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HIBD新生大鼠活性caspase-3表达的动态变化

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中国当代儿科杂志 2003年第4期5卷 331-334,F003页

作者：旷寿金黑明燕殷萍中南大学湘雅三医院儿科湖南长沙410013

目的　了解缺血缺氧性脑损伤 (HIBD)后 2 4h内脑组织活性caspase - 3表达的动态变化。方法　7d龄SD大鼠随机分为正常对照组和HIBD组 ,HIBD组分别观察到缺血缺氧后 3h ,6h ,12h ,2 4h。以免疫组化及WesternBlot方法观察各组活性caspase... 详细信息

目的　了解缺血缺氧性脑损伤 (HIBD)后 2 4h内脑组织活性caspase - 3表达的动态变化。方法　7d龄SD大鼠随机分为正常对照组和HIBD组 ,HIBD组分别观察到缺血缺氧后 3h ,6h ,12h ,2 4h。以免疫组化及WesternBlot方法观察各组活性caspase- 3的表达。结果　随时间推移缺血缺氧后 2 4h内活性caspase - 3阳性染色由细胞质性转向细胞核性 ,活性caspase- 3阳性染色细胞明显皱缩。HIBD组受损侧枕部皮质区活性Cas pase - 3阳性细胞数于缺血缺氧 3h增多 ,6h有所下降 ,12h再次增多 ,并于 2 4h达高峰 ,均高于正常对照组 (P 活性caspase- 3阳性细胞数则随时间延长而增多 ,并于 2 4h达高峰 ,均高于正常对照组 (P 3h开始损伤侧脑组织中出现caspase - 3表达 ,6h时表达减弱、12h再次增高。结论　以活性caspase - 3作为HIBD导致脑细胞凋亡的指标 ,可观察到HIBD后 2 4h内凋亡二次增多的动态变化现象 ,为掌握抗凋亡制剂治疗HIE的时机提供了一定的依据。

关键词： HIBD 新生大鼠缺血缺氧性脑损伤脑组织活性caspase-3

MicroRNA-155在肝细胞癌对索拉非尼抗药中的作用研究

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中国药理学通报 2017年第5期33卷 657-662页

作者：吕峰王伟艾麦提.牙森金鑫李德卫重庆医科大学附属第一医院肝胆外科重庆400016

目的探讨微小RNA155(microRNA-155,miR-155)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)对索拉非尼(sorafenib)抗药中的作用。方法将miR-155抑制慢病毒(miR-155 inhibitor)转染miR-155表达相对较高的SMMC-7721细胞,而miR-155过表达慢病毒(miR-155)转染miR-155表达相对较低的Hep G2细胞;用荧光定量PCR(qPCR)检测经慢病毒转染的SMMC-7721细胞及HepG2细胞miR-155表达量,以验证慢病毒转染效果;通过CCK-8法及流式细胞术检测各组细胞经索拉非尼作用后的存活率及凋亡情况;用Western blot检测凋亡相关蛋白活性caspase-3表达量,从而进一步探究各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,转染miR-155抑制慢病毒的SMMC-7721细胞表达miR-155明显下调(P活性caspase-3表达量明显上调(P<0.01);miR-155过表达慢病毒转染HepG2细胞后,则相反。结论 miR-155参与肝细胞癌对索拉非尼的抗药,有希望成为一个肝癌治疗的新靶标。

关键词：微小RNA155 肝细胞癌索拉非尼抗药慢病毒活性caspase-3

Accutase消化传代对人胚胎纹状体来源神经干细胞凋亡的影响

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中南大学学报（医学版） 2015年第5期40卷 471-478页

作者：李婷王小莉宋娟李晨张翠英赵杰王金胜长治医学院生理学教研室山西长治046000 中南大学湘雅医学院病理生理学系长沙410008 中南大学湘雅医院神经外科长沙410008 长治医学院病理学教研室山西长治046000

目的:观察人类胚胎纹状体来源神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经消化酶accutase消化传代后是否发生了大量细胞凋亡。方法:提取人13~18周自然流产胚胎脑组织纹状体的NSCs,体外形成神经球并培养至3~5代。经消化酶accutase消化后传代,... 详细信息

目的:观察人类胚胎纹状体来源神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经消化酶accutase消化传代后是否发生了大量细胞凋亡。方法:提取人13~18周自然流产胚胎脑组织纹状体的NSCs,体外形成神经球并培养至3~5代。经消化酶accutase消化后传代,运用活性caspase-3染色、TUNEL(Td T-mediated d UTP nick end labeling)染色等方法对多聚甲醛固定的NSCs进行凋亡检测,同时采用Annexin V和Hoechst33342/PI等联合染色方法对活细胞进行凋亡鉴定,以确定NSCs在体外传代后的凋亡情况。结果:在传代后检测的3个时间点(1,24,72 h)中TUNEL染色和活性caspase-3染色均高度重合。传代后1 h,TUNEL和活性caspase-3染色所检测到的凋亡率为20%~25%,传代后24 h增高为75%~80%(P<0.01),而传代后72 h,由于存活下来的细胞开始增殖,所以整体凋亡率降为60%~70%,明显低于24 h(P<0.01)。结论:由人类纹状体来源NSCs形成的神经球,经accutase消化传代后24 h内即发生大量细胞凋亡。对于体外培养的NSCs,抑制其凋亡可能是促使其自我更新和增殖,最终起到提高细胞扩增能力的有效手段。

关键词：神经干细胞神经球 accutase TUNEL 凋亡活性caspase-3

不同N-乙酰-5-羟色胺(NAS)给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的影响

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眼科新进展 2020年第5期40卷 415-419页

作者：徐宁殷慧文张宁刘建晓王晓莉赵岩松潍坊医学院眼科学教研室山东省潍坊市261053 潍坊医学院医学影像学系山东省潍坊市261053 潍坊医学院附属医院眼科山东省潍坊市261031

目的探讨腹腔与尾静脉注射N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)两种给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)组织病理学、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达及细胞凋亡的影... 详细信息

目的探讨腹腔与尾静脉注射N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)两种给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)组织病理学、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法健康无眼疾成年Sprague-Dawley雄性大鼠54只,采用随机数字表法分为正常对照组(n=6)、RIRI腹腔组(n=12)、RIRI静脉组(n=12)、NAS腹腔组(n=12)和NAS静脉组(n=12),后四组采用升高眼压法建立大鼠RIRI模型。NAS腹腔组、NAS静脉组于建模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射NAS(10 mg·kg^-1),RIRI腹腔组、RIRI静脉组于造模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射同等剂量的生理盐水。RIRI后24 h,采用免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜中活性caspase-3的表达,TUNEL染色检测各组视网膜细胞凋亡情况;RIRI后7 d,HE染色观察各组视网膜组织病理学变化。结果HE染色结果示,正常对照组大鼠视网膜各层细胞排列整齐、规则;RIRI后7 d,RIRI腹腔组与RIRI静脉组大鼠视网膜细胞排列稀疏、紊乱,形态不规则,视网膜内层厚度变薄;NAS腹腔组视网膜细胞形态较规则,排列较规整;NAS静脉组视网膜各层形态及细胞排列均趋于正常。NAS静脉组视网膜内层厚度(91.67±1.43)μm显著高于NAS腹腔组(87.80±1.33)μm、RIRI腹腔组(82.37±1.09)μm和RIRI静脉组(82.81±0.90)μm,差异均具有统计学意义(均为P34.42±87.17)个·mm^-2、RIRI腹腔组(390.72±72.12)个·mm^-2,差异均具有统计学意义(均为P活性caspase-3阳性细胞数(145.01±22.54)个·mm^-2少于NAS腹腔组(221.34±30.84)个·mm^-2,差异具有统计学意义(P活性caspase-3阳性细胞数均显著少于RIRI静脉组(380.54±41.25)个·mm^-2和RIRI腹腔组(387.79±26.72)个·mm^-2,差异均具有统计学意义(均为P3±128.40)个·mm^-2少于NAS腹腔组(1968.96±254.98)个·mm^-2,差异具有统计学意义(P3±177.96)个·mm^-2,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。结论腹腔及静脉注射NAS治疗均可减少视网膜细胞凋亡,从而减轻RIRI大鼠视网膜损伤,且静脉注射给药的疗效优于腹腔给药。

关键词： N-乙酰-5-羟色胺视网膜缺血-再灌注损伤活性caspase-3 细胞凋亡视网膜内层厚度

不同剂量N-乙酰-5-羟色胺(NAS)对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜细胞凋亡的影响

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眼科新进展 2019年第8期39卷 728-731,736页

作者：刘建晓殷慧文陈伟徐宁杨明王晓莉赵岩松潍坊医学院眼科教研室山东省潍坊市261053 潍坊医学院医学影像学系山东省潍坊市261053 潍坊医学院附属医院眼科山东省潍坊市261031

目的探讨不同剂量N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜细胞凋亡的影响。方法成年SD大鼠随机分为正常对照组、RIRI组和NAS组。采用高眼压法建立RIRI大... 详细信息

目的探讨不同剂量N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)对视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)大鼠视网膜细胞凋亡的影响。方法成年SD大鼠随机分为正常对照组、RIRI组和NAS组。采用高眼压法建立RIRI大鼠模型。NAS组按照给药剂量的不同分为NAS低剂量组(5 mg·kg-1)、NAS中剂量组(10 mg·kg-1)和NAS高剂量组(20 mg·kg-1),造模前后30 min腹腔注射NAS。HE染色法观察各组大鼠视网膜形态学的改变,免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中活性caspase-3的表达,TUNEL法检测各组视网膜细胞凋亡的变化。结果 HE染色结果显示,NAS中剂量组大鼠视网膜各层细胞排列最整齐,视网膜内层厚度[(53.24±1.68)μm]显著薄于RIRI组[(60.54±2.52)μm]及NAS低剂量组[(56.78±1.78)μm](均为P3.65±74.40)个·mm^-2]显著多于RIRI组[(719.89±83.67)个·mm^-2]及NAS低剂量组[(882.09±55.62)个·mm^-2](均为P活性caspase-3阳性细胞数RIRI组[(246.08±19.23)个·mm^-2]及NAS低、中、高剂量组[(196.95±19.83)个·mm^-2、(142.77±18.25)个·mm^-2、(133.10±15.19)个·mm^-2]均显著多于正常对照组[(95.37±10.93)个·mm^-2](均为P活性caspase-3阳性细胞数量显著少于RIRI组及NAS低剂量组(均为P3)个·mm^-2]及NAS低、中、高剂量组[(175.06±17.69)个·mm^-2、(108.85±13.41)个·mm^-2、(100.37±13.53)个·mm^-2]均多于正常对照组[(81.98±11.29)个·mm^-2](均为P<0.01);NAS中剂量组视网膜TUNEL阳性细胞数显著少于RIRI组及NAS低剂量组(均为P<0.01)。结论腹腔注射NAS治疗可减轻RIRI大鼠视网膜细胞凋亡,具有神经保护作用,中剂量NAS治疗方案最佳。

关键词： N-乙酰-5-羟色胺视网膜缺血-再灌注损伤活性caspase-3 视网膜细胞

孕期DEHP暴露对新生大鼠海马神经元凋亡的影响

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神经解剖学杂志 2019年第4期35卷 425-429页

作者：张云玲王晶西安市中心医院新生儿科

目的:探讨孕鼠DEHP暴露对新生小鼠海马神经元凋亡的影响。方法:SD雌性孕鼠24只,随机分为对照组(Control)、DEHP低剂量组(DEHP-L)、DEHP中剂量组(DEHP-M)和DEHP高剂量组(DEHP-H),通过灌胃方法给予孕鼠不同剂量DEHP进行染毒,通过测量新生... 详细信息

目的:探讨孕鼠DEHP暴露对新生小鼠海马神经元凋亡的影响。方法:SD雌性孕鼠24只,随机分为对照组(Control)、DEHP低剂量组(DEHP-L)、DEHP中剂量组(DEHP-M)和DEHP高剂量组(DEHP-H),通过灌胃方法给予孕鼠不同剂量DEHP进行染毒,通过测量新生大鼠的体长、尾长和体重,观察孕期DEHP暴露对新生大鼠发育的影响;通过尼氏(Nissl)染色观察仔鼠海马神经元形态和排列方式的变化,通过TUNEL检测新生大鼠海马部位细胞凋亡,通过Western Blot检测新生大鼠海马组织active caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:与对照组相比,DEHP暴露可导致新生大鼠发育迟缓,海马神经元数量稀少、结构排列紊乱;TUNEL染色检测显示DEHP可导致仔鼠海马细胞凋亡增多(Pcaspase-3和Bax表达增加,Bcl-2表达下降(P<0.05),Bax/Bcl-2比值随着DEHP浓度增加而增加。结论:孕期DEHP暴露会影响子代大鼠发育迟缓、海马细胞凋亡增加。

关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯海马凋亡活性caspase-3 新生大鼠

苦参碱联合5-FU诱导人胃癌细胞凋亡的机制

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上海第二医科大学学报 2005年第4期25卷 378-381页

作者：胡梅洁曾晖张曙张学军章永平乔敏敏付华吴云林上海第二医科大学瑞金医院消化内科上海200025

目的探讨苦参碱和5-氟尿嘧啶(5-FU)联用诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的机制。方法1.0mg/mL苦参碱联合20mg/L5FU作用于SGC7901细胞48h,RTPCR和免疫细胞化学检测bcl-2、bax、Fas、Fas-L的mRNA和蛋白表达;免疫细胞化学、酶联免疫吸附试验和We... 详细信息

目的探讨苦参碱和5-氟尿嘧啶(5-FU)联用诱导人胃癌细胞SGC7901凋亡的机制。方法1.0mg/mL苦参碱联合20mg/L5FU作用于SGC7901细胞48h,RTPCR和免疫细胞化学检测bcl-2、bax、Fas、Fas-L的mRNA和蛋白表达;免疫细胞化学、酶联免疫吸附试验和Westernblot检测活性caspase3的表达,并与空白对照组和单独苦参碱或5-FU用药组比较。结果联合用药组bcl2下调,bax、Fas上调,与空白对照组有显著差异(P0.05);联合用药组活性caspase-3表达显著增高,与各组比较均有显著差异(P活性caspase3的表达,从而协同诱导胃癌细胞SGC7901的凋亡。

关键词：苦参碱 5-氟尿嘧啶胃癌癌细胞凋亡活性caspase-3

两种不同褪黑素治疗途径对局灶性脑缺血大鼠行为学及组织病理学的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2018年第4期27卷 310-315页

作者：程丹丹陈岚芬陈伟李振李光祖王海宇王晓莉潍坊医学院医学影像学系潍坊261053

目的探讨腹腔与尾静脉注射褪黑素（melatonin，MT）两种治疗途径对局灶性脑缺血大鼠行为学、组织病理学及髓鞘碱性蛋白（MBP）、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）蛋白表达的影响。方法84只成年雄性Sprangue—Dawley大鼠随机... 详细信息

目的探讨腹腔与尾静脉注射褪黑素（melatonin，MT）两种治疗途径对局灶性脑缺血大鼠行为学、组织病理学及髓鞘碱性蛋白（MBP）、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）蛋白表达的影响。方法84只成年雄性Sprangue—Dawley大鼠随机数字表法分为正常对照组（CON组，n=12）、大脑中动脉栓塞组（MCAO组，n=24）、腹腔注射组（n=24）及静脉注射组（n=24）。缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）损伤后24h，Morris水迷宫测试行为学改变；IR后7d行MBP免疫组化法及HE染色法观察纹状体髓鞘的变化及海马CA1区组织病理学变化。IR后24h、72h、7d行免疫组化法观察海马CA1区活性caspase-3蛋白的变化。结果各时间点静脉注射组Morns水迷宫平均逃避潜伏期均短于腹腔注射组，且二者均低于MCAO组，静脉注射组目标象限时间百分比均高于腹腔注射组，且二者均显著高于MCAO组（均P〈O．01）；IR后7d，MCAO组细胞形态失常，排列稀疏、紊乱；静脉及腹腔组海马CA1区细胞损伤明显减轻；静脉注射组MBP平均吸光度（105．60±4．04）显著高于MCAO组（95．60±2．07）及腹腔注射组（98．00±4．18），差异具有统计学意义（均P〈0．01）。各个时间点静脉注射组活性caspase-3阳性细胞数[（116．93±12．58）个／mm2；（130．16±21．22）个／mm2、（88．25±7．80）个／mm2]均少于腹腔注射组[（156．64±32．54）个／mm2；（176．49±17．44）个／mm2、（127．96±16．73）个／mm2]，差异均具有统计学意义（均P〈0．05），IR后24h及72h，二者活性caspase-3阳性细胞数均显著少于MCAO组[（273．56±32．54）个／mm2；（288．63±35．17）个/mm2]（均P〈0．01）。结论腹腔及静脉MT治疗均能显著改善局灶性脑缺血大鼠行为学并减轻组织病理学损伤及纹状体白质损伤，减少海马CA1区细胞凋亡，静脉途径治疗效果优于腹腔途径。

关键词： Morris水迷宫脑缺血褪黑素活性caspase-3 髓鞘碱性蛋白大鼠

TGF-β1对结肠癌细胞株凋亡的影响及其机制初探

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TGF-β1对结肠癌细胞株凋亡的影响及其机制初探

作者：龙慧中南大学

学位级别：硕士

目的:(1)观察转化生长因子β1(TGF-β1)对结肠癌细胞株SW620、SW480、HT29、HCT116、LS174T细胞凋亡的影响;选用敏感细胞观察活性caspase-3是否参与了凋亡过程;(2)探讨活性caspase-3、P38信号通路在TGF-β1诱导结肠癌细胞凋亡过程中的作... 详细信息

目的:(1)观察转化生长因子β1(TGF-β1)对结肠癌细胞株SW620、SW480、HT29、HCT116、LS174T细胞凋亡的影响;选用敏感细胞观察活性caspase-3是否参与了凋亡过程;(2)探讨活性caspase-3、P38信号通路在TGF-β1诱导结肠癌细胞凋亡过程中的作用,揭示TGF-β1诱导结肠癌细胞凋亡的可能机制。方法:以结肠癌细胞株SW620、SW480、HT29、HCT116、LS174T为研究对象:(1)用流式细胞术检测10ng/ml TGF-β1作用48小时对这5株细胞凋亡率的影响;(2)根据细胞株对TGF-β1的不同敏感性选取SW620细胞株进行下一步实验,分别以不同浓度的TGF-β1(0、5、10、15ng/ml)刺激48h,用DAPI染色法观察在不同浓度的TGF-β1作用下细胞凋亡情况,并用Western blot检测活性caspase-3表达的变化情况;(3)选取TGF-β1的最大诱导凋亡浓度10ng/ml,用Western blot检测不同时间点(0、6、12、24、48h)活性caspase-3表达的变化情况,用流式细胞术观察SW620细胞在不同时间点的凋亡率;(4)将其分为空白组、加入TGF-β1(10ng/ml)组、以及用特异性抑制剂SB203580预处理组,用Western blot检测相同时间活性caspase-3表达的变化情况;以及SB203580预处理组在不同时间点细胞活性caspase-3表达的变化情况,并用caspase-3分光光度法检测caspase-3的活化程度;(5)用10ng/ml TGF-β1分别刺激SW620细胞不同时间(0,30,60,120min)后,Western blot检测p-p38MAPK表达水平的变化。结果:(1)SW620对TGF-β1相对敏感,且呈时间剂量依赖性,而SW480、HT29、HCT116、LS174T相对不敏感。(2)将SW620细胞分为3组(分别为空白组、10ng/mlTGF-β1组、SB203580+10ng/mlTGF-β1组)进行处理,结果显示SB203580预处理组的活性caspase-3表达水平明显降低,TGF-β1预处理组的凋亡率明显增加。(3)10ng/ml TGF-β1作用SW620细胞0,30,60,120min后,SW620细胞的p-p38MAPK蛋白的表达明显增高。结论:(1)不同结肠癌细胞株对TGF-β1诱导的细胞凋亡有不同的敏感性:SW620对TGF-β1相对敏感,而SW480、HT29、HCT116、LS174T相对不敏感。(2)外源性TGF-β1部分经过了P38通路诱导结肠癌SW620细胞株凋亡。

关键词： TGF-β1 活性caspase-3 P38 凋亡结肠癌信号转导通路