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激素抵抗型系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞中糖皮质激素受体α的表达及其核质分布

广西医学 2015年第6期37卷 758-760页

作者：韦斌蒋祖玲方险峰广西中医药大学附属瑞康医院皮肤科南宁市530011

目的探讨激素抵抗型系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞(PBMC)中糖皮质激素受体α(GRα)表达的量及核质分布,推测SLE激素抵抗发生的可能机制。方法选取激素抵抗型SLE患者、激素敏感型SLE患者和健康对照各18例。SLE患者在完成治疗8周... 详细信息

目的探讨激素抵抗型系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单核细胞(PBMC)中糖皮质激素受体α(GRα)表达的量及核质分布,推测SLE激素抵抗发生的可能机制。方法选取激素抵抗型SLE患者、激素敏感型SLE患者和健康对照各18例。SLE患者在完成治疗8周后,抽取所有对象外周血,分离单个核细胞,用Western Blot检测GRα表达量,用免疫组化技术检测GRα核质比。结果激素敏感组及激素抵抗组PBMC中GRα表达明显低于健康对照组(P核质比低于敏感组及健康对照组(P<0.05)。结论 GRα表达的下调及其核转运障碍可能在SLE患者糖皮质激素抵抗的发生中发挥关键作用。

关键词：系统性红斑狼疮激素抵抗糖皮质激素受体核质分布

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过氧化氢对蛋白磷酸酶2A甲基化及羧基甲基酯酶核质分布的影响

过氧化氢对蛋白磷酸酶2A甲基化及羧基甲基酯酶核质分布的影响

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：唐深秦富刘银品陆彩玲曾晓春刘雨阳李习艺广西医科大学基础医学院广西医科大学公共卫生学院广西医科大学第一附属医院

【目的】蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A,PP2A)是细胞内重要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,由结构亚基、调节亚基和催化亚基(C亚基)组成,其中C亚基甲基化对PP2A全酶的功能发挥具有重要作用,其去甲基化受羧基甲基酯酶(PME)调控。本研究探... 详细信息

【目的】蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A,PP2A)是细胞内重要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,由结构亚基、调节亚基和催化亚基(C亚基)组成,其中C亚基甲基化对PP2A全酶的功能发挥具有重要作用,其去甲基化受羧基甲基酯酶(PME)调控。本研究探讨过氧化氢(HO)对蛋白磷酸酶2A催化亚基(PP2A-C)甲基化及羧基甲基酯酶(PME)核质分布的影响。【材料和方法】以原代培养的皮肤成纤维细胞HPF及小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3细胞)为研究对象,激光共聚焦显微镜扫描检测HO处理及N-乙酰半胱氨酸和PME抑制剂等对细胞总PP2A-C、去甲基化PP2A-C核质分布的影响;构建与绿色荧光蛋白融合的PME高表达293细胞株(PME-GFP293),激光共聚焦显微镜扫描动态观察HO处理对细胞PME核质分布变化。【结果】结果显示HO诱导细胞内去甲基化PP2Ac表达增加,且核内/胞浆比例分布较空白对照组明显降低;使用NAC拮抗HO后PME-1和去甲基化PP2Ac的核内/胞浆比例较单纯HO刺激时有明显提高;使用PME抑制剂拮抗HO后PME-1和去甲基化PP2Ac的核内/胞浆比例与单纯HO刺激时相似;总PP2Ac与LCMT的变化在各组间均未有统计学差异。HPF及NIH 3T3细胞结果相似。PME-GFP293细胞株与空质粒转染细胞比较,蛋白免疫印迹显示PME表达明显升高。激光共聚焦扫描结果显示,绿色荧光分布于胞核与胞浆,HO刺激后,荧光强度核质比逐渐下降。【结论】氧化应激诱导细胞去甲基PP2A-C核质分布异常,可能与氧化应激下PME的核质分布有关。

关键词：蛋白磷酸酶2A 甲基化羧基甲基酯酶核质分布

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转录因子Arx通过核质分布的变化调控成肌细胞分化的研究

转录因子Arx通过核质分布的变化调控成肌细胞分化的研究

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细胞—生命的基础——中国细胞生物学学会2013年全国学...

作者：叶莹莹刘佩佩孟歆怿徐朋朋叶文铎 Yiwei Wang 林文波 Xiang-Jiao Yang 陶涛厦门大学生命科学学院凯斯西储大学病理学系加拿大麦吉尔大学Goodman癌症中心

同源异型蛋白Arx是一类含有同源异型结构域的转录因子,在胚胎发育中对组织和器官的形成及成肌细胞的分化具有重要的调控作用。同源异型蛋白Sixl能结合肌肉调节因子myogenin启动子上的MEF3位点,激活转录,引起成肌细胞的分化且此时其表达... 详细信息

同源异型蛋白Arx是一类含有同源异型结构域的转录因子,在胚胎发育中对组织和器官的形成及成肌细胞的分化具有重要的调控作用。同源异型蛋白Sixl能结合肌肉调节因子myogenin启动子上的MEF3位点,激活转录,引起成肌细胞的分化且此时其表达量有所升高。胚胎期、

关键词： C2C12细胞分化 Arx 核质分布 SIX1 CAS

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蛋鸭circ-ZNF326的特征分析、过表达载体的构建及对小肠上皮细胞增殖的影响

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中国畜牧兽医 2022年第3期49卷 837-844页

作者：魏文焯郑超吴艳梁振华皮劲松杜金平李成凤张昊湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064 西南科技大学生命科学与工程学院绵阳621010 湖北神丹健康食品有限公司安陆432600

【目的】明确circ-ZNF326的基本特征及对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【方法】以绿头鸭为研究对象,采集鸭胚肠道并培养小肠上皮细胞,提取RNA并反转录为cDNA,参考circ-ZNF326的全长序列设计引物,通过PCR反应扩增获得circ-ZNF326的部分序... 详细信息

【目的】明确circ-ZNF326的基本特征及对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【方法】以绿头鸭为研究对象,采集鸭胚肠道并培养小肠上皮细胞,提取RNA并反转录为cDNA,参考circ-ZNF326的全长序列设计引物,通过PCR反应扩增获得circ-ZNF326的部分序列,测序后利用反向剪接位点验证其成环方式。利用PARISTM Kit提取细胞核与细胞质RNA检测其在细胞中的核质分布情况。合成circ-ZNF326全长序列并利用双酶切及T4连接酶将circ-ZNF326全长序列连接在PLCDH-ciR真核表达载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞扩大培养,提取重组质粒进行双酶切及琼脂糖凝胶电泳检测,将circ-ZNF326过表达载体转染小肠上皮细胞,利用实时荧光定量PCR技术检测circ-ZNF326过表达后的表达效率,利用CCK-8检测过表达circ-ZNF326对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【结果】circ-ZNF326是由ZNF326基因第10、11和12号外显子反向剪接而成,且主要分布在细胞质中。circ-ZNF326过表达载体构建成功,表达效率极显著高于空载组(P<0.01)。将circ-ZNF326过表达载体转染小肠上皮细胞,结果发现,circ-ZNF326过载组在24~72 h细胞活力极显著或显著高于空载组(P<0.01;P<0.05)。【结论】本试验成功验证了circ-ZNF326的反向剪接与环状结构,证明了circ-ZNF326主要富集在细胞质中,并构建了circ-ZNF326过表达载体,证实了过表达circ-ZNF326可提高蛋鸭小肠上皮细胞的活力,为深入研究circ-ZNF326的生物学功能及其对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的调控机制奠定了理论基础。

关键词：环状RNA 蛋鸭 circ-ZNF326 核质分布过表达载体

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MORC2在诱导肌细胞C2C12分化中的作用及其机制研究

MORC2在诱导肌细胞C2C12分化中的作用及其机制研究

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作者：郑建宇中国医科大学

学位级别：硕士

目的:MORC2是Microrchidia家族CW型锌指蛋白(MORC)家族成员之一。MORC家族在进化上高度保守,并因其在抑制转录、表观遗传调控和DNA损伤修复等方面的重要功能引起人们的广泛关注。MORC2蛋白是一种普遍表达的蛋白,结构上主要包含ATPase域... 详细信息

目的:MORC2是Microrchidia家族CW型锌指蛋白(MORC)家族成员之一。MORC家族在进化上高度保守,并因其在抑制转录、表观遗传调控和DNA损伤修复等方面的重要功能引起人们的广泛关注。MORC2蛋白是一种普遍表达的蛋白,结构上主要包含ATPase域,CW锌指型结构域,核定位信号和卷曲螺旋结构域四个部分,分子量约为117kD。它在染色质重塑、DNA损伤修复和脂肪生成以及肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。MORC2主要定位于细胞核,但在细胞质中也有少量分布,有研究表明MORC2在细胞质的定位是脂质代谢和体内平衡的关键参与者,能够调节细胞质中脂肪细胞分化和脂肪生成。而研究表明蛋白的核质分布的改变往往伴随着结构和生物学功能的转变。C2C12细胞是由C3H小鼠骨骼肌卫星细胞永生化而来的细胞株,属于小鼠的骨骼肌干细胞。该细胞具有与骨骼肌前祖细胞相同的生物学行为,且其细胞特性和形态均一,可无限传代培养。C2C12细胞在2%马血清培养条件下具有单向分化为肌细胞的能力,同时能够表达MyoD、myogenin、myosin等成熟骨骼肌的多种标志蛋白。因而在肌细胞发育分化研究中,常常把它视为实验经典模型。在肌细胞的分化过程中成肌调节因子(MRFs)起着至关重要的作用。它主要包括MyoD、Myf5、myogenin与MRF4四个成员,其中MyoD、myogenin与myosin常在成熟肌细胞中表达上调因此常被用做肌细胞分化标志物。由于他们在分化的不同阶段分别起着主导作用,因此在分化前期高表达的MyoD、myosin常被用做早期分化标志物,而在分化中晚期高表达的myogenin则被用做中期分化标志物。分化抑制因子3(Inhibitor of differentiation,Id3)首先发现于成肌细胞。与肌细胞分化标志物MyoD一样,均属于碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族成员。Id分子在结构上缺少与DNA结合所必需的碱性区,因此能够阻断细胞的分化进程,诱导细胞的进一步增殖。通常分化程度越高,Id分子表达越少。此前有研究表明MyoD的过表达能够促进Id3的上调。而Id3能够通过干扰Myo D二聚化影响其活性并发挥抑制分化作用。研究表明Id3在C2C12分化过程中表达逐渐下调。我们在前期工作中发现过表达MORC2能够抑制C2C12细胞分化,但具体作用机制尚不明确。此外基因芯片结果显示在正常细胞培养条件下MORC2能够上调Id3的表达,但这是否能影响细胞分化尚不清楚。因此本研究在前期工作的基础上,深入探讨了MORC2对C2C12细胞诱导分化的作用及其机制。方法:构建过表达MORC2慢病毒载体;构建并筛选稳转过表达MORC2蛋白的细胞株;用2%马血清对构建成功的C2C12细胞系进行诱导分化;流式细胞仪检测诱导分化后细胞周期的变化;Real-time PCR检测诱导分化后肌细胞分化标志物MyoD及Id3 mRNA水平表达的变化;Western Blot检测诱导分化后MyoD及Id3蛋白表达的变化;荧光显微镜下观察MORC2在分化过程中的细胞定位转变;通过核质分离试剂盒分别检测分化过程中核质中MORC2、Id3蛋白表达变化。结果:(1)将双酶切获得MORC2目的基因片段与载体连接,获得重组质粒。(2)重组慢病毒载体经双酶切以及基因测序鉴定显示构建成功。(3)用收集的慢病毒上清液感染C2C12细胞,并筛选稳定表达株。(4)Real-time PCR和Western Blot鉴定结果显示MORC2在C2C12细胞中高表达。(5)细胞形态统计分析结果显示过表达MORC2组细胞分化程度明显低于对照组。(6)流式周期结果显示随诱导分化时间延长对照组细胞G0/G1期比例明显升高,S期比例下降,而过表达MORC2组细胞周期变化不明显。(7)随诱导分化时间延长,过表达MORC2组细胞肌分化标志物MyoD、myogenin和myosin上调幅度明显低于对照组(p分布发生了由细胞核到细胞浆的改变。(10)Western Blot结果显示,诱导分化过程中细胞核内MORC2蛋白表达逐渐减少,细胞质内MORC2逐渐升高。结论:(1)成功构建了携带MORC2基因的慢病毒载体。(2)过表达MORC2能够抑制细胞分化进程,促进C2C12细胞维持增殖状态。(3)在诱导分化过程中过表达MORC2能降低分化标志物MyoD、myogenin和myosin的上调水平。(4)过表达MORC2能上调Id3表达。(5)MORC2的定位在C2C12细胞诱导分化的过程中发生了由细胞核到浆的改变。(6)在分化过程中MORC2由细胞核到浆的改变能够上调细胞质内Id3的表达,进

关键词：小鼠成肌细胞细胞分化 MORC2 MyoD Id3 核质分布

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禾谷镰刀菌中SUMO通过修饰转录因子FgSR调控病菌DNA损伤修复

禾谷镰刀菌中SUMO通过修饰转录因子FgSR调控病菌DNA损伤修复

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作者：程丹妮浙江大学

学位级别：硕士

SUMO（small ubiquitin-related modifier）修饰作为一种类泛素修饰,广泛存在于所有真核生物中,在细胞周期、胁迫应对、转录调控和核质运输等方面发挥重要作用。SU]MO前体在蛋白酶（ULPs/SENPs）作用下被剪切成暴露C-末端双甘氨酸基序... 详细信息

SUMO（small ubiquitin-related modifier）修饰作为一种类泛素修饰,广泛存在于所有真核生物中,在细胞周期、胁迫应对、转录调控和核质运输等方面发挥重要作用。SU]MO前体在蛋白酶（ULPs/SENPs）作用下被剪切成暴露C-末端双甘氨酸基序（GG）的成熟SUMO分子,然后通过SUMO激活酶E1（SUMO Activating Enzyme,SAE/Aos1,Uba2）激活后,转移到 SUMO 结合酶 E2（SUMO-conjugating Enzyme,Ubc9）,在 SUMO 连接酶 E3（SUMO Ligating Enzyme,E3）或 SUMO 相互作用基序（SUMOInteractionMotif,SIM）的非共价结合作用下与底物蛋白赖氨酸残基共价结合进行修饰。SUMO修饰是个可逆的过程,修饰后的SUMO—底物蛋白结合体在蛋白酶作用下可发生去SUMO化。目前SUMO修饰的研究主要集中在哺乳动物和酵母中,在丝状真菌中的研究较少。近年来,由禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）引起的赤霉病已成为影响我国小麦安全生产的重要病害之一。本研究在禾谷镰刀菌中展开SUMO修饰途径生物学功能的研究,预期结果将拓宽对真菌中SUMO修饰生物功能的理解。本文通过基因敲除和回补的方法对禾谷镰刀菌SUMO修饰途径中关键元件FgSmt3、FgAos1、FgUba2、FgUlp1 和 FgUlp2 生物学功能展开研究,发现:1)SUMO途径参与病菌的DNA损伤修复;2)通过亲和捕获的试验发现调控DNA损伤修复的转录因子FgSR被SUMO修饰,鉴定FgSR上SIM2 domian和6个赖氨酸是SUMO修饰所必需的;3)酵母双杂和Western Blot试验表明,DNA损伤胁迫条件下,FgSmt3对FgSR进行SUMO化修饰,调控FgSR细胞核和细胞质的分布,同时被修饰的FgSR会招募染色质重塑复合体SWI/SNF进而共同调控DNA胁迫响应基因的转录,最终参与DNA损伤响应及修复过程;4)此外,发现禾谷镰刀菌中SUMO修饰调控病菌的发育和致病。本研究揭示了禾谷镰刀菌中SUMO修饰调控病菌DNA损伤修复的机制,拓宽真菌中SUMO修饰生物功能和DNA损伤修复的认识。

关键词：禾谷镰刀菌 SUMO化修饰 FgSR 核质分布染色质重塑 DNA损伤

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自噬相关蛋白ATG8研究进展

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中文科技期刊数据库（全文版）自然科学 2021年第6期 74-75页

作者：王冰雪武汉大学生命科学学院·病毒学国家重点实验室·现代病毒学研究中心湖北武汉430000

Atg8是自噬过程中的核心蛋白,主要通过影响自噬起始阶段,隔离膜延伸、自噬体封闭、自噬体转运、自噬体与溶酶体融合过程介导自噬体的生物发生.自噬是一种降解和回收细胞质物质并在真核细胞中提供构件的机制,在真核生物的胞内物质周转及... 详细信息

Atg8是自噬过程中的核心蛋白,主要通过影响自噬起始阶段,隔离膜延伸、自噬体封闭、自噬体转运、自噬体与溶酶体融合过程介导自噬体的生物发生.自噬是一种降解和回收细胞质物质并在真核细胞中提供构件的机制,在真核生物的胞内物质周转及细胞器质量控制中起重要作用. 本文主要介绍了Atg8的核质分布,为Atg8在自噬体形成调节及转运过程中的功能提供参考。

关键词： Atg8 自噬核质分布细胞因子

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