检索结果-南通市图书馆

作者：刘朋朋河北农业大学

学位级别：硕士

全世界流行着无数的A型流感病毒是导致哺乳动物，包括人类的主要感染性疾病。20世纪，全球爆发了3次新的病毒株引起的流感大流行，导致数以百万计的人类死亡，对全球人类健康和公共安全构成巨大威胁，包括1918/1919年的h1n1型西班牙流感... 详细信息

全世界流行着无数的A型流感病毒是导致哺乳动物，包括人类的主要感染性疾病。20世纪，全球爆发了3次新的病毒株引起的流感大流行，导致数以百万计的人类死亡，对全球人类健康和公共安全构成巨大威胁，包括1918/1919年的h1n1型西班牙流感，1957年的h2n2型亚洲流感以及1968年的h3n2型香港流感。1997年，中国香港暴发了第一次流感病毒由禽类直接向人类传播的病例，18人确诊感染，其中6人死亡。最近的研究表明A/Indonesia/5/2005avian A/h5n1流感病毒仅需要5个碱基的替换，而A/Vietnam/1203/2004A/h5n1流感病毒仅需要4个碱基替换就可具备在雪貂之间经呼吸道空气传播的能力，这项研究提示我们这两株流感病毒h5n1在动物之间，甚至人间经呼吸道空气传播的可能性，如果由于疏忽或故意散播将引起一场严重的流感大流行。致死性流感病毒感染介导的“细胞因子风暴”导致急性的肺组织损伤，甚至急性的呼吸窘迫综合症引起动物和人类高的致死率。hsp90抑制剂可以阻断和天然免疫系统激活相关的转录因子，抑制免疫系统的过度活化;此外还可体外抑制流感病毒的复制。在本研究中，我们利用10倍半数致死量的流感病毒h5n1感染C57BL/6小鼠，感染后2h给药格尔德霉素，奥司他韦或PBS。生存分析结果显示格尔德霉素治疗组(93.3%)与对照组（3%）及奥司他韦治疗组（53%）相比极显著(P流感病毒感染小鼠存活率及存活时间，且平均体重丢失也少于对照组(P<0.01)及奥司他韦治疗组(24.9%,0.01

关键词：格尔德霉素流感病毒h5n1 存活率肺损伤病毒负载量炎性反应

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h5n1亚型禽流感病毒RnA聚合酶PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶

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家畜生态学报 2012年第2期33卷 31-36页

作者：范克伟庞海陈吉龙黄志勇吴德峰福建农林大学生命科学学院福建福州350002 清华大学医学院北京100084 中国科学院微生物研究所北京100101 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

根据GenBank中h5n1亚型禽流感病毒RnA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增h5n1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P... 详细信息

根据GenBank中h5n1亚型禽流感病毒RnA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增h5n1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5mol/L IPTG,在37℃诱导表达4h,经SDS-PAGE和Western-blot检测,获得重组蛋白PB1_P表达。并经ni-nTA柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白,采用悬滴气相扩散法对纯化蛋白进行结晶。结果成功构建pET-28a/PB1_P重组质粒,SDS-PAGE结果显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,Western-blot证明表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,经蛋白纯化、初筛结晶,得到PB1_P重组蛋白初筛晶体,为深入研究流感病毒聚合酶的生物学功能、开发新型h5n1亚型禽流感病毒检测试剂盒奠定了良好的基础。

关键词：流感病毒h5n1 PB1_P 克隆表达纯化蛋白结晶

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格尔德霉素抑制高致病性禽流感病毒增殖及其所介导炎性反应研究

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生物化学与生物物理进展 2013年第11期40卷 1132-1139页

作者：胡奕刘朋朋张志明卢鹤真罗静王承民刘军须赵宝华何宏轩河北师范大学生命科学学院石家庄050016 中国科学院动物研究所、国家野生动物疫病研究中心北京100101 北京市野生动物救护中心北京100101 河北省实验动物中心、河北省实验动物重点实验室石家庄050017

对高致病性禽流感病毒感染最为有效的治疗应采用抗病毒和抗炎症的联合治疗.本试验用流感病毒h5n1感染不同细胞株(A549细胞和MDCK细胞),采用不同浓度格尔德霉素对病毒感染细胞培养物作用不同时长,检测流感病毒滴度;ELISA检测格尔德霉素... 详细信息

对高致病性禽流感病毒感染最为有效的治疗应采用抗病毒和抗炎症的联合治疗.本试验用流感病毒h5n1感染不同细胞株(A549细胞和MDCK细胞),采用不同浓度格尔德霉素对病毒感染细胞培养物作用不同时长,检测流感病毒滴度;ELISA检测格尔德霉素作用于流感病毒h5n1感染A549细胞12 h、24 h促炎性细胞因子IFn-α、TnF-α和IL-6水平.结果显示,流感病毒h5n1感染A549细胞和MDCK细胞,格尔德霉素极显著地抑制了流感病毒h5n1在细胞培养物的增殖(P病毒感染36 h和48 h,格尔德霉素并没有显著抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖(P>0.05).促炎性细胞因子分析结果显示,格尔德霉素在流感病毒感染A549细胞12 h和24 h均显著降低了促炎性细胞因子IFn-α、TnF-α和IL-6的分泌(P5).上述实验结果显示,格尔德霉素具有抑制流感病毒h5n1增殖及其所介导的炎性反应的双重效应,为格尔德霉素成为应对流感病毒流行的备选药物提供基础科学依据.

关键词：格尔德霉素流感病毒h5n1 抗病毒促炎性细胞因子

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一种真核表达的抗h5n1-M1入胞单分子抗体的生物活性评价

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1047-1053页

作者：孙赫王瑜蔄弘扬邱玥田园李泽鸿岳玉环中国农业科学院长春兽医研究所生物技术应用研究室吉林长春130122 吉林农业大学生命科学学院吉林长春130117

目的评价一种真核表达的抗h5n1-M1入胞单分子抗体(TAT-ScFv-mFc)的生物活性。方法采用Western blot法及局域表面等离子共振技术(localized surface plasmon resonance,LSPR)分别检测TAT-ScFv-mFc与h5n1-M1蛋白的免疫结合活性及亲和力;CCK-8法检测TAT-ScFv-mFc对流感病毒h1n1的抑制作用;免疫荧光法检测TAT-ScFv-mFc对MDCK细胞的穿膜能力。雌性BALB/c小鼠尾静脉注射TAT-ScFv-mFc,200μL/只,共30只,于注射后5、60、120、240及360 min,断尾采血,分离血清,ELISA法检测血清效价,根据Origin 2021软件绘制的半衰期曲线计算半衰期。结果TAT-ScFv-mFc与h5n1-M1蛋白可发生特异性结合,结合数率常数(Ka)达6.67×104[1/(M*s)]。经h1n1感染的MDCK细胞的存活率随着TAT-ScFv-mFc浓度增加而逐渐升高,且呈剂量依赖性,对h1n1的复制有明显抑制作用。TAT-ScFv-mFc可在短时间内穿过MDCK细胞膜,进入细胞内,结合病毒M1蛋白,从而抑制病毒的复制和组装。TAT-ScFv-mFc在小鼠体内的半衰期为212 min。结论TAT-ScFv-mFc具有与h5n1-M1良好的免疫结合活性及亲和力,可有效抑制h1n1的复制,对MDCK细胞膜有良好的穿透能力,且在小鼠体内半衰期较长,为h5n1感染的药物治疗、疫苗研究、预防治疗奠定了基础。

关键词：流感病毒h5n1 M1蛋白单分子抗体真核表达生物活性

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