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虾青素对H2O2诱导的COV434人卵巢颗粒细胞氧化损伤的保护作用研究

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虾青素对H2O2诱导的COV434人卵巢颗粒细胞氧化损伤的保护作用研究

作者：余橙橙广西医科大学

学位级别：硕士

第一部分过氧化氢刺激人卵巢颗粒细胞COV434建立体外氧化应激模型目的通过使用过氧化氢(HO)在体外刺激人卵巢颗粒细胞COV434,建立氧化应激模型并探讨其条件。方法分别用0.2mm/L、0.4mm/L、0.5mm/L、0.6mm/L、0.8mm/L的HO浓度梯度处理COV... 详细信息

第一部分过氧化氢刺激人卵巢颗粒细胞COV434建立体外氧化应激模型目的通过使用过氧化氢(HO)在体外刺激人卵巢颗粒细胞COV434,建立氧化应激模型并探讨其条件。方法分别用0.2mm/L、0.4mm/L、0.5mm/L、0.6mm/L、0.8mm/L的HO浓度梯度处理COV434细胞0.5h、1h、2h、4h、6h后,采用CCK-8检测法测定细胞增殖活力情况,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS的含量,同时分别用试剂盒检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、雌二醇(E2)及孕酮含量,并用免疫组化方法测定caspase-3水平。从而确定建模的最佳条件。结果随着HO的浓度增高和作用时间的增加,细胞增殖活力呈下降趋势。0.4～0.6mmol/L浓度HO处理2h后细胞增值率下降明显,细胞内活性氧(ROS)含量上升最明显,同时caspase-3上升也最明显。细胞上清液中雌二醇和孕酮含量随着HO的浓度增高和作用时间增加呈下降趋势,LDH含量呈上升趋势。结论HO可以通过诱导人卵巢颗粒细胞,使其氧化损伤,从而建立氧化应激模型,最合适的浓度为0.4～0.6mmol/L,作用时间为2h。第二部分虾青素对HO诱导的COV434人卵巢颗粒细胞的氧化损伤的保护作用目的研究虾青素对过氧化氢(HO)诱导的人卵巢颗粒细胞COV434氧化损伤的保护作用及其机制。方法将COV434细胞在体外进行培养,使用浓度为0.5mmol/L的HO诱导COV434细胞达到氧化损伤的状态。细胞分组分为:空白组、模型组(HO 0.5mmol/L)、虾青素(Astaxanthin,AST)低、中、高剂量组(2、4、8umol/L+HO 0.5 mmol/L)。使用CCK-8检测法检测细胞增殖活力,DCFH-DA荧光探针标记法检测细胞内活性氧(ROS)水平,微量酶标法测定细胞释放于上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)含量。Annexin V-FITC/7-AAD双染和7-AAD染色,分别检测细胞凋亡率和周期分布。q RT-PCR检测PI3K/AKT信号通路中m TOR、PI3K、AKT相关基因m RNA的表达。结果与空白组比较,模型组细胞增殖活力下降,细胞内ROS水平和细胞上清液中LDH释放量有所增高,S期百分率、早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡比例升高明显(P模型组,AST低、中、高剂量组细胞内ROS水平、细胞上清液中LDH释放量以及S期百分率下降,G2/M期百分率升高(P氧化损伤,虾青素有较为显著的保护作用。细胞内ROS的清除,从而使DNA氧化损伤减轻,以及调控PI3K-AKT信号通路介导的细胞凋亡可能与其中的保护机制有关。

关键词：过氧化氢 COV434细胞 ROS 氧化应激模型人卵巢颗粒细胞氧化应激虾青素

关防风多糖的提取参数优化及其对肉仔鸡抗氧化能力的影响

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关防风多糖的提取参数优化及其对肉仔鸡抗氧化能力的影响

作者：万轩辰黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

本试验旨在对大庆本地关防风多糖提取工艺进行优化,并研究关防风多糖（SDP）对肉仔鸡抗氧化能力的影响,及其对地塞米松（DEX）诱导氧化应激的缓解作用,以初步探究防风多糖在肉鸡养殖中的应用。关防风多糖提取工艺参数优化试验,主要研究... 详细信息

本试验旨在对大庆本地关防风多糖提取工艺进行优化,并研究关防风多糖（SDP）对肉仔鸡抗氧化能力的影响,及其对地塞米松（DEX）诱导氧化应激的缓解作用,以初步探究防风多糖在肉鸡养殖中的应用。关防风多糖提取工艺参数优化试验,主要研究超声辅助提取法中液料比、超声温度、超声时间对多糖提取率的影响。试验通过单因素结合响应面法进行试验设计,通过拟合三个因素对关防风多糖提取率的数学模型发现,三个因素影响关防风多糖提取率的强弱顺序为:液料比＞超声温度＞超声时间。并进行模型优化最终确定了关防风多糖最佳提取率工艺参数为:液料比41:1、超声温度60℃、超声时间59min。该提取工艺下理论提取率为1.036%,且该结果通过实际验证。为研究关防风多糖对肉仔鸡抗氧化能力的影响,试验选取1日龄爱拔益加肉仔鸡240羽,按体重相近原则随机分为:空白对照组（CON组）、关防风多糖组（SDP组）、模型对照组（DEX组）、高剂量关防风多糖模型组（SDPHD组）、中剂量关防风多糖模型组（SDPMD组）、低剂量关防风多糖模型组（SDPLD组）,每组5个重复,每个重复内8羽肉仔鸡。CON和DEX组饲喂基础日粮,SDP、SDPHD、SDPMD和SDPLD组14日龄后在基础日粮上分别添加1000、1000、500和100 mg/kg的SDP。其中DEX、SDPHD、SDPMD和SDPLD组在试验第21d清晨肌肉注射6mg/kg BW DEX诱导其形成氧化应激。分别在注射DEX后的4、8、12、16和24h下,每组每个重复内随机选取一羽鸡进行屠宰,采集样本并测定指标。研究结果表明:（1）SDP对肉仔鸡生产性能的影响SDP的饲喂没有对肉仔鸡平均日增重和平均日采食量产生显著影响（P＞0.05）,其中平均日增重虽然表现出随着SDP饲喂剂量的增加而升高的趋势但未表现出显著性差异（P＞0.05）。然而,SDP却显著降低了肉仔鸡的料重比（P＜0.05）。（2）SDP对健康状态下肉仔鸡抗氧化能力的影响饲喂关防风多糖后,提高了肉仔鸡的抗氧化酶活力。SDP组与CON组相比:胸肌中总抗氧化能力（T-AOC）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;心肌中超氧化物歧化酶（SOD）活力;肝脏中T-AOC和GSH-Px活力;血清中T-AOC、GSH-Px、SOD和过氧化氢酶（CAT）活力均显著升高（P＜0.05）。饲喂关防风多糖后,肉仔鸡胸肌、肝脏和血清中MDA含量均显著降低（P＜0.05）。（3）SDP对DEX诱导氧化应激肉仔鸡抗氧化能力的影响注射DEX后,除了心肌中CAT酶受DEX活力影响并不显著外（P＞0.05）,其余各组织中各抗氧化指标均呈现出显著降低;MDA水平表现出显著升高（P＜0.05）。表明肌肉注射DEX成功诱导了肉仔鸡的氧化应激。饲喂不同剂量关防风多糖的肉仔鸡的抗氧化性能产生重要影响。其中:SDPHD组除心肌中CAT活力与DEX组差异不显著外（P＞0.05）,其余各组织中抗氧化酶活力均显著高于DEX组;MDA含量显著低于DEX组（P＜0.05）。SDPMD组肉仔鸡胸肌中SOD,心肌中GSH-Px、SOD,肝脏中T-AOC、SOD、CAT,血清中SOD、CAT活力均显著高于DEX组。胸肌、心肌和血清中MDA含量显著低于DEX组（P＜0.05）。SDPLD组肉仔鸡心肌中GSH-Px,肝脏中T-AOC、SOD和血清中SOD酶活力均显著高于DEX组,心肌和血清中MDA含量显低于DEX组（P＜0.05）。通过趋势性分析结果可知,以CON组抗氧化指标为母序列,其余各组为子序列求解灰色关联度。并将关联度进行规范化处理,得到排序结果为:SDPMD组＞SDP组＞SDPHD组＞DEX组＞SDPLD组。表明SDPMD组抗氧化指标的变化趋势与CON组更为一致,优于SDP组和SDPHD组。通过对造模时间及多糖剂量的双因素方差分析,可知造模时间及多糖剂量的交互作用可显著影响肉仔鸡胸肌中CAT酶和肝脏中SOD酶的活力（P＜0.05）。表明上述指标,随着多糖的饲喂剂量的升高,在提高酶活力的同时也缩短了氧化应激的时间。综合考虑显著性和趋势性分析结果,推荐关防风多糖的适宜添加剂量为500～1000 mg/kg。

关键词：关防风肉仔鸡关防风多糖工艺参数抗氧化性能氧化应激模型

氧化应激影响肉仔鸡肉品质的主要MAPK信号转导通路

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氧化应激影响肉仔鸡肉品质的主要MAPK信号转导通路

作者：王成中国农业科学院

学位级别：硕士

为了研究氧化应激影响肉仔鸡肉品质的主要MAPK信号转导通路,论文分为肉仔鸡胸肌骨骼肌卫星细胞氧化应激模型优化,氧化应激状态下起主要作用的MAPK信号通路的筛选,抗氧化物质对信号通路的作用及维生素C和茶多酚对慢性应激条件下肉仔鸡生... 详细信息

为了研究氧化应激影响肉仔鸡肉品质的主要MAPK信号转导通路,论文分为肉仔鸡胸肌骨骼肌卫星细胞氧化应激模型优化,氧化应激状态下起主要作用的MAPK信号通路的筛选,抗氧化物质对信号通路的作用及维生素C和茶多酚对慢性应激条件下肉仔鸡生产性能的影响及其MAPK通路四个部分,采用细胞模型和动物应激试验相结合的方法,研究了氧化应激时MAPK信号通路的改变对鸡肉品质的影响机理。现分别摘要如下:试验一肉仔鸡胸肌卫星细胞氧化应激模型的优化【目的】以地塞米松(DEX)处理肉仔鸡胸肌卫星细胞(SCs),筛选DEX的最佳作用时间和浓度,以优化肉仔鸡卫星细胞的氧化应激模型。【方法】将体外培养的肉仔鸡胸肌SCs按DEX处理浓度(0、0.03、0.06、0.12、0.24、0.48和0.96 mg/ml)分为7组,分别测定培养不同时间(6 h、12 h、24 h和48 h)点SCs的存活率(MTT法),细胞及培养液丙二醛(MDA)、氧自由基(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽硫转酶(GST)含量或活性。【结果】随DEX浓度升高,SCs中MDA和ROS含量极显著升高(P氧化应激,可以作为肉仔鸡胸肌卫星细胞的氧化应激模型。试验二肉仔鸡卫星细胞氧化应激时的主要MAPK信号通路【目的】利用试验一确定的SCs氧化应激模型,筛选MAPK信号系统中起关键作用的通路。【方法】体外培养的SCs分别接受如下处理:DEX、p38抑制剂、DEX + p38抑制剂、JNK抑制剂、DEX + JNK抑制剂、ERK5抑制剂、DEX + ERK5抑制剂、ERK1/2抑制剂、DEX + ERK 1/2抑制剂,以及不做任何处理的对照组;所有含有抑制剂的处理,均先用该抑制剂处理30 min,弃培养基,再按设计分别加入含DEX的培养基或正常培养基继续处理24 h。而后,分别测定细胞培养液中MDA、ROS、SOD和GST含量或活性;同时采用RT-PCR法检测通路蛋白及SOD和GST基因的表达。【结果】单独抑制剂处理组SCs中MDA和ROS均显著低于DEX处理(P0.05)。单独抑制剂处理组SCs中SOD和GST活性均显著高于DEX处理组(P0.05)。DEX能抑制SOD和GST基因的表达,抑制率高于37%;与抑制ERK5和ERK1/2通路不同,抑制p38MAPK和JNK通路后,DEX对SOD和GST基因的表达无明显抑制作用。【结论】研究揭示,在DEX诱导肉仔鸡胸肌SCs产生氧化应激过程中,p38MAPK和JNK通路起着关键作用。试验三氧化应激条件下抗氧化物质对p38MAPK和JNK通路的调节作用【目的】探讨肉仔鸡胸肌SCs氧化应激时,抗氧化物质(维生素C(VC)、维生素E(VE)、茶多酚(TP)、大豆黄酮(DZ)和吡咯喹啉醌(PQQ))对p38及JNK信号通路的作用。【方法】将培养的肉仔鸡胸肌SCs分为12个处理(对照、DEX、p38抑制剂、p38抑制剂+ DEX、JNK抑制剂、JNK抑制剂+ DEX、VC + VE + DEX、VC + DEX、VE + DEX、TP+DEX、DZ + DEX和PQQ + DEX),分别测定SCs培养基中MDA、ROS、SOD和GST含量或活性,并检测MEK3和MEK4基因表达及抗氧化酶基因表达。【结果】与DEX处理相比,所有抗氧化物质处理均显著降低了SCs中MDA与ROS的产量(P氧化物质处理组SOD和GST活性极显著地高于DEX处理组(P<0.

关键词：肉仔鸡氧化应激模型 p38MAPK JNK通路 VC TP

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地西泮保护黑色素细胞氧化损伤的作用及机制

常州大学学报（自然科学版） 2023年第3期35卷 85-92页

作者：张锡梅瞿琳孟朵邹坤吕金鹏常州大学药学院江苏常州213164

构建了小鼠黑色素细胞B16F10的氧化应激模型,研究了地西泮对B16F10细胞氧化损伤的保护作用及相关机制。选取生长状态良好的B16F10细胞,采用细胞活力实验(MTT)确定氧化应激造模的双氧水浓度和地西泮的合适剂量范围,通过荧光检测验证地西... 详细信息

构建了小鼠黑色素细胞B16F10的氧化应激模型,研究了地西泮对B16F10细胞氧化损伤的保护作用及相关机制。选取生长状态良好的B16F10细胞,采用细胞活力实验(MTT)确定氧化应激造模的双氧水浓度和地西泮的合适剂量范围,通过荧光检测验证地西泮对B16F10细胞氧化损伤的保护作用,采用免疫蛋白印迹方法(Western blot,WB)进一步探究地西泮产生保护作用的上游通路机制。实验结果发现,地西泮能够显著逆转细胞的氧化损伤,恢复细胞活力,升高应激状态下抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达,降低促凋亡蛋白Bax(Bcl2-Associated X)的水平,最终保护氧化应激状态下的B16F10细胞。

关键词：氧化应激模型地西泮抗凋亡保护机制信号通路

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补阳还五精简方的体外筛选及体内验证研究

中国中医药信息杂志 2017年第2期24卷 49-54页

作者：张秀丽孟盼向韵雷昌刘芳黄丹蔡川蔡光先王宇红湖南中医药大学湖南长沙410007 中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地湖南长沙410007

目的筛选补阳还五精简方的最佳配伍,并进行验证。方法采用H2O2诱导建立PC12细胞氧化应激模型。考察不同浓度0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.5 mg/m L补阳还五汤对体外氧化应激模型细胞的保护作用,确定最佳作用浓度。采用正交试验设计,将补... 详细信息

目的筛选补阳还五精简方的最佳配伍,并进行验证。方法采用H2O2诱导建立PC12细胞氧化应激模型。考察不同浓度0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.5 mg/m L补阳还五汤对体外氧化应激模型细胞的保护作用,确定最佳作用浓度。采用正交试验设计,将补阳还五汤各单味药随机配伍分成补阳还五汤不同拆方组及对照组(仅加细胞培养基)、正常组(无H2O2和药物处理)、模型组,考察对PC12细胞的保护作用,筛选精简方,确定精简方各单味药的配伍比例,MTT法测定各组细胞存活率。采用大脑中动脉线栓法复制局灶性脑缺血模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和精简方高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物灌胃,验证筛选结果。结果与其他拆方组比较,黄芪+川芎+地龙对PC12细胞的保护作用最佳(P模型组比较,补阳还五汤组及精简方各剂量组均能改善模型大鼠大脑皮层梗死面积、降低脑组织水肿程度(P<0.05),且以精简方中剂量组最佳。结论补阳还五精简方最佳配伍为黄芪、川芎、地龙,其比例为10∶3∶1。

关键词：补阳还五汤拆方局灶性脑缺血模型氧化应激模型大鼠

过氧化氢诱导人肝癌细胞产生氧化应激最佳作用浓度的研究

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粮油食品科技 2011年第1期19卷 62-64页

作者：韩飞周孟良国家粮食局科学研究院北京100037

不同浓度过氧化氢作用人肝癌细胞(HepG2)4 h后,用单细胞凝胶电泳技术测定DNA损伤状况,分光光度法测定MDA含量、SOD及GSH-Px活性,研究过氧化氢的最佳作用浓度,构建体外氧化应激细胞模型。实验结果表明,过氧化氢的最佳作用浓度为100μmol... 详细信息

不同浓度过氧化氢作用人肝癌细胞(HepG2)4 h后,用单细胞凝胶电泳技术测定DNA损伤状况,分光光度法测定MDA含量、SOD及GSH-Px活性,研究过氧化氢的最佳作用浓度,构建体外氧化应激细胞模型。实验结果表明,过氧化氢的最佳作用浓度为100μmol/L,作用细胞的时间选择4 h,可以成功构建以过氧化氢为氧化应激诱导剂的HepG2细胞体外氧化应激模型。

关键词：过氧化氢 HepG2细胞氧化应激模型

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脂联素对高糖环境心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

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医学研究杂志 2012年第6期41卷 67-70页

作者：李美蓉李兴山西医科大学第二临床医学院内分泌科太原030001

目的通过高糖环境培养人心肌细胞(human cardiac myocytes,HCM)建立心肌细胞氧化应激模型,观察脂联素(ad-iponectin,ADPN)对心肌细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对心肌细胞可能的保护机制。方法将体外培养的人心肌细胞分... 详细信息

目的通过高糖环境培养人心肌细胞(human cardiac myocytes,HCM)建立心肌细胞氧化应激模型,观察脂联素(ad-iponectin,ADPN)对心肌细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对心肌细胞可能的保护机制。方法将体外培养的人心肌细胞分为3组:对照组、高糖组、高糖+脂联素组,分别干预24、48、72h。在倒置显微镜下观察心肌细胞形态变化,采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量。用代巴比妥酸法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,用荧光定量RT-PCR法测定衔接蛋白(adaptinP66Shc)、血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,Ho-1)在各个时间点上的表达,通过流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率。结果与对照组相比,高糖组SOD含量显著下降,MDA含量显著上升(P氧化能力,减少氧化应激反应,减少细胞凋亡,可能对糖尿病心肌细胞起保护作用。

关键词：氧化应激模型人心肌细胞高糖环境脂联素凋亡细胞形态变化显微镜下观察体外培养

分子定量分析技术筛查天然抗氧化剂拮抗胰岛素抵抗的分子靶点

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分子定量分析技术筛查天然抗氧化剂拮抗胰岛素抵抗的分子靶点

槲皮素对苯肼致大鼠血管功能紊乱和氧化应激的保护作用

第八届全国生物医学体视学学术会议、第十一届全军军事病理学学术会议、第七届全军定量病理学学术会议

作者：张桂珍杜珍武郑锦花王玲玲吉林大学中日联谊医院中心研究室

前言近年来功能基因组计划的发展推动了定量分子病理学体系的形成与发展。分子病理学主要是探讨基因结构与功能改变与疾病发生发展的关系,从蛋白质与核酸水平寻找疾病的相关基因。分子病理学的出现使人们得以在蛋白质和核酸等分子水平... 详细信息

前言近年来功能基因组计划的发展推动了定量分子病理学体系的形成与发展。分子病理学主要是探讨基因结构与功能改变与疾病发生发展的关系,从蛋白质与核酸水平寻找疾病的相关基因。分子病理学的出现使人们得以在蛋白质和核酸等分子水平上研究疾病的病因、发病机理及其发生发展规律,为临床疾病的分子诊断与分型及其建立在分子分型基础上的个体化治疗提供科学依据。但目前分子病理学还处在很

关键词：胰岛素抵抗信号转导通路 resistin 分子靶点氧化应激模型定量分析技术细胞保护作用天然抗氧化剂

来源： cnki会议评论

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国外医药（植物药分册） 2008年第1期23卷 29-29页

作者：阳丽梅