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神经干细胞移植治疗永久性脑缺血的实验研究

中华显微外科杂志 2003年第4期26卷 289-290页

作者：林小聪杨立业郑佳坤惠国桢郭礼和广东省潮州市中心医院神经外科 521021 苏州大学附属第一医院神经外科中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所

的　研究神经干细胞对永久性脑缺血的治疗作用。　方法　神经干细胞经BrdU标记后 ,立体定向移植到大鼠的脑缺血区域 ,移植后对大鼠的功能恢复进行评价 ,免疫组织化学方法染色检查存活的细胞。　结果　移植的神经干细胞在损伤的临近区域... 详细信息

的　研究神经干细胞对永久性脑缺血的治疗作用。　方法　神经干细胞经BrdU标记后 ,立体定向移植到大鼠的脑缺血区域 ,移植后对大鼠的功能恢复进行评价 ,免疫组织化学方法染色检查存活的细胞。　结果　移植的神经干细胞在损伤的临近区域存活 ,细胞可以向周围移行 ,移植细胞与宿主细胞有很好的相容性 ,损伤坏死区域没有移植细胞存活。Y迷宫三等分实验、抬高身体摇摆实验和一次性被动回避平台试验检查大鼠的学习、记忆功能 ,移植组与对照相比无明显改善。　结论　神经干细胞移植到永久性脑缺血的损伤临近区域 ,能够与宿主脑组织整合在一起 ,无细胞过度增生和胶质瘢痕形成。

关键词：神经干细胞移植治疗永久性脑缺血实验研究

藁本内酯对永久性脑缺血大鼠的保护作用及治疗时间窗的研究

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藁本内酯对永久性脑缺血大鼠的保护作用及治疗时间窗的研究

作者：彭海燕四川大学

学位级别：硕士

脑卒中是发病率、死亡率和致残率极高的一种疾病，严重危害人类健康，给社会带来沉重的经济负担。目前治疗卒中的手段包括手术治疗和药物治疗。对于脑梗死，目前已开展的有颅内外动脉搭桥术、大网膜颅内移植术、椎动脉减压术、动脉内膜... 详细信息

脑卒中是发病率、死亡率和致残率极高的一种疾病，严重危害人类健康，给社会带来沉重的经济负担。目前治疗卒中的手段包括手术治疗和药物治疗。对于脑梗死，目前已开展的有颅内外动脉搭桥术、大网膜颅内移植术、椎动脉减压术、动脉内膜切除术等重新建立缺血部位的血液循环;脑出血手术治疗的方法主要有开颅清除血肿和更为简单、安全的立体定位手术清除血肿。临床药物治疗脑缺血主要有恢复脑血流药物如抗凝血和抗血小板聚集药物，还有神经保护制剂。但是不管手术还是药物治疗效果都不是令人满意的。我们迫切需要新的有效的治疗脑卒中的药物来救治患者。当归是伞形科植物当归Angelica sinensis的干燥根;味甘、辛，性温;具有补血活血、调经止痛之功效。当归有效成分主要包括水溶性和脂溶性两部分，水溶性成分如阿魏酸和多糖等在临床上有比较广泛的应用，但是关于脂溶性成份的药理学活性报道相对较少。为此，我们从当归挥发油中萃取出其中的主要成分藁苯内酯(Z-Ligustilide)，以研究其对脑缺血的治疗作用。临床资料显示，短期内，缺血性脑卒中只有不到50％的病患会出现自发的再灌，其他大部分的病人则不会。过去我课题组的研究发现藁苯内酯在再灌局灶性脑缺血大鼠模型和再灌全脑缺血小鼠模型中有显著的保护作用。为了更好的模拟临床病患实际情况，在以前实验的基础上，本课题进一步研究藁苯内酯是否在永久性脑缺血大鼠(Permanent Middle Cerebral Artery Occlusion，PMCAO)模型上同样有神经保护作用并对其治疗时间窗及其保护机制进行研究。本试验首先评价了藁苯内酯对永久性脑缺血大鼠是否有保护作用。在此实验中，建立线拴发大鼠PMCAO模型，SD大鼠随即分成治疗组和对照组，每组6—7只，分别于术后2h给予藁本内酯20mg／Kg，80mg／Kg或相应剂量的溶媒(0.3％吐温80)。24h后进行神经功能评分，经TTC染色法测定脑组织梗死体积和脑水肿，并在试验过程中监测各组大鼠肛温变化。我们发现当归挥发油藁本内酯对大鼠脑缺血有显著保护作用。藁本内酯能显著改善PMCAO大鼠神经功能;藁本内酯组脑水肿程度与模型组比较，脑水肿也得到明显减轻;藁本内酯组脑梗死体积与模型组相比较，脑梗死体积明显减少，差异有显著性。但是，我们数据显示藁苯内酯不能降低MCAO大鼠体温，故推测低温并不是藁苯内酯保护机制。然后本课题在PMCAO大鼠模型上进一步研究了藁苯内酯治疗时间窗的长短和对脑血流量的影响。在手术前15min，腹腔注射给予20mg／kg、10 mg／kg和5 mg／kg不同剂量藁苯内酯，发现各个剂量藁苯内酯虽然不能改善脑血流量(Cerebral Blood Flow,CBF)，但是20mg／kg和10mg／kg的藁苯内酯均能剂量依赖性的显著改善MCAO大鼠的神经症状和脑梗死百分比，有神经保护作用;之后我们又选取了手术后3h，手术后6h和手术后12h腹腔注射藁苯内酯(20mg／kg)，发现即使给药延迟到手术后3h和手术后6h，藁苯内酯依然表现出显著的神经保护作用。综上所述，本课题研究证明了在PMCAO大鼠模型中，藁苯内酯具有显著的神经保护作用，即使在发病后6h给药，藁苯内酯依然有良好的治疗效果，这一结果是令人兴奋的，为研制新的治疗脑缺血药物提供了重要的线索和实验依据。

关键词：永久性脑缺血藁苯内酯时间窗脑血流量神经保护

延迟性慢性CO2后处理对永久性脑缺血后神经功能恢复的促进作用及机制研究

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延迟性慢性CO2后处理对永久性脑缺血后神经功能恢复的促进作用及...

作者：郭宝璐山西医科大学

学位级别：硕士

目的:脑缺血亚急性期的治疗关键是促进神经功能恢复,除了康复训练外目前还没有更有效的治疗方法。课题组前期研究首次提出了在脑缺血再灌注数分钟内给予CO后处理的干预手段,发现它可产生显著的神经保护作用。据此,本研究利用光化学诱导... 详细信息

目的:脑缺血亚急性期的治疗关键是促进神经功能恢复,除了康复训练外目前还没有更有效的治疗方法。课题组前期研究首次提出了在脑缺血再灌注数分钟内给予CO后处理的干预手段,发现它可产生显著的神经保护作用。据此,本研究利用光化学诱导的永久性脑缺血模型(photothrombosis-induced ischemia,PTI),首次探讨了脑缺血后亚急性期连续每日进行延迟性慢性CO后处理对PTI后神经功能恢复的调节作用及相关机制。方法:利用光化学诱导的脑缺血模型损伤C57BL/6小鼠右侧运动感觉皮层,在脑缺血后不同时间点(3、7 d)给小鼠每日连续吸入不同浓度(5%、10%、20%)、不同时程的(10 min×3/d,每次间隔10 min;20 min×3/d,每次间隔10 min)CO气体进行后处理。利用足误实验,圆筒实验及步态测试来检测小鼠的神经运动功能;甲苯胺蓝染色检测了脑梗死体积;免疫荧光检测了脑梗死周边区的轴突再生相关蛋白Grow associated protein 43(GAP-43)表达及新生血管的密度,并测定了胶质疤痕的面积、星形胶质细胞所包围的梗死面积、星形胶质细胞突起物的长、宽及长/宽;其次,利用激光散斑血流成像仪检测了脑梗死周边区的基础脑血流量。并利用TMT定量蛋白组学分析技术分析了CO后处理组与损伤组的差异蛋白。结果:在每日CO处理10 min×3/d(开始于PTI后3 d)的条件下,5%CO、10%CO和20%CO均可以显著改善小鼠的运动功能障碍,其中10%CO处理效果最佳。10%CO处理条件下,于PTI后3-21 d及7-21 d内每日连续进行CO后处理,均可以显著改善缺血后的运动功能障碍,但仅在3-7 d进行CO后处理作用较弱。这些结果表明,延迟性慢性CO后处理对小鼠运动功能的改善具有浓度及疗程依赖性,且时间窗较宽。同时,CO后处理可以显著减少脑缺血后21 d的脑梗死体积。进一步发现,CO后处理可以显著减少胶质疤痕的面积,促进星形胶质细胞向梗死核心区迁移,并显著增加14和21 d时梗死周边区GAP-43的表达及7、14和21 d时梗死周边区新生血管的密度。同时,CO后处理还可显著提高21 d时缺血侧的基础脑血流量。蛋白组学的分析结果显示,与PTI组相比,CO后处理组共有49个蛋白发生了显著变化,其中有18个表达上调(如Eif2b2),31个表达下调(如Col1a1,Col1a4,Thsd7a,)。同时,与PTI组相比,CO后处理组在多项GO富集类别中具有显著差异,如生物学过程中胶原纤维的合成,细胞成分中的聚合物细胞骨架纤维,分子功能中的谷氨酸受体活性等都发生了显著的变化。结论:延迟性慢性CO后处理可促进永久性脑缺血后的神经功能恢复,并且可减少脑梗死体积,该处理方法具有浓度、时间窗及时程依赖性。其机制可能与促进了脑缺血后的轴突再生、血管再生及减少胶质疤痕面积,促进疤痕的整体迁移有关。本研究为脑缺血后的康复治疗开辟了新的治疗前景,但其机制还有待进一步探讨。

关键词：延迟性慢性CO2后处理永久性脑缺血轴突再生胶质疤痕血管再生

永久性脑缺血神经干细胞迁移和细胞分裂、增殖的研究

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解剖科学进展 2003年第3期9卷 207-209页

作者：徐曦郑建云肖新莉刘勇陕西医学高等专科学校解剖学教研室陕西西安710068 陕西省结核病医院病理科陕西西安710068 西安交通大学医学院解剖学教研室陕西西安710068

目的　探讨永久性脑缺血神经干细胞 (NSC)迁移是否伴随自身的分裂与增殖。方法　以永久性脑缺血大鼠为模型 ,采用免疫组化染色方法 ,观察脑缺血 1,3,7,14和 2 8dNSC迁移及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果　室管膜下区 (SEZ)NSC和PCNA+... 详细信息

目的　探讨永久性脑缺血神经干细胞 (NSC)迁移是否伴随自身的分裂与增殖。方法　以永久性脑缺血大鼠为模型 ,采用免疫组化染色方法 ,观察脑缺血 1,3,7,14和 2 8dNSC迁移及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果　室管膜下区 (SEZ)NSC和PCNA+ 细胞在缺血后沿胼胝体腹侧向缺血区方向发生了时空一致性的迁移模式 ;缺血梗死灶周围均有较多巢蛋白和PCNA阳性细胞的表达。结论　永久性脑缺血后NSC可能通过自身分裂和增殖向外迁移 ,巢蛋白和PCNA在缺血区周围表达可作为NSC迁移和增殖的标志物。

关键词：永久性脑缺血神经干细胞细胞迁移细胞分裂细胞增殖增殖细胞核抗原

大鼠永久性脑缺血后脑内Nestin的表达变化

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中国现代医生 2022年第23期60卷 1-5页

作者：梁晓艳赵梦陈超周洋李斌斌赵紫琦顾玉承德护理职业学院基础部河北承德067000 河北省承德市中心医院检验科河北承德067000

目的研究永久性脑缺血大鼠脑内巢蛋白(neuro epithelial stem cell prote,Nestin)的表达变化,探讨脑缺血后神经干细胞的增生、迁移和分化规律。方法采用微创开颅法复制大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型... 详细信息

目的研究永久性脑缺血大鼠脑内巢蛋白(neuro epithelial stem cell prote,Nestin)的表达变化,探讨脑缺血后神经干细胞的增生、迁移和分化规律。方法采用微创开颅法复制大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,分为正常对照组、假手术组和脑缺血组;假手术组和脑缺血组又分为术后1d、2d、3d、1周、2周、3周和4周共7个亚组,抗Nestin抗体和抗Nestin/胶纸原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗体分别进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果正常对照组和假手术组仅在部分血管内皮、侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)及第三脑室周围见极少量的Nestin阳性表达,阳性细胞呈椭圆形或不规则形,体积小,突起短少。脑缺血后Nestin阳性细胞明显增多,体积变大,呈多突起的星形,且大部分阳性细胞与星形胶质细胞的标志物GFAP共表达;增生的阳性细胞从缺血侧SVZ梯度式迁往梗死灶边缘,于缺血后3d达到增生高峰,之后增生能力逐渐下降,缺血后2周,缺血侧SVZ的Nestin阳性细胞数及吸光度值已回落到正常水平;缺血4周后,梗死灶周围的阳性细胞也基本消失。结论大鼠永久性脑缺血后激活了SVZ的Nestin阳性细胞一过性增生、迁往梗死灶周围并分化为星形胶质细胞,可能对缺血损伤后的脑组织起到修复作用。

关键词：永久性脑缺血 Nestin 大鼠神经干细胞

柚皮素对永久性脑缺血大鼠发挥神经保护作用的机制:下调NOD2,RIP2,NF-κB,MMP-9的表达,上调Claudin-5的表达

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柚皮素对永久性脑缺血大鼠发挥神经保护作用的机制:下调NOD2,RIP2...

永久性脑缺血神经干细胞迁移和bFGF蛋白表达的关系

第十一次中国中西医结合神经科学术会议

作者：白雪张祥建陈林玉张健张兰赵煦萌赵婷赵媛河北医科大学第二医院神经内科

目的:过度炎症反应是缺血性脑血管病的重要病理机制之一,抑制炎症将是治疗脑梗死的新靶点。柚皮素因其有效的抗炎作用而广受重视,在帕金森病、阿尔茨海默病等疾病治疗中发挥着重要的神经保护作用,然而在永久性脑缺血中柚皮素是否具有保... 详细信息

目的:过度炎症反应是缺血性脑血管病的重要病理机制之一,抑制炎症将是治疗脑梗死的新靶点。柚皮素因其有效的抗炎作用而广受重视,在帕金森病、阿尔茨海默病等疾病治疗中发挥着重要的神经保护作用,然而在永久性脑缺血中柚皮素是否具有保护作用却鲜为人知。为此,我们设计此项研究,探讨柚皮素在永久性脑缺血中的神经保护作用及其可能的机制。方法:成年雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(假手术+羧甲基纤维素钠),pMCAO组(pMCAO+生理盐水),溶剂对照组(pMCAO+羧甲基纤维素钠),小剂量柚皮素组(pMCAO+柚皮素50 mg/kg),大剂量柚皮素组(pMCAO+柚皮素100 mg/kg)。造模(pMCAO)前4天开始给予灌胃给药,每天1次,于术前1 h末次给药。术后24 h进行神经功能评分和脑组织含水量、脑梗死体积测定,并用免疫组化、Western blot和qRT-PCR的方法检测脑组织内NOD2,RIP2,NF-κB的表达,检测MMP-9,claudin-5的活性以观察柚皮素对血脑屏障的影响。结果:与pMCAO和溶剂对照组相比,柚皮素组神经功能缺损评分、脑组织含水量、脑梗死体积明显降低(P永久性大鼠脑缺血损伤,具有保护作用,其作用机制为下调NOD2,RIP2,NF-κB,MMP-9的表达,上调claudin-5的表达,保护血脑屏障。

关键词：永久性脑缺血神经保护柚皮素炎症血脑屏障

来源： cnki会议评论

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第四军医大学学报 2003年第18期24卷 F002-F002页

作者：徐曦郑建云肖新莉刘勇罗秀成杨石照李保利陕西医学高等专科学校解剖学教研室陕西西安710068 陕西省结核病医院病理科陕西西安710100 西安交通大学医学院解剖学教研室陕西西安710061

AIM: To understand the relationship between the migration of NSC and the expression of bFGF after permanent cerebral ischemia. METHODS: Choosing rats with permanent cerebral ischemia as models and adopting immunohistochemical staining to observe the migration of NSC in the state of cerebral ischemia and the expression of bFGF protein. RESULTS: There was a migration pattern with time space accordance between NSCs and bFGF + cells which migrated from SEZ towards ischemic cerebral tissue along ventral side of corpus callosum, and the intense bFGF protein expression in the corpus callosum after ischemia. Many bFGF + cells were found within and near the ischemic tissue after long time ischemia. CONCLUSION: The migration of NSCs from SEZ to ischemic area might need the sustenance of bFGF protein.

关键词：神经干细胞 nestin bFGF 永久性脑缺血

大鼠永久性脑缺血后白细胞介素-1β表达的研究

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苏州医学 2004年第2期27卷 72-74页

作者：卞杰勇周岱苏州大学附属第一医院脑外科，215006

目的探讨大鼠永久局灶性脑缺血后皮质白细胞介素-1β(IL-1β)基因的表达变化规律及其机制。方法采用RT-PCR方法观察大鼠大脑中动脉(WCA)线栓闭塞后不同时相MCA供血区皮质及对侧皮质IL-1β基因的表达，同时用ELISA法测定相同时相IL-1... 详细信息

目的探讨大鼠永久局灶性脑缺血后皮质白细胞介素-1β(IL-1β)基因的表达变化规律及其机制。方法采用RT-PCR方法观察大鼠大脑中动脉(WCA)线栓闭塞后不同时相MCA供血区皮质及对侧皮质IL-1β基因的表达，同时用ELISA法测定相同时相IL-1β蛋白的含量。结果缺血侧IL-1β mRNA在各缺血时间点皆有表达，缺血1h即有明显表达(0.34±0．05)，此后表达逐渐增强，缺血24h达高峰，密度比值为1．23±0．15。对应时相IL-1β值(pg／g)，缺血3h明显提高(384．1±57．7)，缺血48h达高峰(802.3±61．7)，缺血5d仍在高水平(753．9±46．5)。结论局灶性脑缺血时IL-1βmRNA表达一过性增高，IL-1β蛋白量平行延后增高，且持续时间较长，说明IL-1β参与脑缺血损害不仅仅局限于急性期。

关键词： IL-1β 永久性脑缺血表达大鼠白细胞介素-1β 局灶性脑缺血时相 β值高峰机制

陈忠教授和张翔南教授团队提出永久性脑缺血的潜在治疗策略

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浙江大学学报（医学版） 2020年第5期49卷 662-662页

2020年8月12日,《自噬》(Autophagy)在线发表了陈忠教授、张翔南教授团队的最新研究成果“BNIP3L/NIX degradation leads to mitophagy deficiency in ischemic brains”(https://***/doi/full/10.1080/15548627.2020.1802089)。

关键词： BNIP3 永久性脑缺血张翔最新研究成果