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生物学杂志 2014年第5期31卷 93-98页

作者：任亮张洪斌胡雪芹牛博艺合肥工业大学制药工程系合肥230009

右旋糖酐蔗糖酶是一种以蔗糖为唯一底物,将蔗糖分子中D-葡萄糖基催化转移到受体分子上的葡萄糖基转移酶。利用右旋糖酐蔗糖酶的转糖基作用,以蔗糖为葡萄糖糖基供体,槲皮素为糖基受体,对槲皮素糖苷的酶法合成进行了探索。通过对该酶催化... 详细信息

右旋糖酐蔗糖酶是一种以蔗糖为唯一底物,将蔗糖分子中D-葡萄糖基催化转移到受体分子上的葡萄糖基转移酶。利用右旋糖酐蔗糖酶的转糖基作用,以蔗糖为葡萄糖糖基供体,槲皮素为糖基受体,对槲皮素糖苷的酶法合成进行了探索。通过对该酶催化反应体系、催化反应条件及产物分析的研究,结果表明:在25°C下,右旋糖酐蔗糖酶能够在30%DMSO-70%乙酸-乙酸钙(0.02 mol/L,pH值5.4)的反应体系中催化合成一种槲皮素葡萄糖苷,在这个反应体系下,以10%的蔗糖作为糖基供体,槲皮素为糖基受体,右旋糖酐蔗糖酶活力为40 U/mL,转速为150 r/min,槲皮素糖苷的转化率最高,可达39.5%。通过质谱分析确定是一种槲皮素单糖苷,分子量为464。该研究结果为黄酮类物质的糖基化修饰奠定了基础。

关键词：右旋糖酐蔗糖酶转糖基槲皮素槲皮素葡萄糖苷

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基于右旋糖酐蔗糖酶的槲皮素糖基化研究

基于右旋糖酐蔗糖酶的槲皮素糖基化研究

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作者：任亮合肥工业大学

学位级别：硕士

黄酮类化合物广泛存在于自然界中，具有抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射和免疫调节等诸多活性，已成为国内外天然药物开发利用研究的热点。由于大多数黄酮苷元水相中溶解度低，限制了其制剂的开发。而糖基化修饰，在提高黄酮... 详细信息

黄酮类化合物广泛存在于自然界中，具有抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射和免疫调节等诸多活性，已成为国内外天然药物开发利用研究的热点。由于大多数黄酮苷元水相中溶解度低，限制了其制剂的开发。而糖基化修饰，在提高黄酮类化合物水溶性的同时，还可以改善其生理活性。本论文利用右旋糖酐蔗糖酶的转糖基作用，以蔗糖为葡萄糖糖基供体，槲皮素为糖基受体，对槲皮素葡萄糖苷的酶法合成进行了探索。论文首先对酶催化反应体系进行了研究，确定了30%DMSO-70%乙酸-乙酸钙缓冲液（0.02mol/L，pH=5.4）作为酶催化反应体系，在这个反应体系下，不仅维持了一定的酶活力，还解决了槲皮素溶解度较低的问题。然后是对酶催化产物的分离纯化，通过醇沉，萃取，选择AB-8大孔树脂柱和Sephadex LH-20柱相结合的工艺对槲皮素葡萄糖苷进行分离纯化，通过液相对收集到的目标产物进行检测，纯度达98%以上。接着是对酶催化反应条件的研究，通过考察反应时间、反应转速、酶活力、反应体积、蔗糖浓度对槲皮素葡萄糖苷转化率的影响。确定了酶催化合成槲皮素葡萄糖苷的最佳条件，槲皮素葡萄糖苷的转化率从28%提高到39.5%。优化后的工艺参数是：在25℃下，30%DMSO-70%缓冲液体系中，以10%的蔗糖为糖基供体，槲皮素为糖基受体，右旋糖酐蔗糖酶活力为40U/ml，转速为150r/min，反应24h，槲皮素葡萄糖苷的转化率最高，可达39.5%。最后通过质谱和核磁共振氢谱对槲皮素葡萄糖苷的结构进行了推测，确定了目标产物是一种槲皮素单糖苷，分子量是464，其最有可能的结构是槲皮素-4'-O-ɑ-D-吡喃葡萄糖苷。论文的研究结果为黄酮类物质的糖基化修饰奠定了基础。

关键词：右旋糖酐蔗糖酶糖基化槲皮素槲皮素葡萄糖苷

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