Accutase消化传代对人胚胎纹状体来源神经干细胞凋亡的影响

作     者：李婷 王小莉 宋娟 李晨 张翠英 赵杰 王金胜 LI Ting;WANG Xiaoli;SONG Juan;LI Chen;ZHANG Cuiying;ZHAO Jie;WANG Jinsheng

作者机构：长治医学院生理学教研室山西长治046000 中南大学湘雅医学院病理生理学系长沙410008 中南大学湘雅医院神经外科长沙410008 长治医学院病理学教研室山西长治046000 

出 版 物：《中南大学学报（医学版）》 (Journal of Central South University ：Medical Science)

年 卷 期：2015年第40卷第5期

页      面：471-478页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

基　　金：山西省中美国际合作项目(2013081054) 长治医学院创新团队项目(CX201408)~~ 

主　　题：神经干细胞 神经球 accutase TUNEL 凋亡 活性caspase-3 

摘      要：目的:观察人类胚胎纹状体来源神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经消化酶accutase消化传代后是否发生了大量细胞凋亡。方法:提取人13~18周自然流产胚胎脑组织纹状体的NSCs,体外形成神经球并培养至3~5代。经消化酶accutase消化后传代,运用活性caspase-3染色、TUNEL(Td T-mediated d UTP nick end labeling)染色等方法对多聚甲醛固定的NSCs进行凋亡检测,同时采用Annexin V和Hoechst33342/PI等联合染色方法对活细胞进行凋亡鉴定,以确定NSCs在体外传代后的凋亡情况。结果:在传代后检测的3个时间点(1,24,72 h)中TUNEL染色和活性caspase-3染色均高度重合。传代后1 h,TUNEL和活性caspase-3染色所检测到的凋亡率为20%~25%,传代后24 h增高为75%~80%(P0.01),而传代后72 h,由于存活下来的细胞开始增殖,所以整体凋亡率降为60%~70%,明显低于24 h(P0.01)。结论:由人类纹状体来源NSCs形成的神经球,经accutase消化传代后24 h内即发生大量细胞凋亡。对于体外培养的NSCs,抑制其凋亡可能是促使其自我更新和增殖,最终起到提高细胞扩增能力的有效手段。