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氨基甾体小分子对K562和Meg-01慢粒白血病细胞系的作用

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氨基甾体小分子对K562和Meg-01慢粒白血病细胞系的作用

作者：甄焕英中南大学

学位级别：硕士

目的:观察氨基甾体类化合物对人慢性粒细胞白血病K562细胞系和MEG-01细胞系的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用MTT实验来观察氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞的抑制增殖能力;采用Wright染色,细胞表面... 详细信息

目的:观察氨基甾体类化合物对人慢性粒细胞白血病K562细胞系和MEG-01细胞系的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用MTT实验来观察氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞的抑制增殖能力;采用Wright染色,细胞表面CD71、CD41表面标记物的检测来观察氨基甾体类化合物对K562及MEG-01细胞系的诱导分化作用;为了进一步了解氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞作用的机制,采用荧光分光光度计检测K562细胞及MEG-01细胞内钙离子浓度([Ca])的变化,采用RT-PCR实验观察K562及MEG-01细胞内bcr/abl融合基因的变化。结果: 氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞增殖能力和分化能力的影响 1.增殖方面:MTT结果显示,终浓度为10mol/L的5种氨基甾体类化合物作用于K562细胞及MEG-01细胞第5d,5种氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,对K562细胞生长抑制率(GIR)分别为Z-30(62.18±4.72)%,Z-31(35.25±2.16)%,Z-32(42.86±7.32)%,Z-33(64.71±1.24)%,Z-34(73.95±8.82)%。对MEG-01细胞的生长抑制率(GIR)分别为Z-30(43.24±5.61)%,Z-31(45.65±3.24)%,Z-32(60.81±2.57)%,Z-33(66.22±6.26)%,Z-34(72.97±7.28)%。 2.分化方面:终浓度为10mol/L的5种氨基甾体(Z-30、31、32、33、34)作用于K562细胞及MEG-01细胞第5d Wright染色,镜下观察发现K562细胞核浆比例减少,有核切迹,核染色质浓集变粗,胞质增多,浅染,核周胞质出现淡染区;MEG-01细胞则表现为核浆比例变小,胞核呈不规则状,核染色质浓集变粗,胞质增多,浅染,核周胞质出现淡染区。流式细胞仪分析显示:终浓度为10mol/L的5种氨基甾体(Z-30、31、32、33、34)作用于K562细胞第5d,细胞膜上CD71表面标记表达阳性率分别为91.63%、91.07%、85.16%、80.85%、75.51%;终浓度为10mol/L的5种氨基甾体(Z-30、31、32、33、34)作用于MEG-01细胞第5d,细胞膜上CD41表面标记表达阳性率分别为74.7%、64.5%、64.58%、54.96%、59.65%。 3.5种氨基甾体对K562细胞及MEG-01细胞内[Ca]的影响利用荧光分光光度计检测发现:经终浓度为10mol/L的5种氨基甾体(Z-30、31、32、33、34)处理K562细胞0.5h,处理MEG-01细胞1h后,细胞内游离[Ca]的荧光强度有所下降。 4.氨基甾体对K562细胞及MEG-01细胞bcr/abl融合基因的影响:终浓度为10mol/L的5种氨基甾体类化合物作用于K562细胞及MEG-01细胞第5d,提取其RNA进行逆转录及扩增,与对照组相比,bcr/abl融合基因表达产量降低。结论: 1 5种氨基甾体类化合物均能有效地抑制K562细胞及MEG-01细胞的增殖,并呈浓度依赖性,但两种细胞对不同的氨基甾体类化合物有不同的敏感性。 2所有的氨基甾体类化合物均能有效地诱导K562细胞系向红系分化,诱导MEG-01细胞向巨核系分化,但不同的氨基甾体类化合物诱导K562细胞及MEG-01细胞分化的程度不同。 3 5种氨基甾体作用于K562细胞和MEG-01细胞一段时间后,均能使K562及MEG-01细胞内[Ca]下降,这可能与其阻断了钙通道有关,且细胞内[Ca]的降低可能与氨基甾体对K562及MEG-01细胞产生抑制增殖和诱导分化的作用机制有关。 4 bcr/abl融合基因5种氨基甾体作用于K562细胞及MEG-01细胞5d后,均可下调K562细胞及MEG-01细胞内的bcr/abl融合基因,但不同的氨基甾体化合物下调MEG-01细胞内的bcr/abl融合基因的程度不同。

关键词：白血病细胞氨基甾体增殖分化钙离子 bcr/abl融合基因

氨基甾体小分子L1对K562慢粒白血病细胞系的作用和机制

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氨基甾体小分子L1对K562慢粒白血病细胞系的作用和机制

作者：李碧蓉中南大学

学位级别：硕士

目的：观察氨基甾体类化合物L1对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法：通过液体培养实验、集落培养实验、MTT实验观察氨基甾体类化合物L1对K562细胞的抑制增殖作用;同时对正常人... 详细信息

目的：观察氨基甾体类化合物L1对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法：通过液体培养实验、集落培养实验、MTT实验观察氨基甾体类化合物L1对K562细胞的抑制增殖作用;同时对正常人外周血单个核细胞（MNC）进行MTT实验及对正常人外周血（CFU-GM）集落培养实验来观察氨基甾体L1对正常人外周血细胞的作用。采用Wright染色、流式细胞术、联苯胺染色观察K562细胞的功能变化,以评价L1对K562细胞的诱导分化作用。为进一步研究氨基甾体类化合物L1对K562细胞的作用机制,通过荧光分光光度计检测K562细胞内钙离子浓度（[Ca2+]i）的变化,通过荧光定量PCR （RT-PCR）检测K562细胞钙通道TRPV6蛋白mRNA表达的影响,通过RT-PCR实验检测K562细胞内的bcr/abl融合基因：mRNA表达的影响。结果： 1、氨基甾体化合物L1对K562细胞增殖的影响。将不同终浓度的L1（10-8-10-4mol/L）作用于K562细胞,连续培养的5d,MTT实验显示氨基甾体化合物L1作用K562细胞的第5d的生长抑制率分别为10-8（34.38±2.69）%;10-7（34.90±2.31）%;10-6（53.91±3.46）%;10-5（51.04±1.83）%;10-4（87.24±6.54）%,L1可以抑制K562细胞的增殖且抑制作用呈浓度依赖关系。将浓度不同氨基甾体L1（10-8-10-4mol/L）加入K562细胞连续培养8d,集落产率分别为10-8（297.3±13.1）;10-7（281.5±17.9）;10-6（225.4±35.9）;10-5（92.7±13.1）;10-4（2.88±4.68）,对照组为（349.1±18.8）,集落产率显著降低（P＜0.01）。同时将氨基甾体化合物L1以10-6mol/L作用于外周血单个核细胞（MNC）连续培养第5d集落产率对照组为（166.3±6.5）,实验组为（163.9±15.3）,未见明显抑制作用（P＞0.05）,可见氨基甾体化合物L1的抑制作用具有选择性,主要对K562细胞具有抑制作用并呈浓度依赖性。 2.氨基甾体化合物L1对K562细胞分化的影响。 K562细胞培养5d后,Wright-Giemsa染色,镜下观察发现K562细胞核浆比例减少、胞质增多、浅染、有核切迹、核染色质浓集变粗,核周胞质出现淡染区呈一定程度的分化。经氨基甾体化合物L1作用K562细胞细胞内血红蛋白联苯胺染色显示,不同终浓度的氨基甾体化合物L1（10-8-10-4mol/L）作用K562细胞第5d,联苯胺染色A值分别为：10-9（0.151±0.024）,10-8（0.169±0.024）,10-7（0.205±0.045）,10-6（0.286±0.106）,10-5（0.337±0.027）,较对照组（0.085±0.002）显著升高（P＜0.01）,并表现浓度依赖性。流式细胞仪分析显示,氨基甾体化合物L1以10-6mol/L作用于K562细胞5d后,细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为78%。 3.氨基甾体L1对K562细胞内游离[Ca2+]i的影响。用Fura-2/AM负载K562细胞,经终浓度为10-6mol/L的氨基甾体化合物（L1）处理细胞0.5h后,荧光分光光度计检测其荧光强度值对照组为（161.39±6.37）,实验组为（133.88±3.55）实验组较对照组显著下降（P＜0.01）。 ***-PCR检测氨基甾体L1作用K562细胞后TRPV6钙通道蛋白mRNA表达量的变化。终浓度106-mol/L的氨基甾体L1作用于K562细胞第5d,提取RNA进行逆转录和扩增,RT-PCR测定K562细胞TRPV6钙通道mRNA相对含量,对照组为（6.01±0.44）,实验组为（2.69±0.21）,钙通道蛋白mRNA表达显著下调（P＜0.01）。 5.氨基甾体对K562细胞bcr/abl融合基因的影响：终浓度10-6mol/L的氨基甾体L1作用于K562细胞第5d,提取RNA进行逆转录及扩增,RT-PCR测定K562细胞bcr/abl mRNA相对含量对照组为（6.24±0.15）,实验组为（2.75±0.91）, bcr/abl融合基因表达显著下调（P＜0.01）。结论： 1、氨基甾体L1对K562细胞生长具有显著抑制作用,且呈一定剂量依赖关系。对正常人的外周血细胞抑制作用不明显。 2、氨基甾体L1能有效诱导K562细胞向红系分化。 3、氨基甾体L1作用于K562细胞30min后,使K562细胞内游离[Ca2+]i下降。

关键词： K562细胞系氨基甾体钙通道分化增殖 bcr/abl融合基因白血病

氨基甾体H42649对K562和CML白血病细胞的作用及其机理探讨

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氨基甾体H42649对K562和CML白血病细胞的作用及其机理探讨

作者：张君中南大学

学位级别：硕士

目的:观察氨基甾体H42649对人慢性粒细胞白血病K562细胞系和人慢性粒细胞白血病(CML)原代细胞的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验观察H42649对K562细胞和CML原代细胞的增... 详细信息

目的:观察氨基甾体H42649对人慢性粒细胞白血病K562细胞系和人慢性粒细胞白血病(CML)原代细胞的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验观察H42649对K562细胞和CML原代细胞的增殖能力的影响;采用Wright-Giemsa染色,联苯胺染色,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色和流式细胞术观察K562细胞和CML原代细胞功能变化,评价H42649对K562细胞和CML原代细胞的诱导分化作用;通过荧光分光光度计检测H42649作用于K562细胞和CML原代细胞30min后细胞内游离钙离子浓度的变化;通过Real-time PCR检测H42649对K562细胞和CML原代细胞钙通道蛋白mRNA的表达的影响;通过Real-time PCR检测H42649对K562细胞和CML原代细胞bcr/abl融合基因mRNA的表达的影响。结果: 1.氨基甾体H42649对K562细胞和CML原代细胞增殖的影响。在连续培养的1～5d,不同浓度的H42649(10～10mol/L)可以抑制K562细胞细胞和CML原代细胞增殖。经10mol/L H42649培养5d,MTT实验显示K562细胞生长抑制率为(55.26±2.54)%,CML原代细胞生长抑制率分别为(63.53±2.36)%,且这种抑制作用呈一定的剂量依赖关系。 2.氨基甾体H42649对K562细胞和CML原代细胞分化的影响。 K562细胞和CML原代细胞培养5d后,Wright-Giemsa染色,光镜下与对照组比较经H42649处理后的细胞均可见体积变大,核浆比例减少,表现一定程度的分化。细胞内血红蛋白联苯胺染色显示,10mol/L H42649作用5d后,K562细胞联苯胺染色A值为(0.2701±0.1960),较对照组(0.0879±0.0645)显著升高(p＜0.01)。CML原代细胞NBT染色A值为(1.7539±0.0280),较对照组(1.0397±0.1731)显著升高(p＜0.01)。流式细胞仪分析显示,10mol/L H42649作用于K562细胞4d后,细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为84%。作用于CML原代细胞4d后,细胞膜上CD14表面标记表达阳性率为87%。 3.氨基甾体H42649抑制K562细胞和CML原代细胞的增殖和诱导其分化作用的机制研究。 (1)氨基甾体H42649对K562细胞内和CML原代细胞内游离[Ca]的影响。用Fura-2/AM负载K562细胞,经10mol/L H42649处理30min后,其A值为(133.0917±2.8980),与对照组(166.1050±2.3526)比较显著下降(p＜0.01);用Fura-2/AM负载CML原代细胞,经10-6mol/L H42649处理30min后,其A值为(126.1700±3.1968),与对照组(178.8533±5.1460)比较显著下降(p＜0.01)。 (2)Real-time PCR检测氨基甾体H42649作用后K562细胞和CML原代细胞钙通道蛋白mRNA的表达量变化。分别提取对照组(无水乙醇处理)和试验组(10mol/L H42649处理)细胞的mRNA,反转录成cDNA,使用实时定量PCR法进行相对定量。最终得到K562细胞钙通道蛋白基因在对照组和试验组的相对含量(以内参校正后得值)分别是:2.05×10(对照组)和5.94×10(试验组),试验组/对照组=2.90;CML原代细胞钙通道蛋白基因在对照组和试验组的相对含量(以内参校正后得值)分别是:3.48×10(对照组)和5.94×10(试验组),试验组/对照组=1.70。即H42649处理钙通道蛋白mRNA的表达上调。 (3)Real-time PCR检测氨基甾体H42649作用后K562细胞和CML原代细胞bcr/abl融合基因mRNA的表达量变化。分别提取对照组(无水乙醇处理)和试验组(10mol/L H42649处理)细胞bcr/abl融合基因的mRNA,反转录成cDNA,使用实时定量PCR法进行相对定量。最终得到K562细胞bcr/abl基因在对照组和试验组的相对含量(以内参校正后得值)分别是:5.30×10(对照组)和2.13×10(试验组),试验组/对照组=0.40;CML原代细胞bcr/abl基因在对照组和试验组的相对含量(以内参校正后得值)分别是:6.42×10(对照组)和2.37×10(试验组),试验组/对照组=0.37。即H42649处理bcr/abl mRNA的表达下调。结论: 1.氨基甾体H42649能显著抑制K562细胞和CML原代细胞的增殖,并呈一定的剂量依赖关系。 2.氨基甾体H42649具有诱导K562细

关键词：氨基甾体 K562细胞系 CML原代细胞钙通道 bcr/abl融合基因

氨基甾体Z1对MEG-01白血病细胞的作用及其机理研究

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氨基甾体Z1对MEG-01白血病细胞的作用及其机理研究

作者：周阳中南大学

学位级别：硕士

目的：观察氨基甾体Z1对人慢性粒细胞白血病MEG-01细胞的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法：采用液体培养实验、MTT实验、集落培养实验观察氨基甾体Z1对MEG-01细胞的抑制增殖作用;采用Wright染色、醋酸AS-D萘酚酯酶... 详细信息

目的：观察氨基甾体Z1对人慢性粒细胞白血病MEG-01细胞的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法：采用液体培养实验、MTT实验、集落培养实验观察氨基甾体Z1对MEG-01细胞的抑制增殖作用;采用Wright染色、醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-D NAE)染色、细胞膜CD41表面标记物检测观察氨基甾体Z1对MEG-01细胞的诱导分化作用;为进一步了解氨基甾体Z1对MEG-01细胞的作用机制,采用荧光分光光度计检测MEG-01细胞内钙离子浓度([Ca2]i)的变化,采用实时荧光定量RT-PCR实验检测MEG-01细胞内钙通道蛋白mRNA及bcr/abl融合基因mRNA的表达变化。结果：1.氨基甾体Z1对正常人外周血细胞和MEG-01细胞增殖的影响连续培养1-5d,不同浓度的氨基甾体Zl (10-8-10-4mol/L)能抑制MEG-01细胞的增殖。MTT实验结果显示,10-6mol/L氨基甾体Z1作用于正常人外周血单个核细胞3d后,其MTT值为0.035±0.003,于对照组比较无显著差异(p>0.05)。10-8mol/L氨基甾体Z1作用5d后,MEG-01细胞的生长抑制率(GIR)为(50.87±11.67)%,药物浓度增高,GIR增大。集落形成实验显示氨基甾体Z1对正常外周血细胞无明显作用,但能抑制MEG-01细胞的增殖且呈浓度依赖。2.氨基甾体Z1对MEG-01细胞分化的影响氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞第5d后Wright染色,与对照组比较,细胞核浆比例变小,细胞核不规则,核质变粗,胞浆增多,浅染,核周胞质出现淡染区。AS-D NAE染色后,处理组吸光值A较对照组明显升高(p氨基甾体Z1作用5d后,MEG-01细胞膜上CD41表面标记表达阳性率为76%。3.氨基甾体Z1抑制MEG-01细胞增殖及诱导其分化的机制研究(1)氨基甾体Z1对MEG-01细胞内[Ca2+]i的影响用Fura-2/AM负载MEG-01细胞,10-6mol/L的氨基甾体Z1处理1h后,荧光分光光度计检测其A值为(131.70±2.16),与对照组A值(166.58±2.47)比较显著降低(p氨基甾体Z1作用后MEG-01细胞TRPV6钙通道蛋白mRNA表达量的变化终浓度为10-6mol/L的氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞第5d,提取其RNA进行逆转录及扩增,实时定量PCR进行相对定量,其钙通道蛋白基因相对含量为(2.3610.18)×10-3,与对照组(6.65±0.40)×10-3比较,TRPV6钙通道蛋白mRNA表达下调(p氨基甾体Z1作用后MEG-01细胞bcr/abl融合基因mRNA表达量的变化终浓度为10-6mol/L的氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞第5d,提取其RNA进行逆转录及扩增,实时定量PCR进行相对定量,其bcr/abl融合基因相对含量为(2.22±0.18)×10-2,与对照组(6.21±0.22)×10-2比较,bcr/abl融合基因mRNA表达下调(p氨基甾体Z1能显著抑制MEG-01细胞增殖,并呈一定的浓度依赖关系。但其对正常人外周血细胞无明显抑制作用。2.氨基甾体Z1能诱导MEG-01细胞向巨核细胞系分化。3.氨基甾体Z1作用于MEG-01细胞1h,可导致细胞内游离钙离子浓度下降,这可能与其阻断了钙通道有关。4.氨基甾体Z1能使MEG-01细胞TRPV6钙通道蛋白mRNA表达下调,这可能与其对MEG-01细胞抑制增殖和诱导分化的作用机制相关。5.氨基甾体Z1能使MEG-01细胞bcr/abl融合基因mRNA表达下调,这可能与其对MEG-01细胞抑制增殖和诱导分化的作用机制相关。

关键词：氨基甾体 MEG-01细胞增殖分化钙通道 bcr/abl融合基因白血病

氨基甾体H42389对慢性髓性白血病细胞癌基因蛋白抑制作用的探讨

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氨基甾体H42389对慢性髓性白血病细胞癌基因蛋白抑制作用的探讨

作者：田毅中南大学

学位级别：硕士

目的：研究氨基甾体H42389对K562细胞系及CML细胞的增殖及分化作用,探讨氨基甾体H42389对慢性髓性白血病细胞Ras癌基因相关蛋白的抑制作用。方法：通过细胞培养实验、集落培养实验、MTT实验观察氨基甾体H42389对K562及CML细胞抑制增殖作... 详细信息

目的：研究氨基甾体H42389对K562细胞系及CML细胞的增殖及分化作用,探讨氨基甾体H42389对慢性髓性白血病细胞Ras癌基因相关蛋白的抑制作用。方法：通过细胞培养实验、集落培养实验、MTT实验观察氨基甾体H42389对K562及CML细胞抑制增殖作用;采用Wright染色,联苯胺染色,NBT染色和流式细胞术观察K562和CML细胞功能变化,评价氨基甾体H42389对K562和CML细胞的诱导分化作用;通过荧光分光光度计检测氨基甾体H42389作用于K562和CML细胞30分钟后胞内游离钙离子浓度的变化;通过Realtime-PCR检测氨基甾体H42389对K562和CML细胞钙通道蛋白mRNA表达的影响。结果：1.氨基甾体H42389对K562细胞和CML细胞增殖的影响。将氨基甾体H42389按设定浓度加入到K562和CML细胞中,经5天孵育,可以观察到：随着药物浓度的加大,细胞增殖抑制程度加重,细胞MTT的A492值有明显的下降趋势。2.H42389对K562细胞和CML细胞分化的影响。K562和CML细胞培养5d后,Wright染色,光镜下经氨基甾体H42389处理后的细胞与对照组比可见细胞体积变大,核浆比例减少,表现一定程度的分化。K562细胞内血红蛋白联苯胺染色显示,氨基甾体H42389作用5天后,联苯胺染色的A492值随着药物浓度的升高而增高;CML细胞NBT染色A492值在一定药物浓度(10-6mol/L～10-9mol/L)下呈现出剂量依赖关系。流式细胞仪分析显示,10-6mol/L的氨基甾体H42389作用于K562细胞4天后,细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为79%;作用于CML细胞4天后,细胞膜上CD14表面标记表达阳性率为77%。3.氨基甾体H42389抑制K562细胞和CML细胞的增殖和诱导其分化作用的机制研究。(1)氨基甾体H42389对K562和CML细胞内游离[Ca2+]i的影响。10-6mol/L的H42389处理已用Fura-2/AM负载过的K562和CML细胞,孵育后上机检查结果显示,K562细胞对照组的荧光值是176.30±1.62,处理组为114.88±1.73;CML细胞对照组的荧光值是184.03±1.52,处理组为112.90±0.91。表明经药物处理后的K562和CML细胞内游离[Ca2+]i明显低于对照组。(2)Realtime-PCR检测氨基甾体H42389作用后K562和CML细胞钙通道蛋白mRNA的表达量变化。处理组和对照组K56细胞钙通道nRNA相对含量分别是2.45×10-3、5.59×10-3,结果说明H42389作用K562细胞后可明显下调钙通道mRNA;处理组和对照组CML细胞钙通道mRNA相对含量分别是2.24×10-3、5.74×10-3,结果说明H42389作用CML细胞后可明显下调钙通道mRNA;(3)Realtime-PCR检测氨基甾体H42389作用后K562和CML细胞TC10mRNA的表达量变化。处理组和对照组K56细胞TC10mRNA相对含量分别是2.17×10-2、6.65×10-2,结果说明H42389作用K562细胞后可明显下调TC10mRNA;处理组和对照组CML细胞钙通道mRNA相对含量分别是2.22×10-3、6.71×10-2,结果说明H42389作用CML细胞后可明显下调TC10mRNA;结论1.氨基甾体H42389能明显抑制K562细胞以及CML细胞的生长增殖,在一定药物浓度范围内呈现出浓度依赖关系。2.氨基甾体H42389能够明显诱导K562细胞向红系分化成熟以及诱导CML细胞向单核巨噬系分化成熟。3.氨基甾体H42389可使K562细胞以及CML细胞内游离钙含量显著下降。4.氨基甾体H42389具有促进有效下调K562细胞以及CML细胞钙通道蛋白mRNA表达的能力。5.氨基甾体H42389具有有效下调K562细胞以及CML细胞Ras癌基因相关蛋白TC10mRNA表达的能力。

关键词：氨基甾体慢性髓性白血病 K562细胞系 CML细胞钙通道 Ras癌基因 TC10

氨基甾体类抗白血病化合物对K562白血病细胞系的作用及其机理研究

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氨基甾体类抗白血病化合物对K562白血病细胞系的作用及其机理研究

作者：董俊中南大学

学位级别：硕士

目的:观察氨基甾体类化合物对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用液体培养实验,集落培养实验,MTT实验来观察氨基甾体类化合物对K562细胞系的抑制增殖能力;采用Wright染色,联苯... 详细信息

目的:观察氨基甾体类化合物对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用液体培养实验,集落培养实验,MTT实验来观察氨基甾体类化合物对K562细胞系的抑制增殖能力;采用Wright染色,联苯胺染色,细胞表面CD71表面标记物的检测来观察氨基甾体类化合物对K562细胞系的诱导分化作用。采用荧光分光光度计,激光共聚焦扫描仪,原子吸收光谱仪检测K562细胞内外钙离子浓度([Ca])的变化。为了进一步了解氨基甾体类化合物对K562细胞的影响与细胞内外[Ca]以及钙通道之间的关系,我们选取阿糖胞苷,L型钙通道激动剂BayK8644,Ca螯合剂EGTA和有报道称能使K562细胞内[Ca]升高的吲哚美辛作用于K562细胞,采用MTT实验,联苯胺染色来观察它们对K562细胞的增殖和分化的影响,同时利用原子吸收光谱仪检测它们对K562细胞内总[Ca]的影响。结果: 1氨基甾体类化合物对K562细胞增殖能力和分化能力的影响增殖方面:MTT结果显示,终浓度为10mol/L的8种氨基甾体类化合物作用于K562细胞第5d,除了氨基甾体G对K562细胞的抑制增殖作用不明显外,其余7种氨基甾体类化合物对K562细胞的增殖有不同程度的抑制作用,生长抑制率(GIR)分别为A(61.21±10.03)%,B(63.03±2.28)%,C(43.38±2.96)%,D(54.49±1.14)%,E(24.43±1.26)%,F(52.96±8.74)%,H(79.88±8.88)%。分化方面:联苯胺染色结果显示,终浓度为10mol/L的8种氨基甾体类化合物作用于K562细胞第5d,处理组各组联苯胺染色检测值较对照组均有升高,分化程度分别为对照组的1.96(A)倍,1.92(B)倍,2.28(C)倍,2.55(D)倍,2.30(E)倍,1.99(F)倍,2.17(G)倍,2.30(H)倍。以其中一种氨基甾体C(代号H51817)为代表做进一步的研究,探讨氨基甾体类化合物对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的作用机制。 2氨基甾体H51817对K562细胞增殖能力和分化能力的影响增殖方面:加入不同终浓度的氨基甾体H51817(10～10mol/L)与K562细胞连续培养,当培养至第3d和第5d,10mol/m的氨基甾体H51817对K562细胞的生长有抑制作用,细胞计数的GIR分别为(38.36±10.54)%和(45.92±11.15)%;10mol/L的氨基甾体H51817作用于K562细胞第8d的集落培养结果显示,K562细胞的增殖明显受到抑制,GIR为(77.98±6.98)%。分化方面:终浓度为10mol/L的氨基甾体H51817作用于K562细胞第5d Wright染色,镜下观察发现细胞体积变大,核浆比例减少,有核切迹,核染色质浓集变粗,胞质增多,浅染,核周胞质出现淡染区;流式细胞仪分析显示:终浓度为10mol/L的氨基甾体H51817作用于K562细胞第5d,67.74%的细胞胞膜上CD71表面标记表达呈阳性。 3 EGTA,BayK8644,吲哚美辛,阿糖胞苷对K562细胞增殖能力和分化能力的影响增殖方面:EGTA,BayK8644,吲哚美辛,阿糖胞苷作用于K562细胞第5d的MTT结果表明:0.01～1 mmol/L的EGTA对K562细胞无明显的抑制增殖作用,而0.01mmol/L的BayK8644,吲哚美辛和阿糖胞苷能分别抑制其增殖(p＜0.05),GIR分别为(14.94±0.01)%,(18.30±0.02)%,(50.10±0.12)%。分化方面:EGTA,BayK8644,吲哚美辛,阿糖胞苷作用于K562细胞第5d的联苯胺染色结果显示:经0.01～1mmol/L的EGTA处理的K562细胞分化程度较对照组无明显的差异(p＞0.05),而0.01mmol/L的BayK8644,吲哚美辛和阿糖胞苷使K562细胞的分化程度分别达到对照组的1.98倍,2.94倍和3.29倍。 4氨基甾体H51817对K562细胞内外总[Ca]的影响利用荧光分光光度计检测,激光共聚焦扫描仪扫描发现:经终浓度为10mol/L的氨基甾体H51817处理K562细胞一定时间后,细胞内游离[Ca]的荧光强度有所下降;利用原子吸收光谱仪检测K562细胞外不同的环境条件下氨基甾体H51817对K562细胞内外总[Ca]的变化发现:DMEM组细胞内总[Ca]显著下降,下降率为(32.01±2.36)%,但细胞外[Ca]无明显变化;0.9%的生理盐水组细胞内外[Ca]与对照组比较均无明显变化。 5 EGTA,BayK8644,吲哚美辛,阿糖胞苷对K562细胞内总[Ca]的影响浓度均为0.01 mmol/L的EGT

关键词：氨基甾体白血病细胞增殖分化钙离子

新型氨基甾体对小鼠粒单白血病动物模型的作用

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同方学位论文库

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湖南医科大学学报 2000年第1期25卷 12-14页

作者：那晓东何群蒋德昭湖南医科大学学报血液生理研究室湖南长沙 410078

应用不同剂量的新型氨基甾体处理小鼠急性粒单核细胞性白血病动物模型 ,测定外周血白细胞计数及分类、骨髓未分化细胞百分率及脾重的变化。结果表明 :新型氨基甾体能明显降低小鼠粒单白血病动物模型的上述指标 (P <0 .0 1) ,且随着药... 详细信息

应用不同剂量的新型氨基甾体处理小鼠急性粒单核细胞性白血病动物模型 ,测定外周血白细胞计数及分类、骨髓未分化细胞百分率及脾重的变化。结果表明 :新型氨基甾体能明显降低小鼠粒单白血病动物模型的上述指标 (P 氨基甾体对小鼠粒单白血病动物模型具有治疗作用 ,加大剂量可提高治疗效果。

关键词：白血病骨髓单核细胞性急性氨基甾体

氨基甾体H42649对K562白血病细胞的抑制增殖和诱导分化作用

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解剖学研究 2012年第3期34卷 215-219页

作者：张君周阳何群怀化医学高等专科学校湖南怀化418000 中南大学基础医学院生理学系湖南长沙410078

目的观察氨基甾体H42649对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的抑制增殖和诱导分化作用。方法采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验观察10-8～10-4mol/L浓度的H42649对K562细胞增殖能力的影响;采用Wright-Giemsa染色,联苯胺染色和流式细... 详细信息

目的观察氨基甾体H42649对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的抑制增殖和诱导分化作用。方法采用液体培养实验,MTT实验,集落培养实验观察10-8～10-4mol/L浓度的H42649对K562细胞增殖能力的影响;采用Wright-Giemsa染色,联苯胺染色和流式细胞术评价10-6mol/L浓度的H42649对K562细胞的诱导分化作用。结果不同浓度的H42649连续作用K562细胞1～5 d后,细胞计数和集落计数明显减少;第5 d处理组的MTT值显著低于对照组,并呈剂量依赖关系;10-6mol/L浓度的H42649对K562细胞作用5d后,联苯胺染色A值升高(P氨基甾体H42649能显著抑制K562细胞的增殖并诱导其向红系分化,提示该药可作为一种新型慢粒白血病细胞的诱导分化剂。

关键词：氨基甾体 K562细胞系增殖分化

氨基甾体Z1对MEG-01白血病细胞的抑制增殖及诱导分化作用

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实用癌症杂志 2016年第2期31卷 175-178页

作者：周阳张君李震何群湖南医药学院基础医学院 418000

目的观察氨基甾体Z1对人慢性粒细胞白血病MEG-01细胞的抑制增殖和诱导分化作用。方法采用液体培养实验、集落培养实验、MTT实验观察氨基甾体Z1对MEG-01细胞的抑制增殖作用;采用Wright染色、AS-D NAE染色、细胞膜CD41表面标记物检测氨基... 详细信息

目的观察氨基甾体Z1对人慢性粒细胞白血病MEG-01细胞的抑制增殖和诱导分化作用。方法采用液体培养实验、集落培养实验、MTT实验观察氨基甾体Z1对MEG-01细胞的抑制增殖作用;采用Wright染色、AS-D NAE染色、细胞膜CD41表面标记物检测氨基甾体Z1对MEG-01细胞的诱导分化作用。结果 10^-8-10^-4mol/L的氨基甾体Z1连续作用后,细胞和集落计数明显减少,处理组MTT值显著降低,且呈浓度依赖;Wright染色显示处理组细胞有分化表现,AS-D NAE染色A值升高（P〈0.01）,流式细胞术检测处理组细胞膜上CD41表面标记表达阳性率为76%。结论氨基甾体Z1能显著抑制MEG-01细胞增殖并诱导其向巨核细胞系分化,提示该药或可成为慢性粒细胞白血病的一种新型诱导分化剂。

关键词：氨基甾体 MEG-01细胞增殖分化白血病