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根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和转基因植株的高频再生

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Acta Botanica Sinica 2000年第11期42卷 1172-1178页

作者：黄健秋卫志明安海龙徐淑平章冰中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室上海200032

利用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导的转化方法对 4个粳稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)品种和 2个籼稻 (O .sativassp .indica)品种进行了转化。在对影响根癌土壤杆菌转化水稻效率的多种因素进行比较研究后 ,建立了根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和再生系统。将水稻成熟胚和未成熟胚来源的愈伤组织用根癌土壤杆菌EHA10 1/pGIH感染后 ,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生频率最高达 5 5 .1% (籼稻 )和 85 .2 % (粳稻 ) ,转化植株产生频率最高达 37.8% (籼稻 )和 6 9.0 % (粳稻 )。GUS染色、转基因植株总DNA的PCR和Southern杂交检测等结果表明 ,T_DNA上的外源基因已整合进了转基因植物基因组中。对转基因T1代水稻植株的遗传分析结果证明外源基因能稳定遗传给后代 ,且大多数株系的分离比符合 3∶1。该转化系统的建立为将外源有用基因导入水稻并高效稳定地表达奠定了基础。

关键词：水稻根癌土壤杆菌遗传转化转基因植株

根癌土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶获得转基因植株

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生物工程学报 1996年第1期12卷 34-39页

作者：周冀明卫志明许智宏刘世贵罗鹏中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室四川大学生物工程系四川大学生物系成都610064

采用诸葛菜子叶为材料,在MS+BA3mg/L+NAA0.2mg/L培养基上诱导芽的再生,1/2MS+IBA0.03mg/L上诱导生根,获得完整再生植株,建立了诸葛菜组织培养高频再生系统,其再生率可达100％。采用土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶,在附加一定量的氨苄青霉... 详细信息

采用诸葛菜子叶为材料,在MS+BA3mg/L+NAA0.2mg/L培养基上诱导芽的再生,1/2MS+IBA0.03mg/L上诱导生根,获得完整再生植株,建立了诸葛菜组织培养高频再生系统,其再生率可达100％。采用土壤杆菌介导转化诸葛菜子叶,在附加一定量的氨苄青霉素、头孢霉素和卡那霉素的相应培养基上进行筛选,进而培养出再生成苗。获得完整植株,经GUS和NPTⅡ酶活测定,以及Southern blot分析,证实为转基因植株。转化子叶的芽再生率为51％,获得完整转基因植株的转化率为5.53％。在国内外首次建立了以根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)为载体,诸葛菜子叶为受体的遗传操作系统。

关键词：诸葛菜子叶转基因植株根癌土壤杆菌

根癌土壤杆菌接合转移和生物型特性的遗传学研究

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微生物学报 1989年第3期29卷 187-194页

作者：苏鸿声相望年戴秀玉陆德如中国科学院微生物研究所第二军医大学分子遗传学教研室

用转座子Tn5-Mob和辅助诱动转移质粒R 68.45将根癌土壤杆菌(Agrobactcrium tumefaciens)生物型(Biotype)Ⅱ和Ⅲ接合转移到具三重缺陷的生物型Ⅰ的菌株中,获得了七组转移接合子。通过对其中六组转移接合子生物型分类的主要生理生化特性(3... 详细信息

用转座子Tn5-Mob和辅助诱动转移质粒R 68.45将根癌土壤杆菌(Agrobactcrium tumefaciens)生物型(Biotype)Ⅱ和Ⅲ接合转移到具三重缺陷的生物型Ⅰ的菌株中,获得了七组转移接合子。通过对其中六组转移接合子生物型分类的主要生理生化特性(3-酮基乳糖反应、石蕊牛奶反应、赤藓糖醇产酸、乙醇产酸、松三糖产酸、粘酸产碱及在New和Keer的选择性生长培养基上能否生长等)测试,发现这些性状通过接合转移而被转移到受体菌中。

关键词：根癌土壤杆菌接合转移生物型

根癌土壤杆菌DK-24生产辅酶Q_(10)发酵培养基的优化

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第8期38卷 182-188页

作者：田玉庭岳田利袁亚宏西北农林科技大学食品科学与工程学院陕西杨凌712100

【目的】对根癌土壤杆菌(Agrobacterium tume faciens)DK-24发酵生产辅酶Q10的培养基进行优化,为辅酶Q10的生产提供技术支持。【方法】用Plackett-Burman设计法(Plackett-Burman design,P-B)筛选对辅酶Q10产量影响较大的主要因子,采用... 详细信息

【目的】对根癌土壤杆菌(Agrobacterium tume faciens)DK-24发酵生产辅酶Q10的培养基进行优化,为辅酶Q10的生产提供技术支持。【方法】用Plackett-Burman设计法(Plackett-Burman design,P-B)筛选对辅酶Q10产量影响较大的主要因子,采用最陡爬坡试验逼近主要因子的最优水平,通过Box-Behnken设计,利用Design-Expert软件进行回归分析,优化确定各主要因子的最佳质量浓度。【结果】根癌土壤杆菌生产辅酶Q10的4个主要影响因子为蔗糖、玉米浆干粉(CSP)、酵母膏和对羟基苯甲酸(PHB);最陡爬坡试验、Box-Behnken设计及响应面分析表明,根癌土壤杆菌DK-24发酵生产辅酶Q10的发酵培养基中,蔗糖、CSP、酵母膏和PHB的最优质量浓度分别为46.56,22.30,13.46g/L和52.38mg/L。【结论】在优化培养基条件下,辅酶Q10产量可达24.97mg/L,较优化前提高了76.18%。

关键词：根癌土壤杆菌辅酶Q10 发酵培养基发酵条件优化

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根癌土壤杆菌新生物变种的鉴定

植物病理学报 1990年第3期20卷 195-200页

作者：任欣正罗灿辉杨国平方中达南京农业大学植保系

1982年至1984年从全国8个省市分离到7种植物上的根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)86个菌株。通过表型特征比较鉴定,结果表明,大部分菌株分别归入生物变种1,2和3。根据生理生化测定和蛋白电泳结果,毛白杨PO—9、PO—10和苹果菌... 详细信息

1982年至1984年从全国8个省市分离到7种植物上的根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)86个菌株。通过表型特征比较鉴定,结果表明,大部分菌株分别归入生物变种1,2和3。根据生理生化测定和蛋白电泳结果,毛白杨PO—9、PO—10和苹果菌株M7性状一致,另成一组,其生理生化反应和电泳图谱与生物变种1,2,3明显不同,从而提出这个种的一个新生物变种一生物变种4。生物变种4菌株的主要鉴别特性是:3—酮基乳糖反应阳性;能在37℃生长;在Schroth和New-Kerr两种选择性培养基上生长良好;石蕊牛乳试验产碱变兰色;不能利用丙二酸盐和酒石酸盐产碱。

关键词：根癌土壤杆菌生物变种寄主植物

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根癌土壤杆菌介导的咖啡转化

生物工程学报 1992年第3期8卷 255-260页

作者：冯勤杨美珠郑学勤曾宪松潘乃穟陈章良海南省华南热带作物学院生物技术实验室北京大学蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室北京大学生物系

用五种不同的根癌土壤杆菌转化咖啡栽培品种小粒种的成熟胚培养物,筛选出对咖啡侵染力较强的菌株GV3111(pTiB6S3)和A281(pTiB0542)。在无激素的MS培养基(MSD)上得到淡黄色、松脆、生长迅速的瘤性愈伤组织,继代培养4—6周后,产生大量的... 详细信息

用五种不同的根癌土壤杆菌转化咖啡栽培品种小粒种的成熟胚培养物,筛选出对咖啡侵染力较强的菌株GV3111(pTiB6S3)和A281(pTiB0542)。在无激素的MS培养基(MSD)上得到淡黄色、松脆、生长迅速的瘤性愈伤组织,继代培养4—6周后,产生大量的畸胎芽。转化体经Opine检测,分别含有特异的章鱼碱或农杆碱。GV3111转化体的DNA分子杂交结果表明,在咖啡的基因组内有T-DNA的插入。用带有GUS基因和NPT Ⅱ基因的双元载体系统pBI121/GV3111和pBI121/A281转化咖啡子叶,转化后第三天可以检测到GUS基因的瞬时表达。在含卡那霉素(Kanamyvin,Km)的MS选择培养基上,得到抗性愈伤组织,这些愈伤组织仍能检测到GUS基因的表达。

关键词：根癌土壤杆菌咖啡遗传转化

诱导根癌土壤杆菌vir区基因表达信号分子的构效研究

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Acta Botanica Sinica 1999年第11期41卷 1252-1254页

作者：许东晖许实波李宝健刘煜古练权中山大学生命科学学院广州510275 中山大学化学与化工学院广州510275

Four rice (Oryza satia L. cv. IR72) signal factors with the functions of inducing Agrobaterium tumefaciens (Smith et Townsend) Conn vir genes were constructed. They were 5, 7, 4’-trihydroxy-3’, 5’-dimethoxy-flavone (F1) and its structure analogues F2, F3 and F4. These four signal fartors were detected by Agrobacterium vir:: lzcZ fusion gene system as to compare their functions of inducing virA, virB, virC,virD, virE and virG genes. The structure characters and structure-activity relationship of these signal factors with the best inducing effects to Agrobacterium exogenous gene transformation system were defined which may provide some basic information for foreign gene transformation in rice.

关键词：水稻根癌土壤杆菌 vir基因信号分子诱导构效

抑制根癌土壤杆菌生长和转移的水稻信号分子的鉴定

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Acta Botanica Sinica 1999年第12期41卷 1283-1286页

作者：许东晖许实波李宝健刘煜黄志纾古练权中山大学生命科学学院广州510275 中山大学化学与化工学院广州510275

从水稻 (OryzasativaL .cv .IR72 )根中分离出一种高效抑制根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)生长及抑制根癌土壤杆菌在水稻细胞表面附着的水稻信号分子 :乙基 4 (邻硝基苯基 ) 3 硫代脲酸酯 (T)。该化... 详细信息

从水稻 (OryzasativaL .cv .IR72 )根中分离出一种高效抑制根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)生长及抑制根癌土壤杆菌在水稻细胞表面附着的水稻信号分子 :乙基 4 (邻硝基苯基 ) 3 硫代脲酸酯 (T)。该化合物是一种新发现的天然的硫脲化合物 ,对根癌土壤杆菌生长和根癌土壤杆菌在水稻细胞表面附着具有较强抑制作用 ,水稻对根癌土壤杆菌及其转移系统不敏感的原因之一是 :水稻中存在着对根癌土壤杆菌生长和转移具有较强抑制作用的信号分子。

关键词：水稻根癌土壤杆菌信号分子抑制作用基因表达

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根癌土壤杆菌产辅酶Q10发酵工艺的研究

根癌土壤杆菌产辅酶Q10发酵工艺的研究

作者：金赛江南大学

学位级别：硕士

辅酶Q (Coenzyme Q, CoQ),又名泛醌(Ubiquinone),广泛存在于动物、植物及微生物体内,是生物细胞呼吸链中的重要电子传递体。辅酶Q具有多种生理活性,被广泛用于药品、保健品和化妆品等领域。在所有方法中,微生物发酵法生产辅酶Q被认为是... 详细信息

辅酶Q (Coenzyme Q, CoQ),又名泛醌(Ubiquinone),广泛存在于动物、植物及微生物体内,是生物细胞呼吸链中的重要电子传递体。辅酶Q具有多种生理活性,被广泛用于药品、保健品和化妆品等领域。在所有方法中,微生物发酵法生产辅酶Q被认为是最具发展潜力的。本文针对前期研究出现的菌种衰退,对菌种的质量进行控制,并对发酵工艺进行优化。首先针对辅酶Q生产菌株中传代培养会导致菌种不稳定、产量严重下降这一普遍现象进行研究。结果发现,绿色菌株传代4次后部分逐渐转为白色,且白色菌株所占比例随传代次数增加而增加。同时在绿色菌株中细胞会发生衰颓,白色菌株中出现衰颓细胞极少,并且大小不同的菌落及菌落不同部位的细胞发生衰颓的比例也存在差异。通过发酵产量和稳定性的比较,确定了优质菌株的快速平板筛选标准:大菌落、绿色、圆心部位。同时提出保持菌种质量的措施为:传代次数控制在5代以内;定期进行菌株的分离,淘汰衰退菌株。在摇瓶水平对两阶段控制的补料分批发酵工艺进行研究,得到了最佳条件:5 g/L CaCO3控制pH;葡萄糖浓度控制在5-15 g/L;分别在30、48和66 h加入10% (v/v)新鲜发酵培养基(不含糖);发酵前50 h温度和转速分别为30oC和200 r/min;50 h后温度和转速分别为34oC和175 r/min。在此条件下,DCW、辅酶Q产量和单位细胞产量分别为15.1 g/L、228.2 mg/L和15.1 mg/g-DCW,比分批发酵分别提高了79.4%、241.2%和90.3%;发酵周期为76 h,生产强度达到3.0 mg/(L·h)。在15 L发酵罐水平,以初始发酵工艺对菌种的产量及稳定性进行验证,按标准方法筛选的菌株,产量可稳定在2100 mg/L以上,达到前期实验最高水平。同时,对两阶段控制的补料分批发酵工艺进行放大,发酵周期为86 h,生产强度为32.9 mg/(L·h),DCW、辅酶Q产量和单位细胞产量分别为118.9 g/L、2825.7 mg/L和23.8 mg/g-DCW,同优化前初始发酵工艺结果相比,分别提高了17.5%、22.7%和4.4%。

关键词：辅酶Q10 根癌土壤杆菌菌种补料分批发酵两阶段控制