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现代生物医学进展 2010年第6期10卷 1097-1099,1068页

作者：周艳春李明才牛青霞柳晓金谢燕飞汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所广东汕头514041

目的:观察流体力学注射白细胞介素35(IL-35)质粒对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠肝损伤的干预效果。方法:通过流体力学注射将pcDNA3.1-IL-35导入C57BL/6小鼠体内,对照组注射pcDNA3.1。24h后,以ConA(15mg/kg)尾静脉注射建立小鼠肝损伤模型,... 详细信息

目的:观察流体力学注射白细胞介素35(IL-35)质粒对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠肝损伤的干预效果。方法:通过流体力学注射将pcDNA3.1-IL-35导入C57BL/6小鼠体内,对照组注射pcDNA3.1。24h后,以ConA(15mg/kg)尾静脉注射建立小鼠肝损伤模型,检测血清ALT活性和肝组织病理变化。结果:流体力学注射pcDNA3.1-IL-3524h后,肝组织有IL-35mRNA和蛋白的表达。与对照组相比,pcDNA3.1-IL-35预处理组小鼠血清ALT水平明显降低,肝组织病理损伤明显减轻。结论:流体力学注射IL-35质粒对ConA诱导的小鼠肝损伤具有保护作用。

关键词：白细胞介素35 刀豆蛋白A 肝损伤流体力学注射

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IL-38在高脂饮食诱导小鼠肥胖中的作用及机制研究

IL-38在高脂饮食诱导小鼠肥胖中的作用及机制研究

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作者：孙俊宁波大学

学位级别：硕士

目的肥胖症是一种慢性疾病,容易引起脂肪肝、高血压、Ⅱ型糖尿病等疾病,并常常伴随着炎症反应的产生。白细胞介素(interleukin,IL)-38是IL-1家族的成员之一,目前研究发现IL-38在关节型银屑病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病中能够抑... 详细信息

目的肥胖症是一种慢性疾病,容易引起脂肪肝、高血压、Ⅱ型糖尿病等疾病,并常常伴随着炎症反应的产生。白细胞介素(interleukin,IL)-38是IL-1家族的成员之一,目前研究发现IL-38在关节型银屑病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病中能够抑制炎症细胞因子的表达。本研究拟克隆小鼠IL-38基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1-mIL-38,通过3T3-L1细胞和高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,从细胞和动物水平探讨IL-38对肥胖症的影响及作用机制。方法1.从脾脏中提取小鼠总RNA,RT-PCR技术扩增IL-38全长编码区片段,用限制性内切酶KpnⅠ和XbaⅠ将PCR产物和pcDNA3.1-IL-35载体双酶切,酶切产物用T4 DNA连接酶连接并转化到感受态细胞DH5α中,构建mIL-38的真核表达载体pcDNA3.1-mIL-38。2.高脂饲料喂养ICR小鼠构建高脂饮食诱导的肥胖小鼠模型,流体力学注射pcDNA3.1-mIL-38质粒,16周后将小鼠处死,收集小鼠组织样本。小鼠脂肪组织和肝脏中脂滴的大小和数量通过HE染色和油红O染色检测;进行腹腔注射糖耐量实验和胰岛素耐量实验检测小鼠葡萄糖耐量和胰岛素抵抗的变化;qRT-PCR检测脂肪组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、IL-6、IL-1β、CD68、F4/80、单核细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein,MCP)-1表达量的变化;血清中IL-6、IL-1β、MCP-1等含量的变化用ELISA检测。3.诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,在诱导培养基中加入重组IL-38蛋白。油红O染色检测细胞中脂滴形态和大小的变化;qRT-PCR检测细胞中GATA-3、GLUT4、PPARγ2、IL-6、IL-1β、MCP-1表达量的变化;细胞培养液中IL-6、IL-1β、MCP-1含量的变化用ELISA检测。结果1.提取小鼠总RNA,RT-PCR扩增出小鼠IL-38全长序列,成功构建真核表达载体pcDNA3.1-mIL-38。2.成功构建肥胖小鼠模型。肥胖模型组小鼠体重与对照组相比明显增加,IL-38处理后的实验组小鼠与对照组无明显区别;模型组小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素敏感性降低,实验组增加了葡萄糖耐受和胰岛素敏感;与模型组相比,IL-38组降低了脂肪组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、CD68、F4/80、MCP-1的表达和血清中IL-6、IL-1β、MCP-1的含量。3.诱导3T3-L1细胞分化时,IL-38干预后,细胞中脂滴明显减少;细胞中GATA-3、GLUT4和IL-1β的表达升高,IL-6、MCP-1的表达降低;培养液中IL-6、MCP-1、IL-1β的含量降低。结论成功构建了小鼠IL-38真核表达载体,利用流体力学注射使IL-38在小鼠体内过表达,通过高脂饮食诱导肥胖小鼠模型研究IL-38在肥胖症中的作用,发现IL-38能有效减缓高脂饮食诱导的肥胖,能抑制小鼠炎症细胞因子表达和增加其葡萄糖耐受和胰岛素敏感;用IL-38处理3T3-L1细胞,发现它能抑制3T3-L1细胞分化和炎症细胞因子表达。

关键词：白细胞介素-38 流体力学注射高脂饮食诱导肥胖 3T3-L1细胞分化

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不同转染方式对GFP表达质粒在小鼠肝脏的表达影响

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山东大学学报（医学版） 2010年第1期48卷 17-20页

作者：陈锋何生松吴梅梅邱荣元杨凯凯王鹏华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科武汉430022 华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科武汉430022

目的研究经流体力学注射、门静脉和腹腔常规注射3种不同途径注射GFP表达质粒后,目的基因在小鼠肝脏的表达情况及其转基因效率。方法将裸质粒或脂质体包裹的质粒DNA分别应用流体力学注射、门静脉及腹腔常规注射法注入同种异体小鼠体内,48... 详细信息

目的研究经流体力学注射、门静脉和腹腔常规注射3种不同途径注射GFP表达质粒后,目的基因在小鼠肝脏的表达情况及其转基因效率。方法将裸质粒或脂质体包裹的质粒DNA分别应用流体力学注射、门静脉及腹腔常规注射法注入同种异体小鼠体内,48h后分别取血和肝组织,通过荧光显微镜观察3种转染途径对质粒DNA在小鼠肝脏的表达影响。结果流体力学注射组及门静脉常规注射组均可见大量绿色荧光蛋白表达,两组的荧光表达量差异无统计学意义(P>0.05),腹腔注射组小鼠的肝脏仅见少量的绿色荧光表达,但3组内脂质体/质粒DNA复合物组绿色荧光表达量均明显高于裸质粒组(P流体力学注射及门静脉常规注射脂质体/质粒DNA复合物途径,目的基因均在小鼠肝脏高效表达,两种途径无明显差异,流体力学注射可广泛用于肝靶向性的活体基因转染。

关键词： GFP表达质粒流体力学注射门静脉基因疗法

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