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河豚毒素原料药及有关物质含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测法的建立

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中华航海医学与高气压医学杂志 2023年第3期30卷 301-305页

作者：李园徐己人田雅婷冯旭陆峰储智勇上海海洋大学食品学院上海201306 江西中医药大学药学院南昌330004 海军军医大学上海200433 中洋生物科技(上海)股份有限公司上海200001

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)方法,测定河豚毒素(TTX)原料药及有关物质的含量。方法选用TSK Gel amide-80(150 mm×2 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-含5 mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸溶液(70∶30,V/V)为流动相,流速0.2 ml/min... 详细信息

目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)方法,测定河豚毒素(TTX)原料药及有关物质的含量。方法选用TSK Gel amide-80(150 mm×2 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-含5 mmol/L乙酸铵的0.1%甲酸溶液(70∶30,V/V)为流动相,流速0.2 ml/min,柱温40℃。ELSD漂移管温度105℃,雾化器温度80℃,气体流量1.8 L/min。结果TTX在10~100μg/ml浓度范围内,线性关系良好,相关系数R^(2)为0.9995,检测限(S/N=3)为5 ng,定量下限(S/N=10)为10 ng。准确度试验相对标准差为0.93%;日内/日间精密度试验相对标准差均2.0;耐用性试验相对标准差均<2%。结论本方法适用于TTX和有关物质的含量检测,可为TTX原料药质量控制及其制剂开发提供参考。

关键词：准确度试验相对标准差制剂开发耐用性试验原料药河豚毒素破坏试验雾化器

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河豚毒素DNA适配子核心区域的识别

食品科学 2017年第4期38卷 260-264页

作者：邵碧英陈文炳刘正才缪婷玉彭娟杨方福建出入境检验检疫局福建省检验检疫技术研究重点实验室福建福州350001

用DNA folding form在线软件分析河豚毒素DNA适配子A3、G10的二级结构,根据二级结构,分别合成适配子A3、G10的各4个区域的5’端地高辛标记的序列。用丙烯酸-环氧乙烷珠子固定河豚毒素,测定抗地高辛碱性磷酸酶的适宜稀释倍数,用地高辛-... 详细信息

用DNA folding form在线软件分析河豚毒素DNA适配子A3、G10的二级结构,根据二级结构,分别合成适配子A3、G10的各4个区域的5’端地高辛标记的序列。用丙烯酸-环氧乙烷珠子固定河豚毒素,测定抗地高辛碱性磷酸酶的适宜稀释倍数,用地高辛-抗地高辛碱性磷酸酶系统检测各区域与河豚毒素的亲和力,识别出适配子的核心区域。结果表明,抗地高辛碱性磷酸酶的适宜工作浓度为2×104倍稀释;合成的适配子A3的4个区域中,A3-2区域与河豚毒素的亲和力最强,即适配子A3的核心区域为A3-2区域,实际上含有47个核苷酸;合成的适配子G10的4个区域中,G10-4区域与河豚毒素的亲和力最强,即适配子G10的核心区域为G10-4区域,实际上含有56个核苷酸。

关键词：河豚毒素适配子核心区域亲和力

鼠李糖乳杆菌对河豚毒素的免疫活性消减作用方式

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食品科学 2021年第14期42卷 103-109页

作者：叶精勤肖叶阎俊许长华汪立平卢瑛上海海洋大学食品学院农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心上海201306

为探究鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)免疫活性的消减作用方式和可能作用位点,分别采用活化、热灭活和破碎的鼠李糖乳杆菌以及去除胞外多糖、原生质体、细胞壁和肽聚糖的分离样品,与TTX标准品在37... 详细信息

为探究鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)免疫活性的消减作用方式和可能作用位点,分别采用活化、热灭活和破碎的鼠李糖乳杆菌以及去除胞外多糖、原生质体、细胞壁和肽聚糖的分离样品,与TTX标准品在37℃孵育1 h,使用竞争性酶联免疫吸附法分析作用前后TTX的免疫活性变化。通过化学处理掩蔽鼠李糖乳杆菌表面的羧基和氨基,采用傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)分析菌体表面的化学键振动类型和官能团变化情况。结果发现,活化、热灭活和破碎后的鼠李糖乳杆菌均可消减TTX的免疫活性,因此TTX免疫活性的变化和鼠李糖乳杆菌的活性无关。各分离样品对TTX的消减作用表明肽聚糖成分对TTX免疫活性的消减率最高可达到47%。FTIR分析发现鼠李糖乳杆菌表面羧基掩蔽后可显著降低TTX免疫活性的消减率至18%,而掩蔽氨基则对作用前后的TTX消减率影响无显著差异(P>0.05)。实验表明,消减TTX免疫活性的原因可能为TTX与鼠李糖乳杆菌表面肽聚糖上的羧基结合。

关键词：河豚毒素鼠李糖乳杆菌消减作用免疫活性

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河豚毒素的药用研究进展

药学实践与服务 2023年第5期41卷 273-276,328页

作者：王琦樊莉卢光照张翮操雯鲁莹海军军医大学药学系药剂学教研室上海200433

河豚毒素(TTX)是在河豚鱼和其他海洋动物中发现的一种神经毒素。它是一种电压门控钠通道(VGSCs)阻滞剂,能够选择性地与VGSCs外前庭上的α-亚基结合,阻止钠离子进入通道,从而产生药理活性。作为典型的钠离子通道阻滞剂,TTX具有显著的镇... 详细信息

河豚毒素(TTX)是在河豚鱼和其他海洋动物中发现的一种神经毒素。它是一种电压门控钠通道(VGSCs)阻滞剂,能够选择性地与VGSCs外前庭上的α-亚基结合,阻止钠离子进入通道,从而产生药理活性。作为典型的钠离子通道阻滞剂,TTX具有显著的镇痛作用。TTX能够选择性地阻断Na+通道而不影响其他离子通道,减少了常用抗心律失常药物引起不良反应的概率,降低了用药风险。此外,TTX在戒毒等方面亦有显著作用。因此,TTX具有很大的成药潜力。本文对河豚毒素的结构与性质、作用机制、药理活性和在研制剂进行综述,为其成药性评价研究和在药学领域的应用提供概要性支撑。

关键词：河豚毒素神经毒素镇痛作用药理活性制剂

河豚毒素在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及相关代谢酶活性分析

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现代食品科技 2021年第6期37卷 129-135,265页

作者：卢义博曾军杰陈思王瑞瑞张小军浙江海洋大学水产学院浙江舟山316021 浙江省海洋水产研究所浙江舟山316021 浙江海洋大学食品与药学学院浙江舟山316021

为了研究河豚毒素(TTX)在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及其对肝脏代谢酶活性的影响,实验选择口服灌喂的给药方式,通过超高效液相色谱串联质谱法测定不同组织中TTX的浓度变化,同时测定肝脏代谢酶活力。结果如下,在灌喂TTX后的短期转移... 详细信息

为了研究河豚毒素(TTX)在暗纹东方鲀体内的转移分布规律及其对肝脏代谢酶活性的影响,实验选择口服灌喂的给药方式,通过超高效液相色谱串联质谱法测定不同组织中TTX的浓度变化,同时测定肝脏代谢酶活力。结果如下,在灌喂TTX后的短期转移分布期间,性腺中TTX的浓度从19.00 ng/g升至42.02 ng/g,蓄积率为121%。肝脏中TTX浓度呈波动性变化,在4 h时,TTX浓度最高为11.43 ng/g,在48 h时,TTX浓度最低为1.27 ng/mL。皮肤、肌肉、血液、肠道、鳃组织中TTX含量在2 h时最高,分别为7.43 ng/g、1.15 ng/g、11.44 ng/g、9.77 ng/g、31.75 ng/g。脾脏、肾脏、胆组织中TTX浓度分别在2 h、4 h、6 h时最高为5.05 ng/g、6.54 ng/g、9.06 ng/g。此外,肝脏代谢酶活力的检测结果显示,TTX显著提高了乳酸脱氢酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性(p<0.05),在前期对两种磷酸酶活性具有明显的抑制效应(p<0.05),而后恢复至正常水平。实验结果表明,TTX在暗纹东方鲀中的转移分布具有组织特异性,并且对肝脏中不同代谢酶活性具有促进和抑制作用。

关键词：暗纹东方鲀灌喂河豚毒素组织含量相对毒素量肝脏代谢酶活性

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河豚毒素研究综述

山东化工 2023年第14期52卷 112-115,118页

作者：王世光曾军杰浙江省海洋水产研究所浙江海洋大学海洋与渔业研究所浙江舟山316021

河豚毒素是自然界中所发现毒性最大的神经毒素之一,作为钠离子通道阻断剂主要麻痹肌肉与神经。鉴于对河豚毒素在医疗领域现有的认知,通过探讨河豚毒素的性质结构、原料来源、提取、分离及检测方法等方面的因素,旨在建立一种高效制备高... 详细信息

河豚毒素是自然界中所发现毒性最大的神经毒素之一,作为钠离子通道阻断剂主要麻痹肌肉与神经。鉴于对河豚毒素在医疗领域现有的认知,通过探讨河豚毒素的性质结构、原料来源、提取、分离及检测方法等方面的因素,旨在建立一种高效制备高纯河豚毒素的新工艺,从而加强高纯河豚毒素制品在局部麻醉、癌症晚期镇痛、戒毒等方面的应用。在解决毒性、注射有效剂量、安全剂量及给药方法等一系列难题上,高纯度河豚毒素有利于确保药品的稳定,提高药用的安全性。

关键词：河豚毒素结构提取分离检测应用

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河豚毒素缓释微球含量测定方法的建立

药学实践与服务 2023年第3期41卷 182-186页

作者：王琦卢光照李园樊莉张翮鲁莹海军军医大学药学系药剂学教研室上海200433

目的建立测定河豚毒素(TTX)缓释微球中的含量检测方法。方法采用HPLC法,色谱柱为Agilent Zorbax SB C 18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为5%乙腈-95%8 mmol/L庚烷磺酸钠溶液(0.005%TFA,pH4.0);流速1.0 ml/min;紫外检测波长200 nm;柱温30℃。结果该方法专属性好,TTX在1~20μg/ml浓度范围内线性良好,该方法日内精密度、日间精密度、稳定性、重复性均符合要求,加样回收率范围为98.0%~102.0%。结论本研究建立了适用于缓释微球中河豚毒素含量测定的HPLC方法,该方法准确可靠,专属性强,可以实现定量检测。

关键词：河豚毒素高效液相色谱缓释微球庚烷磺酸钠

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产河豚毒素菌株的筛选、鉴定及透析培养

应用海洋学学报 2022年

作者：张宏宇林涛武斌李增鹏郭文斌陈明谅自然资源部第三海洋研究所河北施坦纳生物科技有限公司

河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)在镇静、镇痛、麻醉、戒毒等神经性疾病治疗方面效果显著且无致瘾性，因此具有极好的应用前景，但由于其从河豚体内提取的成本过高，所以难以大量推广应用。越来越多的证据表明TTX来源于河豚体内共生的微生... 详细信息

河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)在镇静、镇痛、麻醉、戒毒等神经性疾病治疗方面效果显著且无致瘾性，因此具有极好的应用前景，但由于其从河豚体内提取的成本过高，所以难以大量推广应用。越来越多的证据表明TTX来源于河豚体内共生的微生物。我们从野生横纹东方鲀(Takifugu oblongus)肝脏中分离得到了一株产TTX较高的芽孢杆菌3G2(Bacillus sp. 3G2)，通过ELISA和胶体金的方法检测到其发酵液TTX含量为35 ng/mL。然后将该菌株接种于专用透析培养器中，不断流加新鲜培养基实现连续培养，同时实现简化分离工艺，对发酵液进行小鼠生物活性检测，河豚毒素试纸条检测，并通过河豚毒素抗体免疫共沉淀纯化得到TTX粗品后进行高效液相色谱鉴定均表明其含有河豚毒素且含量较高。本研究旨在筛选优质菌株以进一步证实河豚毒素外源性假说，并初步验证透析法生产河豚毒素的优越性，为后续商业应用提供实践性基础。

关键词：海洋生物学河豚毒素芽孢杆菌 ELISA检测透析培养 HPLC

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河豚毒素人工抗原的制备及其免疫原性鉴定

食品科技 2019年第3期44卷 313-317页

作者：刘敏慧刘新峰丁向彬李新张林林方淑兵郭宏天津农学院动物科学与动物医学学院天津300384 北京中检葆泰生物技术公司北京101111

目的:选择血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)分别作为载体蛋白与河豚毒素(TTX)进行偶联制备人工抗原,并对合成结果进行鉴定。方法:通过甲醛法将TTX分别与大分子载体蛋白,即血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)进行偶联。利用紫外扫描法、... 详细信息

目的:选择血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)分别作为载体蛋白与河豚毒素(TTX)进行偶联制备人工抗原,并对合成结果进行鉴定。方法:通过甲醛法将TTX分别与大分子载体蛋白,即血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)进行偶联。利用紫外扫描法、电泳法对偶联产物进行鉴定,并对6周龄Balb/c雌性小鼠免疫注射检测其免疫原性。结果:紫外扫描显示偶联抗原较载体蛋白有轻微的红移现象出现,且经过琼脂糖凝胶及SDS-PAGE 2种方法电泳检测后发现,载体蛋白较人工抗原之间迁移率均不相同;对免疫小鼠进行间接酶联免疫吸附试验(iELISA)及间接竞争酶联免疫吸附试验(icELISA)联用检测其多抗血清效价及特异性,经过共计6次免疫后的效价能达到1:40w,且能有效抑制TTX。结论:河豚毒素人工抗原制备成功且具备良好的免疫原性。

关键词：河豚毒素人工抗原载体蛋白抗体酶联免疫吸附试验