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调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移灶miR-34a-5p、Notch1/NF-κb表达的影响

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环球中医药 2024年第3期17卷 407-413页

作者：王玉坤孙适然张津铖程志强北京中医药大学中日友好医院临床医学院 100029 中日友好医院中西医结合肿瘤内科

目的探讨调脾安肠方对裸鼠结肠癌肝转移(colorectal cancer liver metastasis,CLM)灶组织中MicroRNA-34a-5p(miR-34a-5p)及其靶基因Notch1/核转录因子-κb(nuclear factor-kappa b,NF-κb)通路表达的影响。方法选取30只雄性balb/c裸鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组10只。脾脏原位注射HCT-116人结肠癌细胞(细胞数约为1×107个/mL)法构建CLM模型。中药组在CLM造模完成2周后开始调脾安肠方(2 g/mL,每日0.2 mL)灌胃2周,空白组和模型组同期予等体积0.9%生理盐水灌胃。苏木素—伊红染色观察肝转移灶病理组织形态;蛋白免疫印迹法测定肝转移灶Notch1、NF-κb p65蛋白水平;实时荧光定量pCR测定肝转移灶miR-34a-5p及Notch1、NF-κb p65 mRNA水平。结果与模型组比较,中药组裸鼠镜下病理转移灶面积明显减小,核分裂像减少,提示调脾安肠方抑制了结直肠癌细胞在肝脏的定植和迁移。与空白组比较,模型组肝转移灶中miR-34a-5p含量显著降低(pb p65蛋白表达升高(均pb p65的mRNA表达显著升高(均ppb p65的mRNA表达显著降低(pp与Notch1 mRNA在结肠癌肝转移灶组织中表达水平呈负相关(r^(2)=0.8845,pb p65在结肠癌肝转移灶组织中mRNA表达水平呈显著正相关(r^(2)=0.9291,pp靶向负性调节Notch1/NF-κb通路表达有关。

关键词：结肠癌肝转移中药复方调脾安肠方 miR-34a Notch1 核转录因子-κb p65 药理机制

苍附导痰汤对肥胖型pCOS-IR模型大鼠卵巢TLR4/NF-κb p65信号通路的影响

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中国药理学通报 2023年第4期39卷 787-793页

作者：徐海燕杜青陈娟王红梅谭小宁湖南省中医药研究院湖南长沙410006

目的探讨苍附导痰汤对肥胖型pCOS-IR (polycystic ovarian syndrome-insulin resistance, pCOS-IR)模型大鼠卵巢Toll受体4(TLR4)/核转录因子κb p65(NF-κb p65)信号通路的调控作用。方法 48只♀大鼠随机分为正常组8只和模型组40只。... 详细信息

目的探讨苍附导痰汤对肥胖型pCOS-IR (polycystic ovarian syndrome-insulin resistance, pCOS-IR)模型大鼠卵巢Toll受体4(TLR4)/核转录因子κb p65(NF-κb p65)信号通路的调控作用。方法 48只♀大鼠随机分为正常组8只和模型组40只。来曲唑(1 mg·kg^(-1))联合高脂饮食建立肥胖型pCOS-IR大鼠模型,快速革兰染色法观察动情周期,挑选24只模型大鼠随机分为:模型组、阳性药(二甲双胍135 mg·kg^(-1))组、苍附导痰汤高、低剂量(57.96、14.49 g·kg^(-1))组,每组各6只,药物干预21 d。观察动情周期、卵巢和子宫指数变化;血液生化仪测定空腹血糖(FbG)和血脂(甘油三酯TG和总胆固醇TC)变化;酶联免疫吸附(ELISA)法测定空腹胰岛素(FINS)水平;免疫组化法和荧光定量pCR法检测卵巢中TLR4和NF-κb p65蛋白及基因的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢多囊性改变明显,FbG、TG、TC含量和FINS、HOMA-IR水平上调,卵巢中TLR4和NF-κb p65蛋白及mRNA表达均增加(pppCOS-IR大鼠卵巢排卵和糖脂代谢功能,作用机制可能与调控卵巢TLR4/NF-κb p65信号通路有关。

关键词：苍附导痰汤多囊卵巢综合征胰岛素抵抗慢性炎症 Toll样受体4 核转录因子-κb p65

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糖尿病心肌病巴马小型猪模型的制备

中国中西医结合急救杂志 2019年第5期26卷 573-576页

作者：姚爽沈艳明于萍江仁美王彩梅邹迪莎唐敏娟刘晓玲莫如芬施佳成黄倩于健广西壮族自治区桂林医学院附属医院内分泌科广西壮族自治区桂林541001 广西壮族自治区桂林医学院附属医院检验科广西壮族自治区桂林541001 广西壮族自治区桂林医学院附属医院肾内科广西壮族自治区桂林541001

目的观察糖尿病心肌病(DCM)巴马小型猪模型心肌组织核转录因子-κb p65(NF-κb p65)、转化长因子-β1(TGF-β1)及凋亡相关因子bcl-2、bax蛋白表达水平的变化及意义.方法选取4~5个月龄健康雄性广西巴马小型猪10头,按随机数字表法将动物... 详细信息

目的观察糖尿病心肌病(DCM)巴马小型猪模型心肌组织核转录因子-κb p65(NF-κb p65)、转化长因子-β1(TGF-β1)及凋亡相关因子bcl-2、bax蛋白表达水平的变化及意义.方法选取4~5个月龄健康雄性广西巴马小型猪10头,按随机数字表法将动物分为对照组和模型组,每组5头.两组均空腹12 h后,采用一次性耳缘静脉注射链脲佐菌素(STZ)150 mg/kg的方法复制DCM巴马小型猪模型;对照组一次性耳缘静脉注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液150 mg/kg.制模10个月后观察两组动物基本情况,并测定其空腹血糖(FpG)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测两组心肌组织NF-κb p65、TGF-β1、bcl-2、bax的蛋白表达水平;电镜下观察两组动物心肌组织病理学变化.结果4头动物制模成功,1头死亡,模型成功动物出现多饮、多食、多尿及体质量下降等糖尿病表现.实验结束时模型组FpG水平明显高于对照组(mmol/L :25.53±3.75比4.68±0.77,pb p65、bax、TGF-β1的蛋白表达水平均明显升高(NF-κb p65/GApDH :0.46±0.05比0.38±0.02,bax/GApDH :0.46±0.01比0.35±0.01, TGF-β1/GApDH :0.39±0.01比0.33±0.01,均pbcl-2蛋白表达水平明显降低(bcl-2/GApDH :0.33± 0.01比0.42±0.01,p<0.01).电镜下可见:模型组心肌组织肌原纤维排列较紊乱、间隙线粒体数量明显减少,可见大量空泡变性线粒体.结论采用一次性耳缘静脉注射大剂量STZ 10个月后可成功复制DCM巴马小型猪模型;DCM小型猪模型存在明显糖代谢紊乱,且心肌组织存在炎症反应、心肌细胞凋亡和纤维化表现.

关键词：巴马小型猪糖尿病心肌病模型链脲佐菌素核转录因子-κb p65 转化长长因子-β1 bcl-2 bax

感染性休克外周血单核细胞TLR4/MyD88/NF-κb p65信号通路表达

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中华医院感染学杂志 2022年第13期32卷 1931-1935页

作者：李彩丽翟沙张静李霏霏郭令利河南省直第三人民医院全科医学科河南郑州450006

目的探讨感染性休克患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子-κb p65(NF-κb p65)信号通路表达。方法选取2019年1月-2021年3月河南省直第三人民医院收治的感染性休克患者112例为病例组,同期未发生休克的... 详细信息

目的探讨感染性休克患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子-κb p65(NF-κb p65)信号通路表达。方法选取2019年1月-2021年3月河南省直第三人民医院收治的感染性休克患者112例为病例组,同期未发生休克的感染患者56例为对照组。比较两组患者TLR4、MyD88、NF-κb p65蛋白表达水平以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCp-1)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析TLR4、MyD88、NF-κb p65蛋白表达、血清炎症因子对感染性休克的诊断价值。结果病例组血清炎症因子TNF-α、IL-6、MCp-1水平均高于对照组(pb p65蛋白表达水平均高于对照组(pb p65蛋白诊断感染性休克的灵敏度为89.29%、68.75%、74.11%,特异度为55.36%、66.07%、67.86%。血清炎症因子TNF-α、IL-6、MCp-1诊断感染性休克的灵敏度为67.86%、71.43%、75.00%,特异度为60.71%、91.07%、85.71%。结论感染性休克的分子病理学机制可能与上调TLR4/MyD88/NF-κb p65信号通路、增强炎症反应有关。

关键词：感染性休克 Toll样受体4 髓样分化因子核转录因子-κb p65 信号通路

温肾化痰祛瘀法治疗子宫肌瘤对子宫供血、血清NF-κb p65水平影响分析

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中华中医药学刊 2020年第7期38卷 37-40页

作者：包丽丽刘丽杰叶建红陈雪红临海市第二人民医院妇产科浙江临海317016

目的分析温肾化痰祛瘀法治疗子宫肌瘤对患者子宫供血、血清核转录因子-κb p65(NF-κb p65)水平影响。方法选取医院2016年11月—2018年11月收治的子宫肌瘤患者118例,分为两组。对照组采用米非司酮治疗,观察组采用温肾化痰祛瘀法治疗,分... 详细信息

目的分析温肾化痰祛瘀法治疗子宫肌瘤对患者子宫供血、血清核转录因子-κb p65(NF-κb p65)水平影响。方法选取医院2016年11月—2018年11月收治的子宫肌瘤患者118例,分为两组。对照组采用米非司酮治疗,观察组采用温肾化痰祛瘀法治疗,分析两组患者治疗后的临床效果。结果观察组总有效率为69.49%,对照组为49.15%,观察组患者总有效率高于对照组(pp>0.05)。观察组治疗后血流搏动指数和阻力指数高于对照组,收缩期峰值速度和舒张期最小血流速度低于对照组(pp>0.05)。观察组治疗后子宫体积(93.88±10.03)mm^3、子宫肌瘤体积(27.98±7.63)mm^3小于对照组(pb p65、白细胞介素-2(IL-2)、血管生成素-2(Ang-2)水平组间比较,差异不具有统计学意义(p>0.05)。观察组治疗后IL-2水平高于对照组,NF-κb p65、Ang-2水平低于对照组(pb p65、Ang-2的表达水平,减慢子宫血液循环。

关键词：温肾化痰祛瘀法子宫肌瘤核转录因子-κb p65 米非司酮子宫体积

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核因子-κb在重症急性胰腺炎发病中的作用

核因子-κB在重症急性胰腺炎发病中的作用

作者：范海清南昌大学

学位级别：硕士

目的:研究核转录因子-κb在牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎中的动态变化规律,以及ppARγ激动剂吡格列酮对大鼠重症急性胰腺炎的干预作用。方法:共130只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为二大部分:第一部分:40只健康雄性Sprague-Dawle... 详细信息

目的:研究核转录因子-κb在牛磺胆酸钠诱导的大鼠重症急性胰腺炎中的动态变化规律,以及ppARγ激动剂吡格列酮对大鼠重症急性胰腺炎的干预作用。方法:共130只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为二大部分:第一部分:40只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重160-200g,随机分为假手术组(C组)、重症急性胰腺炎组(A组)和吡格列酮预处理组三个剂量组(p1组、p2组、p3组),每组8只。采用盐酸氯胺酮腹腔注射麻醉下逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)建立SAp模型,p组大鼠在术前2h腹腔内注射吡格列酮(20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg),造模后大鼠自由摄食和饮水,比较各组大鼠的生存时间和60小时的生存率。第二部分:90只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,体重160-200g,随机分为假手术组(C组)、重症急性胰腺炎组(A组)和吡格列酮预处理组三个剂量组(p1组、p2组、p3组),每组18只。采用盐酸氯胺酮腹腔注射麻醉下逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)建立SAp模型。p组大鼠在术前2h腹腔内注射吡格列酮(20mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)。分别于术后3、6、12h 3个时间点采用腹主动脉放血法将大鼠分批处死(每次每组6只),取腹水进行淀粉酶检测,并取腹主动脉血采用ELISA法测血清炎症细胞因子IL-6的水平;取胰腺组织,分为两部分:第一部分立即放于10%中性甲醛溶液(100ml/L)固定,用于进行常规HE染色;第二部分立即放入液氮罐内冻存用于Western blot法检测。采用Western blot法检测胰腺组织NF-κb蛋白的表达,同时进行胰腺组织病理学评分的测定,并观察吡格列酮预处理后上述各指标的变化。结果:1.五组大鼠的生存时间和60小时的生存率(第一部分):p组大鼠生存时间较A组明显延长,但低于C组(pp2组的生存时间与A组的差异有统计学意义(pp2组和p3的生存时间与A组的差异无统计学意义。A组大鼠造模后60h的生存率是12.5%,p1、p2、p3组的生存率分别为25%、37.5%、37.5%,A组与p2组比较,差异有统计学意义(pp2疗效优于p1和p3组(见表3.1、表3.2)。2.腹水淀粉酶变化:C组无腹水形成,p组腹水淀粉酶水平在各时间点与A组相比,有所降低,但差异无统计学意义(p>0.05)(见表3.3)。3.胰腺组织病理学评分:与C组相比,A组、p组各时间点均明显升高,差异有统计学意义(pp组与A组相比,在3h差异无统计学意义(p>0.05),在6h、12h差异有统计学意义(pp组各时间点均明显升高,差异有统计学意义(pp组与A组相比,在3h差异无统计学意义(p>0.05),在6h、12h相差异有统计学意义(pb p65蛋白的表达变化:胰腺组织NF-κbp65的活化程度:与C组相比,A组、p组各时间点活化程度均明显升高,差异有显著性(pp2组相比,在3h差异无统计学意义,在6h、12h差异有统计学意义( (pp2组)疗效最为显著。***-6是反应急性胰腺炎严重程度的可靠指标,研究显示IL-6的水平高低与急性胰腺炎的严重程度相平行,当有效的抑制NF-κb活性后,IL-6显著下降。3.急性重症胰腺炎的炎症介质的产生始发于NF-κb的过度活化,应用NF-κb激活的抑制剂阻断NF-κb激活,在转录水平下调炎症介质表达,从而改善病情。因此,选择一个适当时机抑制NF-κb的活化必定可以减轻SAp的进展,降低胰腺炎对机体所造成损害,这将为今后SAp的治疗提供了一条新的途径。4.吡格列酮通过活化ppARγ途径,抑制NF-κb的活性,减轻大鼠SAp炎症程度,因此,其有望成为一种新的临床治疗SAp的方法。

关键词：重症急性胰腺炎核转录因子-κb p65 吡格列酮蛋白质印迹

槲皮素对高糖培养诱导的人肾小球系膜细胞NF-κb p65及MCp-1表达的作用研究

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槲皮素对高糖培养诱导的人肾小球系膜细胞NF-κB p65及MCP-1表达...

作者：王艳桥福建医科大学

学位级别：硕士

目的观察不同作用时间高葡萄糖(HG)培养诱导的人肾小球系膜细胞(HMCs)增殖及其核转录因子-κb p65(NF-κb p65)、单核细胞趋化蛋白-1(MCp-1)蛋白表达情况,并采用不同浓度梯度槲皮素(QU)进行干预,评价QU是否具有抑制HG培养诱导的HMCs增... 详细信息

目的观察不同作用时间高葡萄糖(HG)培养诱导的人肾小球系膜细胞(HMCs)增殖及其核转录因子-κb p65(NF-κb p65)、单核细胞趋化蛋白-1(MCp-1)蛋白表达情况,并采用不同浓度梯度槲皮素(QU)进行干预,评价QU是否具有抑制HG培养诱导的HMCs增殖及其NF-κb p65及MCp-1蛋白表达的作用,为临床应用QU防治糖尿病肾病(DN)提供理论依据。方法选择体外培养的HMCs株为研究对象。分别设立(1)NG培养组(葡萄糖浓度:5.6mmol.L-1);(2)HG培养组(葡萄糖浓度:30mmol.L-1);(3)HG+DMSO溶剂对照组(HG+0.1%DMSO);(4)HG +不同浓度梯度QU干预组(HG+QU1、HG+QU2、HG+QU3、HG+QU4组,QU浓度分别为0.5×10-5 mol.L-1、1×10-5 mol.L-1、2×10-5 mol.L-1、4×10-5 mol.L-1),并于12h、24h、48h检测各组相关指标。采用四甲基偶氮唑蓝渗入法(MTT)检测HMCs的增殖情况;采用免疫细胞化学法(ICC)和蛋白印迹法(Western-blot)检测HMCs胞核NF-κb p65及胞浆MCp-1蛋白表达。数据运用SpSS17.0统计软件分析。结果 1、与NG培养组相比,HG培养组HMCs明显增殖在HG组培养诱导的48h内,HG组HMCs增殖水平明显高于NG组(pppb p65及胞浆MCp-1表达增强,而予QU干预后,二者表达明显降低。 NG培养状态下,NF-κb p65主要表达于HMCs胞浆,极少表达于胞核;MCp-1在HMCs胞浆少量表达。与NG培养状态下相比,在HG培养状态下,NF-κb p65在HMCs胞核表达明显增强(pb p65核转位明显增加;同时MCp-1在胞浆表达明显增强(pb p65核转位及MCp-1胞浆表达明显降低,与干预前相比较均具有统计学意义(pblot结果同样显示在HG培养状态下,HMCs胞核NF-κb p65及胞浆MCp-1表达增强,而给予QU干预后,二者表达明显降低,而且胞核NF-κb p65表达活性与胞浆MCp-1表达水平呈正相关。 NG培养状态HMCs胞核NF-κb p65及胞浆MCp-1的表达与培养时间无关,各培养时间点相比均无明显统计学意义(p>0.05)。HG培养诱导48h内,随着培养时间的延长,HMCs胞核NF-κb p65及胞浆MCp-1的表达也逐渐增加,与其他时间点相比于48h达最高值(pb p65及胞浆MCp-1表达均降低,同时发现胞核NF-κb p65表达活性与胞浆MCp-1表达水平呈正相关。结论 1、体外HG培养可以刺激HMCs增殖,而且能够促进HMCs胞核NF-κb p65及胞浆MCp-1表达。 2、HMCs中胞核NF-κb p65表达及胞浆MCp-1表达之间存在正相关关系,提示HG培养状态下NF-κb p65介导的炎症反应可能是肾脏损害的主要因素。 3、QU可以抑制HG培养状态下HMCs的增值,具有时间、剂量依赖效应;而且QU可以降低HMCs胞核NF-κb p65及胞浆MCp-1表达,提示QU可能通过抑制NF-κb p65信号途径发挥肾脏保护作用。

关键词：槲皮素糖尿病肾病人肾小球系膜细胞核转录因子-κb p65 单核细胞趋化蛋白-1

乌司他丁对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤中NF-κbp65及MMp-2表达的影响

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乌司他丁对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤中NF-κBp65及MMP-2表达的影...

作者：何芳中南大学

学位级别：硕士

目的：通过观察脂多糖(lipopolysaccharide, LpS)诱导的大鼠急性肺损伤(acute lung injury, ALI)中肺组织的病理变化、以及核转录因子-κb (Nuclear factor-Kb,NF-Kb)p65与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMp-2)在肺组织中的表达,探讨NF-κb信号转导通路及MMp-2在ALI中的作用;同时通过观察乌司他丁干预后ALI大鼠的肺组织病理、NF-κb p65及MMp-2的变化,探讨乌司他丁对脂多糖诱导的大鼠ALI是否具有保护作用以及可能的机制。方法：健康雄性SD大鼠45只,随机分为正常对照组,急性肺损伤组和乌司他丁干预组,每组15只。(1)正常对照组：尾静脉注射生理盐水(2ml/kg)。(2) ALI组：尾静脉注射脂多糖(5mg/kg)诱发ALI大鼠模型。(3)乌司他丁干预组：大鼠腹腔注射乌司他丁(100ku/kg),30分钟后尾静脉注射脂多糖(5mg/kg)。观察各组大鼠活动、精神等一般状态的变化,在各组尾静脉给药后4小时处死大鼠,并留取相应的肺组织和血液标本。抽取颈动脉血测定动脉血氧分压(arterial oxygen partial pressure, paO2),取肺组织检测肺湿干重比(wet-to-dry weight ratio, W/D),肉眼观察肺组织大致改变,光镜下观察肺组织HE染色的病理改变,免疫组织化学法测定肺组织中NF-Kbp65及MMp-2表达。结果：***2的变化：正常对照组大鼠pa02波动在103.1mmHg左右;与正常对照组相比,ALI组大鼠pa02显著降低(ppa02高于ALI组,但仍低于正常对照组水平,差异具有统计学意义(ppbp65及MMp-2的表达均显著增多(pbp65及MMp-2的表达低,差异有统计学意义(pb p65及MMp-2的表达增高;2.乌司他丁可抑制急性肺损伤大鼠肺组织中NF-κb p65及MMp-2的表达;3.乌司他丁对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠可能具有保护作用。

关键词：乌司他丁脂多糖急性肺损伤核转录因子-κb p65 基质金属蛋白酶-2

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匹诺塞林缓解大鼠肝细胞系低氧/复氧损伤

匹诺塞林缓解大鼠肝细胞系低氧/复氧损伤

作者：郭振重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨pIN对低氧/复氧诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:将大鼠肝细胞(bRL-3A细胞系)分为正常对照组、pIN实验组、低氧复氧损伤模型组和pIN预处理组。CCK-8检测细胞存活率;Annexin V-FITC/pI双染流式细胞术检测细... 详细信息

目的:探讨pIN对低氧/复氧诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:将大鼠肝细胞(bRL-3A细胞系)分为正常对照组、pIN实验组、低氧复氧损伤模型组和pIN预处理组。CCK-8检测细胞存活率;Annexin V-FITC/pI双染流式细胞术检测细胞凋亡;检测细胞培养液中ALT活性;ELISA检测TNF-α和IL-1β含量;细胞中TLR4、Iκb-α和NF-κb p65蛋白水平通过Western blot检测;细胞中TLR4、Iκb-α和NF-κb p65mRNA表达通过RT-qpCR检测。结果:在H/R条件下细胞存活率明显降低(ppppb p65蛋白与mRNA表达水平显著提高(pb-α降低(ppIN预处理后,细胞存活率显著提高(ppppb p65蛋白与mRNA表达水平明显降低(pb-α升高(ppIN对H/R诱导的bRL-3A肝细胞的损伤可能具有保护作用,而TLR4/NF-κb信号通路在这种保护作用的实现中起到了重要作用。

关键词：匹诺塞林低氧/复氧肝细胞损伤 Toll样受体4 核转录因子-κb p65