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高温和H_2O_2诱导酵母细胞产生活性衍生物的研究

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微生物学通报 2004年第5期31卷 28-32页

作者：路福平杨华王玉杜连祥天津科技大学食品科学与生物工程学院天津300222

对高温和H2 O2 应激条件下产生活性酵母细胞衍生物 (LiveYeastCellDerivative ,简称LYCD)进行了研究。结果表明 :低剂量的预处理 ( 37℃和 0 2mmol LH2 O2 )能够增加细胞内谷胱甘肽 (GSH)含量 ,提高超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (... 详细信息

对高温和H2 O2 应激条件下产生活性酵母细胞衍生物 (LiveYeastCellDerivative ,简称LYCD)进行了研究。结果表明 :低剂量的预处理 ( 37℃和 0 2mmol LH2 O2 )能够增加细胞内谷胱甘肽 (GSH)含量 ,提高超氧化物歧化酶 (SOD)、过氧化氢酶 (CAT)活性。两种预处理均可以诱导对致死浓度H2 O2 的抗性。通过 37℃和 0 2mmol LH2 O2 处理酵母细胞后 ,提取LYCD并添加到酵母细胞培养液中 ,发现细胞在致死浓度H2 O2 作用下的存活率明显提高 ,说明温度和H2 O2 刺激酵母细胞形成的LYCD对细胞氧化具有抵抗作用。

关键词：活性酵母细胞衍生物氧化应激热应激抗氧化作用

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低温和氧化应激产生活酵母细胞衍生物的研究

生物技术 2005年第6期15卷 30-32页

作者：白东清王玉路福平杜连祥杨华天津科技大学生物工程学院市工业微生物重点实验室天津农学院农学系天津300384

对低温和H2O2应激条件下产生活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD)进行了研究。结果表明:低温预处理能够增加细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,降低MDA含量。低温预处理可以... 详细信息

对低温和H2O2应激条件下产生活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD)进行了研究。结果表明:低温预处理能够增加细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,降低MDA含量。低温预处理可以诱导对致死浓度H2O2的抗性。通过0-15℃低温和0.2mmol/L H2O2处理酵母细胞后,提取LYCD并添加到酵母细胞培养液中,发现细胞在致死浓度H2O2作用下的存活率明显提高,说明0-15℃低温和H2O2刺激酵母细胞形成的LYCD对细胞具有抗氧化作用。

关键词：活性酵母细胞衍生物低温应激氧化应激抗氧化作用

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酵母应激条件下产生抗氧化剂的研究

食品研究与开发 2005年第6期26卷 54-57页

作者：白东清郭梅王玉路福平杜连祥孙婷婷天津科技大学生物工程学院市工业微生物重点实验室天津300222 天津农学院水产科学系市水产生态及养殖重点实验室天津农学院食品科学系天津农学院农学系天津300384

本文对酿酒酵母在低温和H2O2两种应激条件下产生的LYCD进行了研究,主要探讨了其中抗氧化物质的变化情况。结果表明:低温预处理能够显著增加细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,提高SOD、CAT活性。低温预处理可以诱导对致死浓度H2O2的抗性。低温和H... 详细信息

本文对酿酒酵母在低温和H2O2两种应激条件下产生的LYCD进行了研究,主要探讨了其中抗氧化物质的变化情况。结果表明:低温预处理能够显著增加细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,提高SOD、CAT活性。低温预处理可以诱导对致死浓度H2O2的抗性。低温和H2O2刺激酵母细胞形成的LYCD对细胞具有抗氧化作用。

关键词：活性酵母细胞衍生物应激抗氧化剂

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茅台酒高温发酵对活性酵母衍生物产生的影响

茅台酒高温发酵对活性酵母衍生物产生的影响

作者：白爱琴贵州大学

学位级别：硕士

活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivagive,简称LYCD),是酵母细胞在人为控制的伤害条件下产生的具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质,有重要的医用和美容价值。本文对酵母细胞在高温刺激和酒精刺激条件下,产生的活性酵母细... 详细信息

活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivagive,简称LYCD),是酵母细胞在人为控制的伤害条件下产生的具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质,有重要的医用和美容价值。本文对酵母细胞在高温刺激和酒精刺激条件下,产生的活性酵母细胞衍生物进行了初步研究,确定了酵母细胞产生LYCD的最佳条件;并分别对酵母细胞在高温和酒精的刺激下的细胞变化做了显微镜观察。本文还对高温和酒精应激做了正交试验,优化了产生LYCD的条件,最后对LYCD中的活性成分用气相色谱和质谱联用(GC/MS)进行了成分分析。本文通过观察光学显微镜下的酵母细胞,发现细胞会随着温度的升高或者酒精浓度的增加,酵母细胞被更多的染成蓝色,这说明高温温度和酒精浓度超过一定的范围,对酵母细胞有毒害作用,从而引起细胞的早衰,死亡;并随着温度的和酒精浓度的升高,毒副作用加大。本文分别对高温和酒精刺激产生LYCD的最佳条件进行了优化,结果表明:酵母细胞在高温温度为48℃,作用时间为40min时产生的LYCD活性最强;在酒精应激条件下,产生最高活性LYCD的最佳条件为:酒精浓度为8%,作用时间为20min。同时也说明不同的刺激物对产生高活性的LYCD的最佳作用时间不完全相同。确定了高温和酒精共同作用酵母产生高活性LYCD的最佳条件为:作用温度46℃,酒精浓度为4%。共同作用时的最佳水平要比单因素的作用水平低,说明高温和酒精因素相互影响,加剧了对细胞的毒害作用。气相色谱质谱仪分析LYCD中的成分结果表明:LYCD中主要有烯烃类、杂环类、甾体类等化合物,若要检测出其具体的物质,还需进一步的研究。

关键词：活性酵母细胞衍生物高温应激酒精应激氧化应激酵母成分分析

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糠醛对酿酒酵母应激作用的初步分析

糠醛对酿酒酵母应激作用的初步分析

作者：黄强贵州大学

学位级别：硕士

本课题测定了不同白酒中的糠醛含量,证明了酱香型白酒中的糠醛含量远高于其它香型酒的糠醛含量。为了探明酱香型酒中糠醛含量显著的来源,本试验又从原料入手,分析不同轮次的发酵周期中酒醅的糠醛含量。实验结果显示,酱香型酒醅中的糠醛... 详细信息

本课题测定了不同白酒中的糠醛含量,证明了酱香型白酒中的糠醛含量远高于其它香型酒的糠醛含量。为了探明酱香型酒中糠醛含量显著的来源,本试验又从原料入手,分析不同轮次的发酵周期中酒醅的糠醛含量。实验结果显示,酱香型酒醅中的糠醛含量高于其它香型白酒酒醅中的糠醛含量。鉴于糠醛在酱香型白酒和酒醅中的显著性,我们接着分析了糠醛对酵母产LYCD(Live Yeast Cell Derivative,活性酵母细胞衍生物)的影响,通过单因素实验及完全实验,确定了产生高活性LYCD的最佳条件为:糠醛的浓度为0.30mL/L,作用时间为15min。提取了糠醛最佳应激条件下酵母细胞的总RNA,利用设计合成的引物对RNA进行RT-PCR扩增,最后通过琼脂糖凝胶电泳对HSP70基因在糠醛刺激前后表达情况进行半定量分析。结果显示,糠醛应激后较糠醛应激前,HSP70基因表达量明显较高,说明糠醛应激导致了HSP70基因表达量的增加。

关键词：糠醛酱香型白酒活性酵母细胞衍生物热应激蛋70

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酿酒酵母氧化应激反应活性衍生物的初步研究

酿酒酵母氧化应激反应活性衍生物的初步研究

作者：马超颖天津科技大学

学位级别：硕士

活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative，简称LYCD)是酵母细胞在人为控制的伤害条件下产生的具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质，有重要的医用和美容价值。本文对酿酒酵母氧化应激反应活性衍生物进行了初步研究，... 详细信息

活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative，简称LYCD)是酵母细胞在人为控制的伤害条件下产生的具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质，有重要的医用和美容价值。本文对酿酒酵母氧化应激反应活性衍生物进行了初步研究，确定了HO刺激酿酒酵母产生高活性LYCD的条件;对LYCD中两种重要的抗氧活性成分——还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)在氧化应激反应中的含量及活力的变化进行了研究，对LYCD中的应激蛋白进行了电泳分析。另外，本文还对酿酒酵母在紫外线照射条件下所产生的LYCD进行了初步的研究。本文通过对酵母细胞破壁方法的研究，确定了液氮法为酵母细胞的破壁方法，其破壁率可达80％左右。通过对瓦勃氏呼吸法和紫外分光光度法进行比较，确定了紫外分光光度法为检测LYCD活性的一种简便适宜的方法。通过对实验菌株的筛选，确定酿酒酵母TQ22015为制备LYCD的实验菌株。通过单因素实验及正交实验，确定了产生高活性LYCD的最佳条件为：HO的作用浓度为0.2mmol／L，作用时间为15min。对HO刺激所产生LYCD中GSH含量和SOD活力进行测定的结果表明：经HO刺激，酿酒酵母细胞中GSH含量和SOD活力均高于正常细胞中的水平;HO刺激15min，所产生LYCD中SOD的比活力最强;HO刺激30min，GSH的含量最高，说明不同的应激产物产生的最佳时间不完全相同。 SDS-PAGE凝胶电泳和二维凝胶电泳实验结果表明：在HO的作用下，酵母细胞发生应激反应，蛋白的表达发生了变化：合成了一些新的蛋白质，同时又有某些蛋白的合成受到了抑制。对紫外线照射或HO刺激引起的酵母细胞的应激反应的初步研究表明：尽管这两种应激反应在反应机理上可能存在着差异，但其产生的LYCD却具有相似的生物活性，并都能引起GSH含量和SOD活力的增高，说明这两种应激反应具有一定的相关性。

关键词：活性酵母细胞衍生物氧化应激二维凝胶电泳还原型谷胱甘肽超氧化物歧化酶

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茅台酒高温发酵工艺中酵母的应激机制研究

茅台酒高温发酵工艺中酵母的应激机制研究

作者：陆筑凤贵州大学

学位级别：硕士

酿酒酵母对高温发酵工艺有复杂的应激反应,能产生促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质,称为活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD),有重要的医用和美容价值。LYCD的主要活性成份包括大量的应激蛋白、多肽和氨基酸,... 详细信息

酿酒酵母对高温发酵工艺有复杂的应激反应,能产生促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质,称为活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD),有重要的医用和美容价值。LYCD的主要活性成份包括大量的应激蛋白、多肽和氨基酸,但各种成份的功能和应激机理尚不明确。分析LYCD中的主要应激蛋白及功能,有助于揭示茅台酒的高温发酵机理和酿造工艺条件的优化。论文建立了酵母细胞高温和酒精共同刺激的茅台酒高温发酵条件实验模型,确定高温和酒精刺激产生高活性LYCD的条件为温度46℃,酒精浓度为4%(v/v),作用时间20min;对LYCD中的应激蛋白进行了分离提取和纯化,制定了蛋白样本制备的方案。采用分级提取LYCD中蛋白的方法,先提取大部分可溶性蛋白,再逐级提取微溶和难溶蛋白,样本中加入不含蛋白酶的DNase/RNase除杂,使用试剂盒对蛋白精确定量,保证相同上样量,确保实验的可比较性;摸索了双向电泳分离蛋白的最佳方法和实验条件,实现了蛋白的分离。通过7cm胶条预实验确定了双向电泳选用pH3～10非线性胶条,能在pH5～7之间得到较高的分辨率,充分均布酵母蛋白。一向电泳在20℃被动水化8h和50V电压主动水化4h后,逐步升压最终在8000V电压下充分聚焦72000VHrs。二向SDS-PAGE时采用溴酚蓝琼脂糖凝胶显示电泳进度,电泳结束用银染方法使蛋白固定和显色,银染的蛋白上样量小灵敏度高,利于低丰度蛋白的检出。使用ImageMaster2D Platinum5.0二维凝胶电泳图象分析系统对蛋白胶图进行分析,获得综合三块平行胶的虚拟凝胶,比较分析了应激反应的差异蛋白,得出了10个含量差异3倍以上的蛋白点和13个有无差异点。最终选取14个蛋白差异点做质谱分析,软件搜索质谱结果获得蛋白点的详细信息,初步鉴定了8种蛋白,与应激反应密切相关的蛋白有乙醇脱氢酶,S-腺苷甲硫氨酸合成酶和细胞色素C过氧化物酶。其他5种蛋白与细胞周期或信号传导有关,分别是核糖体的组成蛋白、结构蛋白,烯醇酶,磷酸甘油酸变位酶和肌动蛋白。乙醇脱氢酶是酵母体内酒精的主要防御机制;细胞色素C过氧化物酶是催化以过氧化氢氧化还原型细胞色素c反应的过氧化物酶;S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)是一种利用甲硫氨酸和ATP合成SAM的酶,SAM是谷胱甘肽合成的前体;烯醇酶有热激蛋白的功能。实验表明茅台酒高温发酵工艺中酵母的应激反应机制是产生主要活性成份的机理之一,高温堆积发酵顶温控制在46～50℃具有很强的科学性。

关键词：活性酵母细胞衍生物应激反应应激蛋白双向电泳质谱分析

高渗诱导的LYCD对H_2O_2和紫外线氧化损伤酵母细胞的保护作用

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天津科技大学学报 2005年第4期20卷 10-13页

作者：王玉白东清路福平杜连祥天津科技大学生物工程学院

探讨了H2O2和紫外线诱导下,活性酵母细胞衍生物(LYCD)对酵母细胞氧化损伤的保护作用。在H2O2(10 mmol／L)和紫外线(20 W紫外灯下30 cm处照射60 s)氧化损伤酵母细胞模型中添加LYCD后,细胞存活率显著上升,且有剂量依赖性。LYCD提高了紫外... 详细信息

探讨了H2O2和紫外线诱导下,活性酵母细胞衍生物(LYCD)对酵母细胞氧化损伤的保护作用。在H2O2(10 mmol／L)和紫外线(20 W紫外灯下30 cm处照射60 s)氧化损伤酵母细胞模型中添加LYCD后,细胞存活率显著上升,且有剂量依赖性。LYCD提高了紫外线氧化损伤细胞上清液中谷胱甘肽(GSH)含量、超氧化物歧化酶(SOD)比活力和过氧化氢酶 (CAT)比活力,降低了丙二醛(MDA)水平。

关键词：活性酵母细胞衍生物 H2O2 紫外线抗氧化作用酵母细胞

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高温发酵工艺酵母应激机制的初步研究

酿酒科技 2010年第11期 25-27页

作者：陆筑凤郭坤亮王昌禄嘉兴学院生物与化学工程学院浙江嘉兴314001 中国贵州茅台酒厂有限责任公司贵州仁怀564501 天津科技大学食品工程与生物技术学院天津300222

为研究酱香型白酒中的有益微量成分及其产生机理,优化高温发酵工艺,采用双向电泳和质谱技术,对酵母高温发酵过程中应激反应产生的活性酵母细胞衍生物(LYCD)进行了蛋白质组水平的分析。结果表明,高温和酒精应激导致蛋白表达差异明显,对其... 详细信息

为研究酱香型白酒中的有益微量成分及其产生机理,优化高温发酵工艺,采用双向电泳和质谱技术,对酵母高温发酵过程中应激反应产生的活性酵母细胞衍生物(LYCD)进行了蛋白质组水平的分析。结果表明,高温和酒精应激导致蛋白表达差异明显,对其中8个差异点进行质谱鉴定,肽质指纹分析发现S-腺苷甲硫氨酸合成酶在应激反应中特有大量表达,细胞色素c过氧化物酶、肌动蛋白、乙醇脱氢酶、烯醇酶等表达量明显增加。说明高温发酵酵母可通过酶系防御体系和氨基酸生物合成等发挥应激保护作用。

关键词：微生物高温发酵活性酵母细胞衍生物双向电泳质谱蛋白质组