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靶向敲低核蛋白1抑制HepG2肝癌细胞的增殖及迁移

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第6期31卷 782-786页

作者：黄红艳张彦斌王小利周心娜李莎王嫚娜任军首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤内科肿瘤治疗性疫苗北京市重点实验室北京100038 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的观察应激相关核蛋白1(Nupr1)在不同肝癌细胞系中的表达,通过靶向敲低Hep G2肝癌细胞Nupr1,观察其对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法通过实时定量PCR检测BEL-7402、QSG-7703、SMMC-7721、Hep G2肝癌细胞中Nupr1的表达。采用RNA干扰... 详细信息

目的观察应激相关核蛋白1(Nupr1)在不同肝癌细胞系中的表达,通过靶向敲低Hep G2肝癌细胞Nupr1,观察其对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法通过实时定量PCR检测BEL-7402、QSG-7703、SMMC-7721、Hep G2肝癌细胞中Nupr1的表达。采用RNA干扰技术敲低Hep G2细胞中Nupr1的表达,通过MTT法及集落形成实验比较细胞的增殖能力的变化,用流式细胞术进行细胞周期分析,利用TranswellTM实验观察Nupr1对细胞迁移能力的影响。结果 Hep G2人肝癌细胞中Nupr1的表达显著高于其他肝癌细胞系。靶向Nupr1的2个短发夹RNA(shRNA)均能有效敲低Hep G2肝癌细胞中Nupr1的表达,抑制效率分别为72.25%和84.25%。Nupr1表达降低能够抑制细胞增殖,导致细胞周期发生G1期阻滞。Nupr1敲低显著降低细胞的迁移能力及集落形成能力。Western blot结果显示Nupr-1表达降低能够上调细胞周期负性调控因子p21和p27的表达水平。结论靶向敲低Nupr1抑制Hep G2肝癌细胞的增殖及迁移。

关键词：肝癌核蛋白1 增殖迁移细胞周期

敲低核蛋白1通过抑制软骨细胞铁死亡延缓骨关节炎病理进展

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浙江大学学报(医学版) 2024年

作者：廖太阳马振源刘德仁施蕾茆军王培民丁亮南京中医药大学附属医院骨伤科南京中医药学大学代谢病中医研究重点实验室

目的:研究核蛋白1(Nupr1)调控软骨细胞铁死亡在骨关节炎进展中的作用及机制。方法:将小鼠膝关节软骨细胞分为小干扰RNA(siRNA)对照组、靶向Nupr1的siRNA(siNupr1)组、siRNA对照+IL-1β组（siRNA对照干扰24 h后再加入10 ng/mL IL-1β）和... 详细信息

目的:研究核蛋白1(Nupr1)调控软骨细胞铁死亡在骨关节炎进展中的作用及机制。方法:将小鼠膝关节软骨细胞分为小干扰RNA(siRNA)对照组、靶向Nupr1的siRNA(siNupr1)组、siRNA对照+IL-1β组（siRNA对照干扰24 h后再加入10 ng/mL IL-1β）和siNupr1+IL-1β组（siNupr1干扰24 h后再加入10 ng/mL IL-1β）。采用蛋白质印迹法和实时逆转录聚合酶链反应法分别检测Nupr1蛋白及其信使RNA(mRNA)表达。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活性，FerroOrange染色法检测亚铁离子水平，C11-BODIPY-591荧光显影法检测脂质过氧化水平，酶联免疫吸附试验检测丙二醛和谷胱甘肽含量。蛋白质印迹法检测长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、P53、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)表达。通过膝关节内侧半月板失稳术（DMM）造模构建骨关节炎小鼠模型，将7周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术+腺相关病毒5型（AAV5）-短发夹RNA(shRNA)对照组、假手术+AAV5-靶向Nupr1的shRNA(shNupr1)组、DMM+AAV5-shRNA对照组和DMM+AAV5-shNupr1组，每组各10只，采用苏木精-伊红染色和番红O-固绿染色观察软骨组织病理形态学变化并通过国际骨关节炎研究协会（OARSI）骨关节炎软骨组织病理学评分评价小鼠软骨退变程度。实时逆转录聚合酶链反应法检测基质金属蛋白酶13(MMP13)、一种具有血小板反应蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶5(ADAMTS5)、环氧合酶2(COX2)、GPX4的mRNA表达。结果:体外实验结果显示，敲低Nupr1可缓解IL-1β诱导的软骨细胞增殖活性下降，减少小鼠软骨细胞中铁蓄积，降低脂质过氧化水平，下调ACLS4、P53蛋白表达，上调GPX4、SLC7A11蛋白表达（均P<0.01），抑制小鼠软骨细胞铁死亡。动物实验结果显示，敲低Nupr1可延缓骨关节炎小鼠关节软骨退变，改善OARSI评分，减缓骨关节炎软骨细胞外基质降解，减少铁死亡主要调节因子GPX4的表达（均P<0.01）。结论:敲低Nupr1可通过抑制小鼠软骨细胞铁死亡延缓骨关节炎病理进展。

关键词：核蛋白1 骨关节炎软骨细胞铁死亡小鼠

微小RNA-296-3p靶向核蛋白1调控舌鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

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中国医师进修杂志 2021年第10期44卷 902-907页

作者：孙晓辉宋杰山东省聊城市第四人民医院口腔科 252200 山东省聊城市第三人民医院口腔科 252000

目的研究微小RNA-296-3p对舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法以正常口腔上皮黏膜角质细胞HOK为对照,实时定量聚合酶链反应法检测舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p和核蛋白1(NUPR1)mRNA... 详细信息

目的研究微小RNA-296-3p对舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法以正常口腔上皮黏膜角质细胞HOK为对照,实时定量聚合酶链反应法检测舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p和核蛋白1(NUPR1)mRNA的表达,蛋白印迹法检测NUPR1蛋白表达水平。CAL27细胞分为对照组(NC组)、miR-con组、miR-296-3p组、si-con组、si-NUPR1组、miR-296-3p+pcDNA组和miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组,细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证CAL27细胞中miR-296-3p与NUPR1的调控关系。结果与HOK细胞相比,在舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p的含量显著降低(0.54±0.08、0.38±0.05、0.59±0.07比1.04±0.12,t=10.401、15.231、9.718,P均蛋白(0.79±0.09、0.54±0.05、0.62±0.08比0.28±0.04,t=15.535、12.182、11.404)表达量均显著升高(P均蛋白表达均降低(P均蛋白表达均降低(P均蛋白表达均升高(P均<0.05)。结论miR-296-3p通过靶向负调控NUPR1表达抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：舌肿瘤微小RNA-296-3p 核蛋白1 细胞增殖细胞运动肿瘤侵润

核蛋白1在口腔鳞状细胞癌发生发展中的研究进展

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医学综述 2024年第24期30卷 2979-2983页

作者：阿丽米热·阿不都那斯尔李军新疆医科大学研究生学院乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区人民医院颌面外科乌鲁木齐830001

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一,具有恶性程度高、侵袭性强、极易发生淋巴结转移的特点,给患者带来极大的病痛及经济负担。近年来,越来越多的研究开始聚焦于OSCC发生发展的分子机制,其中核蛋白1作为一种在应激... 详细信息

口腔鳞状细胞癌(OSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一,具有恶性程度高、侵袭性强、极易发生淋巴结转移的特点,给患者带来极大的病痛及经济负担。近年来,越来越多的研究开始聚焦于OSCC发生发展的分子机制,其中核蛋白1作为一种在应激反应中表达上调的分子,具有多种生物学功能,尤其在肿瘤的发生发展过程中作用显著,与肿瘤的增殖和转移密切相关。因此,深入探究OSCC的分子机制、寻找新的治疗靶点,对改善OSCC患者预后具有重要意义。

关键词：口腔鳞状细胞癌核蛋白1 自噬

沉默NUPR1降低人多发性骨髓瘤U266细胞自噬并促进其迁移和侵袭

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第三军医大学学报 2019年第23期41卷 2322-2327页

作者：李星欣黎安茂曾沉思陈建斌重庆医科大学附属第一医院血液内科

目的探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤细胞自噬、迁移和侵袭的影响及其机制。方法用含有NUPR1-shRNA慢病毒载体的病毒感染骨髓瘤U266细胞,通过流式细胞术检测转染效率,实验分为阴性对照组(转染无关序列shRNA... 详细信息

目的探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤细胞自噬、迁移和侵袭的影响及其机制。方法用含有NUPR1-shRNA慢病毒载体的病毒感染骨髓瘤U266细胞,通过流式细胞术检测转染效率,实验分为阴性对照组(转染无关序列shRNA慢病毒)和敲低组(转染NUPR1-shRNA慢病毒)。qRT-PCR检测NUPR1mRNA表达,Western blot检测NUPR1、自噬相关蛋白(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、ATG5和P62)、迁移和侵袭相关蛋白(MMP9、CXCR4)以及通路蛋白(p-AKT/T-AKT和p-mTOR/T-mTOR)的表达;透射电子显微镜(TEM)观察自噬小体;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。结果与阴性对照组比较,敲低组NUPR1 mRNA和蛋白表达显著下调(P蛋白ATG5、Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达明显降低(P蛋白表达明显增高(P<0.05);敲低组自噬小体明显减少,细胞迁移和侵袭能力增强,雷帕霉素可阻断该促进作用。结论沉默NUPR1可能通过降低自噬水平促进U266细胞迁移和侵袭,并可能与AKT/mTOR通路激活有关。

关键词：核蛋白1 多发性骨髓瘤自噬迁移侵袭

沉默NUPR1基因对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及机制研究

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重庆医科大学学报 2019年第2期44卷 146-151页

作者：李星欣曾沉思杨泽松黎安茂陈建斌重庆医科大学附属第一医院血液科实验研究中心重庆400016

目的:探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及可能机制。方法:以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1和自... 详细信息

目的:探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及可能机制。方法:以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1和自噬相关基因(ATG5和Beclin1)mRNA水平。构建含有靶向抑制NUPR1基因表达的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)序列的NUPR1-shRNA慢病毒载体,并将其转染人多发性骨髓瘤U266细胞。实验分为未转染组、阴性对照转染组和转染组,qRT-PCR、Western Blot检测NUPR1干扰效果、3组细胞自噬相关指标(ATG5、Beclin1、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)及相关通路蛋白(p-AKT/T-AKT、p-mTOR/T-mTOR)的表达;单丹磺酰戊二酸(monodansylcadaverine,MDC)染色后,荧光显微镜下观察自噬囊泡的聚集。结果:人多发性骨髓瘤U266细胞较正常人骨髓单个核细胞及转染组细胞NUPR1(F=7.747,P=0.004)、Beclin1(F=5.548,P=0.013)和ATG5(F=4.031,P=0.034)mRNA水平明显增高。转染组NUPR1(F=9.798,P=0.013)、ATG5(F=7.017,P=0.027)、Beclin1(F=7.213,P=0.025)和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(F=7.040,P=0.027)蛋白表达较未转染组和阴性对照转染组明显降低,而P62(F=52.622,P=0.000)、p-AKT/T-AKT(F=6.584,P=0.031)和p-mTOR/T-mTOR(F=7.950,P=0.021)蛋白表达明显增高;转染组细胞胞质内自噬囊泡聚集明显减少(F=12.172,P=0.008)。结论:人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1高表达,自噬水平较正常人骨髓单个核细胞高。沉默NUPR1可下调U266细胞自噬水平。NUPR1基因可能通过AKT/mTOR通路调节U266细胞自噬。

关键词：核蛋白1 多发性骨髓瘤自噬 AKT/mTOR信号通路

NUPR1基因对人多发性骨髓瘤细胞自噬及凋亡的影响及机制研究

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NUPR1基因对人多发性骨髓瘤细胞自噬及凋亡的影响及机制研究

作者：黎安茂重庆医科大学

学位级别：硕士

目的研究NUPR1基因及自噬标记物在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）患者骨髓的表达。构建慢病毒沉默NUPR1基因,转染MM细胞株,创新性探讨NUPR1基因对MM细胞自噬及凋亡的影响及机制。方法1.收集初诊MM患者骨髓标本28例,健康志愿者骨... 详细信息

目的研究NUPR1基因及自噬标记物在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）患者骨髓的表达。构建慢病毒沉默NUPR1基因,转染MM细胞株,创新性探讨NUPR1基因对MM细胞自噬及凋亡的影响及机制。方法1.收集初诊MM患者骨髓标本28例,健康志愿者骨髓标本10例,同时收集上述患者临床信息。提取骨髓标本单个核细胞,检测骨髓NUPR1和自噬标记物mRNA相对表达量,分析NUPR1、自噬标记物及患者临床特征的相关性。2.体外细胞实验:构建靶向NUPR1基因shRNA慢病毒及阴性对照慢病毒,转染人MM细胞株（U266和RPMI 8226）。实验分为三组:未转染病毒空白组（Blank）、阴性对照慢病毒转染组（NC-LV）和NUPR1shRNA慢病毒转染组（NUPR1-LV）。应用流式细胞术检测转染效率,qRT–PCR及Western blot验证NUPR1沉默效果。透射电子显微镜（TEM）和单丹磺酰尸胺（MDC）染色检测NUPR1沉默对MM细胞自噬活性的影响;流式细胞术和Hoechst染色评估各组细胞凋亡情况;Western blot评估MM细胞自噬、凋亡相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达情况。以自噬诱导剂雷帕霉素（RAPA）、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）及PI3K抑制剂LY294002处理MM细胞,Western blot检测相关蛋白表达水平。结果***患者骨髓单个核细胞NUPR1基因表达及自噬活性呈高水平:NUPR1基因及自噬标记物（Beclin1、ATG5和ATG12）mRNA水平在初诊MM患者骨髓标本中表达增加,且NUPR1与Beclin1、ATG5和ATG12基因水平呈正相关关系。骨髓NUPR1高表达与患者临床分期（RISS和D-S分期）?血钙水平和骨髓浆细胞数比例呈正相关,与血红蛋白水平负相关。***1 shRNA慢病毒成功转染人MM细胞:流式细胞术示NC-LV和NUPR1-LV组细胞转染率均达80%以上,qRT–PCR及Western blot证实NUPR1沉默效果显著。3.沉默NUPR1导致MM细胞自噬活性降低:TEM结果示NUPR1-LV组自噬小体较Blank和NC-LV组明显减少,MDC也显示NUPR1沉默组自噬颗粒减少,Western blot结果表明与Blank和NC-LV组相比,NUPR1-LV组LC3 II/LC3 I比值和Beclin1表达下调,P62蛋白表达上调。4.沉默NUPR1激活MM细胞凋亡:流式细胞术检测显示NUPR1-LV组凋亡率较NC-LV组明显增加,Hoechst染色也显示NUPR1-LV组凋亡细胞增加,且NUPR1沉默后MM细胞cleaved caspase3和BAX蛋白表达升高,BCL2表达降低。***1沉默通过抑制自噬活性促进MM细胞凋亡:RAPA处理后,Western blot发现NUPR1-LV组细胞自噬水平增加、凋亡减少;而3-MA干预后,NUPR1沉默组细胞自噬受抑、凋亡增加。***1通过PI3K/AKT/mTOR通路影响MM细胞自噬及凋亡:沉默NUPR1后MM细胞总PI3K、AKT、mTOR表达无明显变化,而磷酸化PI3K、AKT、mTOR表达增加;PI3K抑制剂LY294002处理引起细胞自噬活性增加?凋亡水平降低。结论MM患者骨髓单个核细胞NUPR1基因表达增高,自噬活性增强,且与患者临床特征存在一定相关性;沉默NUPR1可通过抑制MM细胞自噬活性诱导细胞凋亡,该作用由PI3K/AKT/mTOR通路介导;本研究结果提示NUPR1可能成为MM治疗的一个潜在靶点。

关键词：多发性骨髓瘤核蛋白1 PI3K/AKT/mTOR 自噬凋亡

慢性鼻窦炎伴鼻息肉合并哮喘患者息肉组织中ar和nupr1表达及临床意义

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慢性鼻窦炎伴鼻息肉合并哮喘患者息肉组织中ar和nupr1表达及临床...

作者：李谷雨中国医科大学

学位级别：硕士

目的:利用生物信息技术筛选出慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSw NP)合并哮喘(asthma,AS)患者中铁死亡相关差异表达显著的雄激素受体(ar)和核蛋白1(nupr1)基因。探讨ar、nupr1基因分别在CRSw NP合并AS... 详细信息

目的:利用生物信息技术筛选出慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSw NP)合并哮喘(asthma,AS)患者中铁死亡相关差异表达显著的雄激素受体(ar)和核蛋白1(nupr1)基因。探讨ar、nupr1基因分别在CRSw NP合并AS、单纯CRSw NP、对照组中的表达,探究ar、nupr1基因表达与鼻息肉伴哮喘患者临床症状相关性。方法:从GEO数据库中筛选出CRSw NP伴哮喘转录组数据集,利用生信技术筛选出与铁死亡显著相关的特征基因。选取32例来自于2021年3月-2022年3月于某三甲医院行鼻内镜手术治疗、经术后病理证实为鼻息肉的组织标本,并根据其有无哮喘分为CRSw NP伴哮喘组(15例)及CRSw NP不伴哮喘组(17例)与同期行上颌窦囊肿摘除术的钩突黏膜组织标本(20例)。检测三组组织ar、nupr1 m RNA表达量,并对三组结果进行t检验分析;利用HE染色可统计出各组标本嗜酸粒细胞,与ar、nupr1表达量采用Pearson相关分析;采用普鲁士染色观察鼻息肉伴哮喘与对照组是否存在明显铁沉积差别。将鼻窦Lund-Mackey CT评分及术前Snot-22评分与表达量做相关分析,当P1,与对照组相比较ar及nupr1基因在CRSw NP+AS中息肉组织表达低且有统计学意义,与对照组相比CRSw NP组中息肉组织中检测值则无统计学意义;ar及nupr1基因表达与CRSw NP+AS中息肉组织嗜酸性粒细胞计数有统计学意义,ar及nupr1基因表达越低嗜酸性粒细胞计数越大,呈负相关;CRSw NP+AS中息肉组织表达与对照组相比,普鲁士蓝染色出现明显铁沉积。慢性鼻窦炎伴鼻息肉合并哮喘患者的息肉组织中ar基因表达分别与术前SNOT-22评分、鼻窦Lund-Mackay CT评分呈现负相关,nupr1因表达与术前SNOT-22评分也呈负相关。结论:ar及nupr1基因在CRSw NP+AS中息肉组织表达低且与对照组相比较有统计学意义,提示这两个基因可以作为潜在标志物。这两个基因表达与CRSw NP+AS中息肉组织嗜酸性粒细胞计数呈负相关,且CRSw NP+AS中息肉组织中普鲁士蓝染色出现明显铁沉积,这两个基因在作用时可能与嗜酸性粒细胞有关且与铁沉积有关。

关键词：慢性鼻窦炎鼻息肉哮喘雄激素受体核蛋白1 铁死亡

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NUPR1在肿瘤发展中的研究进展

现代肿瘤医学 2024年第15期32卷 2897-2902页

作者：王靖路一平孙峥嵘中国医科大学附属盛京医院辽宁沈阳110004

核蛋白1 (nuclear protein1,NUPR1)是核固有的紊乱蛋白和应激蛋白。在外部应激(如辐射、致癌物质等)或内部应激(如氧化应激、内质网应激等)条件下,NUPR1被转录激活,以保护细胞免受应激损伤。同时,NUPR1也是一种转录因子,通过调控细胞凋... 详细信息

核蛋白1 (nuclear protein1,NUPR1)是核固有的紊乱蛋白和应激蛋白。在外部应激(如辐射、致癌物质等)或内部应激(如氧化应激、内质网应激等)条件下,NUPR1被转录激活,以保护细胞免受应激损伤。同时,NUPR1也是一种转录因子,通过调控细胞凋亡、自噬、铁死亡、细胞周期、DNA损伤等细胞活动参与多种癌症的进展。研究表明,NUPR1在胰腺癌、乳腺癌、肺癌及肝癌中表达均明显升高,但其导致恶性肿瘤发生的分子调控机制尚未完全明确。因此,该文就NUPR1的基本特征及其在人类恶性肿瘤发生、发展和治疗中相关研究进展进行综述,以期为肿瘤的治疗提供新的思路。

关键词：核蛋白1 应激癌症分子机制