毒力、致病特点已经有了明显不同,因此很多人开始质疑经典毒株对新流行毒株的保护力。目前,国内很多疫苗厂家已经将猪伪狂犬病疫苗毒株更换为新的变异毒株,将其缺失致弱后... 详细信息

越来越多的文献证实,国内流行的猪伪狂犬病毒株已经发生变异,其毒力、致病特点已经有了明显不同,因此很多人开始质疑经典毒株对新流行毒株的保护力。目前,国内很多疫苗厂家已经将猪伪狂犬病疫苗毒株更换为新的变异毒株,将其缺失致弱后用作疫苗株,比较知名的如HB-2000株、C株等。猪伪狂犬病病毒C株的不同之处在于其是自然致弱的毒株,病毒培养效果更好,容易收获更高的毒价,但其确切的效果还需要逐步验证。

关键词：猪伪狂犬病病毒培养变异毒株疫苗毒株致弱 C株流行毒株致病特点

猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI缺失突变株的构建及生物学特性研究

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华南农业大学学报 2018年第2期39卷 9-15页

作者：潘慧李艳华向柯宇唐栋程珍珠罗永文琚春梅华南农业大学兽医学院/广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室广东广州510642

【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株。【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的gE/gI缺失重组转移质粒pMD-LA-RA及携带EGFP标记基因的重组转移质粒pMD-LA-EGFP-RA,将pMDLA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV... 详细信息

【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株。【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的gE/gI缺失重组转移质粒pMD-LA-RA及携带EGFP标记基因的重组转移质粒pMD-LA-EGFP-RA,将pMDLA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH进行同源重组,利用EGFP为筛选标记,获得携带EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–/EGFP^+,以此毒株与pMD-LA-RA进行第2次同源重组,筛选去除EGFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV AH gE~–/gI~–,并通过生长曲线、易感细胞连续传代和动物免疫评价其增殖能力、遗传稳定性及免疫原性。【结果】通过2次同源重组,结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,成功获得了PRV AH gE~–/gI~–,经PCR鉴定、荧光观察及测序鉴定,证实该毒株g E和g I基因被成功缺失,且不携带EGFP标记基因。生物学特性研究结果表明,该毒株增殖能力与亲本毒株相当,遗传稳定性及免疫原性良好。【结论】采用同源重组技术成功构建了免疫原性良好的猪伪狂犬病病毒流行毒株gE/gI基因缺失突变株,为研制针对流行毒株的基因缺失疫苗奠定了一定的基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒流行毒株基因缺失同源重组生物学特性