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增加植酸酶基因appA-m的拷贝提高其在巴斯德毕赤酵母的表达量

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生物工程学报 2006年第4期22卷 528-533页

作者：罗会颖黄火清柏映国王亚茹杨培龙孟昆袁铁铮姚斌中国农业科学院饲料研究所北京100081

为了进一步提高植酸酶的发酵效价,降低植酸酶生产成本,对毕赤酵母表达载体pGAPZα-A进行了改造。将表达载体pPIC9的AOX1启动子序列引入pGAPZα-A,使之成为甲醇可诱导型表达载体pAOXZα,插入植酸酶基因appA-m后得到重组载体pAOXZα-appA-... 详细信息

为了进一步提高植酸酶的发酵效价,降低植酸酶生产成本,对毕赤酵母表达载体pGAPZα-A进行了改造。将表达载体pPIC9的AOX1启动子序列引入pGAPZα-A,使之成为甲醇可诱导型表达载体pAOXZα,插入植酸酶基因appA-m后得到重组载体pAOXZα-appA-m。以染色体上带有一个拷贝的appA-m基因、发酵效价可达到7.5×106IU/mL发酵液的重组酵母菌株74#为受体菌进行转化,在该重组菌株的染色体上的另一位点整合含有植酸酶基因的表达盒,经筛选到高表达植酸酶的重组子。通过PCR进行验证,植酸酶基因被整合到重组酵母的染色体上,且受体菌中原有的植酸酶基因结构未改变。重组菌在5L发酵罐经甲醇诱导120h植酸酶蛋白表达量达到4mg/mL发酵液,酶活性(发酵效价)达到1.2×107IU/mL发酵液以上,较含单拷贝植酸酶基因的受体菌株表达量有较大程度提高。PCR检测及表达量分析证明改良的菌株具有很好的遗传稳定性和表达稳定性。

关键词：植酸酶载体改造拷贝数增加高效表达

植酸酶对家禽日粮中植酸与营养物质代谢关系的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第9期35卷 19-24页

作者：陆文总高玉鹏杨亚丽王文杰穆淑琴西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 商洛学院生物医药工程系陕西商洛726005 天津市畜牧兽医研究所天津300112

为了探讨添加植酸酶后家禽日粮中植酸含量与营养物质代谢的关系,选用爱拔益加成年公鸡24只,随机分为6组,每组4个重复,设计日粮的植酸含量分别为0,4,6,8,10和12 g/kg,以日粮中未添加植酸酶作为对照组,研究日粮中添加植酸酶(处理组)对磷... 详细信息

为了探讨添加植酸酶后家禽日粮中植酸含量与营养物质代谢的关系,选用爱拔益加成年公鸡24只,随机分为6组,每组4个重复,设计日粮的植酸含量分别为0,4,6,8,10和12 g/kg,以日粮中未添加植酸酶作为对照组,研究日粮中添加植酸酶(处理组)对磷平均真消化率、粗蛋白(CP)和赖氨酸表观消化率及表观代谢能的影响。结果表明,日粮的植酸含量为4,6,8,10,12 g/kg时,处理组与对照组相比,磷(P)的平均真消化率分别提高了3.03%,10.12%(P植酸含量呈负线性关系。由试验结果可知当日粮植酸含量为10 g/kg时,营养物质利用率提高幅度最大。

关键词：家禽日粮植酸植酸酶营养物质代谢

饲粮中锌、锰和植酸酶水平对肉鸡生长性能、血清生化指标以及血清中锌、锰含量的影响

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动物营养学报 2020年第5期32卷 2397-2406页

作者：侯爽刘娇王昕陟沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 沈阳波音饲料有限公司沈阳110141

本试验旨在研究饲粮中锌、锰和植酸酶水平对肉鸡生长性能、血清生化指标以及血清中锌、锰含量的影响,探究饲粮中添加植酸酶是否能提高锌、锰的吸收利用率,从而降低饲粮中锌、锰的添加量。选取14日龄体重接近、健康的爱拔益加(AA)肉鸡696... 详细信息

本试验旨在研究饲粮中锌、锰和植酸酶水平对肉鸡生长性能、血清生化指标以及血清中锌、锰含量的影响,探究饲粮中添加植酸酶是否能提高锌、锰的吸收利用率,从而降低饲粮中锌、锰的添加量。选取14日龄体重接近、健康的爱拔益加(AA)肉鸡696只,随机分成6个组,每组12个重复,每个重复10只鸡。试验采用2×3双因子试验设计,分别在基础饲粮中添加2个水平的植酸酶(0和2000 FTY/kg)和3个水平的锌、锰组合(30 mg/kg锌+40 mg/kg锰、60 mg/kg锌+70 mg/kg锰、90 mg/kg锌+100 mg/kg锰),共组成6种饲粮。试验期为28 d。结果表明:1)饲粮中添加植酸酶极显著提高了14~28日龄肉鸡的平均日增重(P=0.001),显著提高了29~42日龄肉鸡的平均日增重(P=0.038),显著降低了14~28日龄肉鸡的料重比(P=0.022)。2)饲粮中添加植酸酶显著提高了肉鸡血清中谷丙转氨酶(ALT)和总超氧化物歧化酶(T SOD)活性(P=0.027、P=0.037),极显著提高了血清中谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)和锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)活性(P=0.003、P=0.001、P=0.007)。饲粮中添加锌、锰显著降低了肉鸡血清中尿素氮(UN)含量(P=0.041)。植酸酶和锌、锰的交互作用显著或极显著影响肉鸡血清中CPK和T SOD活性(P=0.010、P=0.006)。3)饲粮中添加锌、锰显著提高了肉鸡血清中锌含量(P=0.033),饲粮中添加植酸酶显著提高了肉鸡血清中锌含量(P=0.047)。综上所述,饲粮中添加植酸酶能够提高肉鸡生长性能和血清抗氧化酶活性。饲粮中添加锌、锰有利于机体蛋白质的合成。饲粮中添加植酸酶并没有达到降低锌、锰添加量的目的。

关键词：植酸酶锌锰生长性能血清生化指标

表面展示表达植酸酶的重组酿酒酵母构建及酒精发酵

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生物工程学报 2015年第12期31卷 1700-1710页

作者：肖艳陈献忠沈微杨海泉樊游工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学生物工程学院生物资源与生物能源研究中心江苏无锡214122

以淀粉为原料的同步糖化发酵是目前乙醇生产的主要途径之一。然而原料中含有的植酸不仅影响酒精发酵效率,而且也会导致环境中难以被植物吸收的磷含量的增加,加剧环境污染。将来源于大肠杆菌的植酸酶基因与酵母编码α-凝集素C端编码序列... 详细信息

以淀粉为原料的同步糖化发酵是目前乙醇生产的主要途径之一。然而原料中含有的植酸不仅影响酒精发酵效率,而且也会导致环境中难以被植物吸收的磷含量的增加,加剧环境污染。将来源于大肠杆菌的植酸酶基因与酵母编码α-凝集素C端编码序列连接并置于α-因子分泌信号肽下游,构建植酸酶表面展示表达重组载体pMGK-AG-phy并转化工业酿酒酵母,成功获得了在细胞表面锚定表达植酸酶的重组菌PHY。重组酵母的植酸酶表达水平达到6.4 U/g(菌体湿重),其最适温度为55℃,最适pH 4.0,在pH 3.5–4.5范围内具有较高的活性。以玉米粉为原料的同步糖化发酵实验表明,重组酵母PHY的生长速度高于出发菌株,同时酒精产量相较于出发菌株提高了3.7%。更为重要的是发酵后酒糟中植酸磷含量与对照相比降低了91%。构建的表面展示表达植酸酶的重组工业酿酒酵母能够有效降低植酸含量,提高了酒糟的利用价值,减少磷排放,对燃料酒精的环境友好生产具有重要的借鉴意义。

关键词：酿酒酵母表面展示植酸酶燃料酒精 α-凝集素

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植酸酶基因工程及开发利用研究

食品科学 2003年第1期24卷 155-159页

作者：廖明星顾振新南京农业大学食品科技学院南京210095

植酸酶是一类特殊的酸性磷酸酶,能够水解植酸最终释放出无机磷。本文综述了植酸酶基因工程及开发利用研究的最新进展,并以研究前景提出展望。

关键词：植酸酶基因工程开发利用

商品植酸酶及饲粮中植酸酶活性测定的影响因素及变异度

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动物营养学报 2020年第11期32卷 5397-5405页

作者：吴宇轩苏艳芳赵峰张虎徐二华赵威李浙烽贺喜湖南农业大学动物科技学院长沙410128 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 杭州康德权饲料有限公司包膜饲料添加剂省级重点农业企业研究院杭州311107

本试验旨在探讨商品植酸酶及饲粮中植酸酶活性测定的影响因素及变异度。试验分为4个部分。第1部分:考察国标方法中稀释缓冲液类型及溶液显色后离心速度对植酸酶活性测定值的影响。采用2×3两因素完全随机设计,稀释液分别为缓冲液1(乙酸... 详细信息

本试验旨在探讨商品植酸酶及饲粮中植酸酶活性测定的影响因素及变异度。试验分为4个部分。第1部分:考察国标方法中稀释缓冲液类型及溶液显色后离心速度对植酸酶活性测定值的影响。采用2×3两因素完全随机设计,稀释液分别为缓冲液1(乙酸/乙酸钠缓冲液)和缓冲液2(乙酸/乙酸钠+曲拉通X-100+牛血清白蛋白),显色静置10 min后离心速度分别设为3 000、5 000和8 000 r/min。第2部分:考察植酸酶的稀释倍数对植酸酶活性测定值的影响。商品植酸酶的稀释倍数分别设为150、200、250和300倍;饲粮中植酸酶的稀释倍数分别设为5、10和15倍。第3部分:考察饲料原料对植酸酶活性测定的干扰。采用单样本比较设计,在每千克玉米、豆粕、小麦麸、菜籽粕、棉籽粕中添加4 g植酸酶。第4部分:采用单因素完全随机设计,测定14 d内商品植酸酶及饲粮中植酸酶活性的变异。结果表明:1)使用缓冲液1时,饲粮中植酸酶活性的测定值在3 000、5 000和8 000 r/min间无显著差异(P>0.05);而使用缓冲液2时,饲粮中植酸酶活性的测定值随离心速度的增加而显著升高(P植酸酶活性的测定值先升高后下降(P植酸酶活性测定值呈线性下降(P植酸酶后,玉米中植酸酶总活性的实测值显著低于计算值(P植酸酶总活性的实测值显著高于计算值(P植酸酶活性测定值日内变异系数为3.13%,日间变异系数为6.11%,总变异系数为6.68%。饲粮中植酸酶活性测定值的日内变异系数为1.56%,日间变异系数为3.96%,总变异系数为4.19%。由此可见,乙酸/乙酸钠更适合作为植酸酶活性测定中的稀释液,饲粮中植酸酶活性的测定值受离心速度及稀释倍数的影响,而商品植酸酶的活性测定值仅受稀释倍数的影响。饲料原料明显地干扰了植酸酶活性的测定。饲粮中植酸酶活性测定值的变异程度低于商品植酸酶。

关键词：植酸酶影响因素变异

植酸酶对斑点叉尾鮰脊椎形态和非特异性免疫相关酶活力的影响

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2014年第1期40卷 94-102页

作者：华雪铭王世忠陈瑶琴钟国防周洪琪上海海洋大学水产与生命学院/农业部淡水水产种质资源重点实验室/上海市水产养殖工程技术研究中心上海201306

在全植物基础饲料中添加不同水平的植酸酶,研究植酸酶对斑点叉尾鮰脊椎形态和非特异性免疫功能的影响.设6个等氮(37.50%粗蛋白)等能(17.00kJ/g总能)的实验组,分别是阴性对照(negative control,NC)组:在基础饲料中添加1%无机磷(CaHPO4);... 详细信息

在全植物基础饲料中添加不同水平的植酸酶,研究植酸酶对斑点叉尾鮰脊椎形态和非特异性免疫功能的影响.设6个等氮(37.50%粗蛋白)等能(17.00kJ/g总能)的实验组,分别是阴性对照(negative control,NC)组:在基础饲料中添加1%无机磷(CaHPO4);阳性对照(positive control,PC)组:NC组再添加1%无机磷(CaHPO4);4个植酸酶组:NC组中添加4种不同水平的植酸酶(250,500,1 000,2 000U/kg).每组设5个平行,对斑点叉尾鮰[(5.78±0.07)g/尾]进行为期60d的饲喂实验.结果表明:与NC组相比,添加植酸酶组增质量率显著提高(P植酸酶添加水平为1 000U/kg时,增质量率显著高于PC组(P植酸酶组鱼体蛋白保留率显著高于NC组(P0.05);随着植酸酶添加水平的提高,鱼体磷保留率显著提高(P植酸酶添加水平为500U/kg时,肝溶菌酶(lysozyme,LSZ)活力显著高于NC组(P植酸酶组头肾LSZ活力显著高于其他各组(P植酸酶添加水平大于1000U/kg时,头肾LSZ活力显著高于PC组(P酶(superoxide dismutase,SOD)活力显著高于其他组(P植酸酶添加水平为500 U/kg时,肝碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)的活力与PC组无显著差异(P>0.05).综上所述,植酸酶的最适添加水平为1 000U/kg,在全植物饲料中添加植酸酶能促进斑点叉尾鮰的生长和鱼体蛋白保留,并能预防脊椎畸形和提高鱼体非特异性免疫相关酶活力.

关键词：植酸酶斑点叉尾鮰生长反应蛋白保留率磷保留率脊椎形态非特异性免疫相关酶

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植酸酶产生菌的抗性突变体的筛选

菌物系统 2000年第1期19卷 139-141页

作者：黄遵锡慕跃林张克昌云南师范大学生命科学系 650092 无锡轻工大学生物工程学院无锡214036

植酸酶产生菌原始出发菌株,黑曲霉(Aspergillus niger)G2株,其在液体发酵时,其酶活可达2.6IU/ml发酵液,但离工业化生产相差甚远,必须进行菌株改良。诱变育种的方法及策略的设计必须建立在对目的菌株生理及其有关代谢途径的深入了解的基... 详细信息

植酸酶产生菌原始出发菌株,黑曲霉(Aspergillus niger)G2株,其在液体发酵时,其酶活可达2.6IU/ml发酵液,但离工业化生产相差甚远,必须进行菌株改良。诱变育种的方法及策略的设计必须建立在对目的菌株生理及其有关代谢途径的深入了解的基础上,菌株基因发生突变后常伴随着某些形态和生理特征的改变,如出现分泌色素,对初级代谢及次级代谢产物的调节作用解除,出现对某些抗生素的抗性和形成营养缺陷型等,而这些特征的出现常伴随着其产量的提高,并且两者具有一定的理论联系。因此这些特征常用于富集目的菌…

关键词：植酸酶抗性突变体黑曲霉产酶菌选育产量

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耐热植酸酶突变体的筛选及性质研究

中国生物工程杂志 2021年第2期41卷 30-37页

作者：陈中伟郑璞陈鹏程吴丹江南大学生物工程学院无锡214112

目的:对大肠杆菌Escherichia coli植酸酶基因进行定向进化,获得热稳定性提高的植酸酶突变体。方法:利用易错PCR技术和96微孔板高通量筛选方法获得突变体基因,并对突变酶进行异源表达、纯化及性质研究。结果:通过筛选获得3株热稳定性明... 详细信息

目的:对大肠杆菌Escherichia coli植酸酶基因进行定向进化,获得热稳定性提高的植酸酶突变体。方法:利用易错PCR技术和96微孔板高通量筛选方法获得突变体基因,并对突变酶进行异源表达、纯化及性质研究。结果:通过筛选获得3株热稳定性明显提高的植酸酶突变体APPA1、APPA2、APPA3。酶学性质分析结果表明,3个突变体分子量均约为55kDa,最适pH均为4.5,与野生型无明显差别,热稳定性较野生型均有显著提高,其中突变体APPA3的最适温度为65℃,较野生酶提高5℃,在90℃处理10min后保留50%的酶活。酶的三维结构模拟显示,5个突变位点在植酸酶整体结构上均引入新氢键。结论:通过定向进化获得热稳定性提高的大肠杆菌Escherichia coli植酸酶突变体,对植酸酶的工业应用和研究植酸酶结构与功能关系具有重要意义。

关键词：植酸酶易错PCR 热稳定性毕赤酵母