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中国微生态学杂志 2017年第4期29卷 381-384,389页

作者：李明白亚强何春阳鄢秋龙房慧李志袁杰力李文哲大连医科大学基础医学院辽宁大连116044 哈尔滨商业大学药学院黑龙江哈尔滨150000 大连市中心医院检验科辽宁大连116044

目的探究Fut8基因敲除对ICR小鼠肠道菌群结构的影响。方法分别在Fut8^(+/+)和Fut8^(-/-)小鼠出生后不同时间点检测体重,采集粪便样本,采用PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)的方法检测小鼠粪便中菌群的组成;利用高效液相色谱法(HPLC)测定F... 详细信息

目的探究Fut8基因敲除对ICR小鼠肠道菌群结构的影响。方法分别在Fut8^(+/+)和Fut8^(-/-)小鼠出生后不同时间点检测体重,采集粪便样本,采用PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)的方法检测小鼠粪便中菌群的组成;利用高效液相色谱法(HPLC)测定Fut8^(+/+)和Fut8^(-/-)小鼠Fut8酶活。结果 Fut8^(-/-)小鼠与Fut8^(+/+)小鼠相比生长缓慢(P核心岩藻糖基化活性;肠道菌群结构不同,其中拟杆菌门微生物存在显著差异。结论核心岩藻糖基转移酶Fut8基因敲除对小鼠肠道菌群结构有显著影响。

关键词：核心岩藻糖基转移酶 Fut8基因基因敲除肠道菌群核心岩藻糖

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阻断核心岩藻糖基化修饰抑制肾小管上皮细胞的间充质转化

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中国病理生理杂志 2011年第7期27卷 1382-1388页

作者：王大鹏林洪丽沈楠董毳孙艳玲谢华于长青王楠单路娟大连医科大学附属第一医院肾内科辽宁大连116011 大连医科大学附属第一医院中心实验室辽宁大连116011

目的:探讨阻抑核心岩藻糖基化修饰对肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)过程的影响。方法:利用转化生长因子β1(TGF-β1)建立肾小管上皮HK-2细胞EMT的模型,应用RNAi技术沉默HK-2细胞的α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因表达,光镜下观察FUT8... 详细信息

目的:探讨阻抑核心岩藻糖基化修饰对肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)过程的影响。方法:利用转化生长因子β1(TGF-β1)建立肾小管上皮HK-2细胞EMT的模型,应用RNAi技术沉默HK-2细胞的α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因表达,光镜下观察FUT8基因沉默后细胞形态变化,免疫印迹及免疫细胞化学方法测定细胞表型标记物蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)的表达变化,流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:TGF-β1孵育48 h后,HK-2细胞失去原有的上皮细胞形态,呈现纤维细胞形态,纤维细胞表型标记蛋白α-SMA、FSP-1及N-cad-herin表达明显升高,而上皮细胞表型标记蛋白E-cadherin表达明显下降,同时伴有FUT8基因表达上调,细胞凋亡增加,而提前转染FUT8 siRNA能明显减弱上述这些反应。结论:FUT8催化的核心岩藻糖基化修饰参与HK-2细胞的EMT过程;阻断核心岩藻糖基化修饰,能有效阻断肾小管上皮细胞的EMT过程。

关键词：核心岩藻糖基化上皮细胞间充质转分化核心岩藻糖基转移酶 HK-2细胞

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B细胞受体核心岩藻糖基化调节成熟B细胞的信号转导

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 320-323页

作者：于蕊刘红霞孙世杰王惠国李文哲大连大学生命科学与技术学院生物学专业大连116622 大连医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室大连116044

目的探讨核心岩藻糖基转移酶(Fut8)对成熟B细胞信号转导的影响。方法利用Fut8-siRNA逆转录病毒载体建立Fut8基因沉默成熟B细胞株(3-83-KD细胞),并将PLHCX-Fut8质粒导入3-83-KD细胞建立Fut8基因恢复成熟B细胞株(3-83-KD-Re)。用Real time... 详细信息

目的探讨核心岩藻糖基转移酶(Fut8)对成熟B细胞信号转导的影响。方法利用Fut8-siRNA逆转录病毒载体建立Fut8基因沉默成熟B细胞株(3-83-KD细胞),并将PLHCX-Fut8质粒导入3-83-KD细胞建立Fut8基因恢复成熟B细胞株(3-83-KD-Re)。用Real time-PCR、Western blot和HPLC法检测Fut8 mRNA、蛋白表达和Fut8酶活性,流式细胞仪和凝集素免疫印迹检测BCR的表达量和核心岩藻糖基化水平,Western blot技术检测细胞内酪氨酸磷酸化水平。结果与3-83细胞相比,3-83-KD细胞的BCR核心岩藻糖基化水平明显下降,而3-83-KD-Re细胞其表达得到恢复。Fut8基因沉默使3-83-KD细胞BCR介导的信号传导明显减弱,而3-83-KD-Re细胞的信号传导恢复正常。结论 Fut8修饰的核心岩藻糖基化在BCR介导的细胞信号转导过程中发挥重要的调节作用。

关键词：核心岩藻糖基转移酶 siRNA B细胞受体信号转导

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Wnt/β-catenin信号途径和核心岩藻糖基化的交互作用在HEK293T细胞中的作用机制研究

Wnt/β-catenin信号途径和核心岩藻糖基化的交互作用在HEK293T细...

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作者：郭笑寒大连医科大学

学位级别：硕士

岩藻糖基转移酶8(Fucosyltransferases 8,FUT8)又称为核心岩藻糖基转移酶,识别N-糖链与天冬酰胺相连的核心Glc NAc,将岩藻糖基从供体GDP-Fucose转移至此位置,形成?1,6糖苷键。岩藻糖基转移酶家族共有13个成员,而FUT8地位特殊,它识别位... 详细信息

岩藻糖基转移酶8(Fucosyltransferases 8,FUT8)又称为核心岩藻糖基转移酶,识别N-糖链与天冬酰胺相连的核心Glc NAc,将岩藻糖基从供体GDP-Fucose转移至此位置,形成?1,6糖苷键。岩藻糖基转移酶家族共有13个成员,而FUT8地位特殊,它识别位点单一,且没有功能冗余,对其进行研究具有重要意义。FUT8通过对靶蛋白的N-糖链进行修饰而影响其结构和功能,从而参与细胞内信号通路、细胞增殖、侵袭转移、细胞间粘附、免疫应答等过程。已有研究表明,FUT8在神经突触形成、老化等生理过程发挥重要作用;在肝癌、结肠癌、肺癌、慢阻肺、卵巢癌、肾纤维化、胃癌、胰腺癌、神经分裂等多种疾病中出现表达和活性异常,其靶蛋白AFP已经作为分子标志物,应用于肝癌临床诊断。Wnt信号通路在细胞增殖、分化、维持成体干细胞自我更新等生理过程发挥着重要作用,同时在肝癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、毛囊癌等多种疾病中表出现过度激活。在目前已知的三条Wnt信号通路传导途径中,经典Wnt/β-catenin信号途径的研究最为透彻,本文在此基础上作进行研究。在肝癌、肺癌、结肠癌等多种疾病中,大量病例同时出现Wnt/β-catenin信号途径过度激活和FUT8表达异常,而此二者之间是否存在协同关系尚未明确。本实验利用HEK293T细胞,其Wnt信号通路处于正常状态,FUT8表达及活性处于正常水平;通过过表达相关蛋白,观察该信号通路和FUT8及核心岩藻糖基化的交互作用,并对其分子机制进行初步探索。实验方法:1)在HEK293T细胞中,通过过表达β-catenin、Wnt3a蛋白来激活Wnt信号通路,利用Western-blot和HPLC检测细胞内FUT8蛋白表达水平和催化活性;2)通过转染FUT8过表达质粒及其空载体,利用Western-blot、荧光素酶报告基因、细胞免疫荧光化学等实验,观察FUT8对Wnt/β-catenin信号途径的激活作用;利用平板克隆形成实验观察FUT8对细胞增殖能力的影响;3)利用蛋白合成抑制剂Cycloheximide和蛋白酶体抑制剂MG132,观察FUT8对β-catenin蛋白稳定性和细胞内整体泛素化水平的影响;利用免疫共沉淀、Lectin-blot、Western-blot等实验观察核心岩藻糖基化修饰对β-catenin蛋白的影响。实验结果:1)Western-blot和HPLC结果显示,在HEK293T细胞中,Wnt/β-catenin信号途径激活时,FUT8蛋白表达水平增高,催化活性增强;2)Western-blot结果显示,过表达外源性FUT8后,HEK293T细胞内Wnt/β-catenin信号途径主要分子β-catenin、Wnt3a、Dvl2蛋白含量增加,该通路靶基因表达上调;细胞免疫荧光化学、荧光素酶报告基因结果显示,过表达外源性FUT8促使β-catenin蛋白定位于细胞核,激活信号通路;同时,平板克隆形成实验结果显示,过表达FUT8可以增强HEK293T细胞活力,促进细胞增殖;3)Western-blot结果显示,过表达FUT8能够提高HEK293T细胞内β-catenin蛋白稳定性,降低细胞内蛋白泛素化修饰水平;免疫共沉淀及Lectin-blot结果显示,β-catenin或该通路其他分子可能作为FUT8靶蛋白发生核心岩藻糖基化修饰。实验结论:在HEK293T细胞中,激活Wnt/β-catenin信号途径可以上调FUT8蛋白表达水平和催化活性。过表达核心岩藻糖基转移酶FUT8可以激活Wnt/β-catenin信号途径,同时促进细胞增殖。上述现象可能的分子机制是FUT8过表达后导致Wnt/β-catenin信号途径中β-catenin或其他重要分子发生核心岩藻糖基化修饰,阻碍β-catenin发生磷酸化和泛素化修饰,抑制β-catenin经由蛋白酶体途径降解,导致其在细胞内累积,并由此激活Wnt/β-catenin信号途径。

关键词：核心岩藻糖基转移酶 FUT8 Wnt/β-catenin 信号途径 HEK293T 细胞

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母乳核心岩藻糖基对子代肠道菌群及RORγt+ Treg细胞介导的免疫耐受的影响研究

母乳核心岩藻糖基对子代肠道菌群及RORγt+ Treg细胞介导的免疫耐...

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第五届益生菌益生元科学大会

作者：宁茜茜李明大连医科大学基础医学院微生态教研室

岩藻糖基化母乳聚糖对新生儿肠道菌群定植有重要影响,后者可调节RORγt Treg细胞进而促进免疫耐受的形成。方法:本研究以核心岩藻糖基转移酶Fut8杂合（Fut8+/-）母鼠哺乳子代小鼠,并建立子代过敏模型,深入探究母乳核心岩藻糖基对子代肠... 详细信息

岩藻糖基化母乳聚糖对新生儿肠道菌群定植有重要影响,后者可调节RORγt Treg细胞进而促进免疫耐受的形成。方法:本研究以核心岩藻糖基转移酶Fut8杂合（Fut8+/-）母鼠哺乳子代小鼠,并建立子代过敏模型,深入探究母乳核心岩藻糖基对子代肠道菌群及免疫耐受形成的影响及机制。结果:（1）与WT母鼠哺育的子鼠相比较,Fut8+/-母鼠哺育的子鼠在OVA致敏后,其血清过敏相关炎症因子显著增加,脾脏及派氏结中Treg细胞及RORγt Treg比例显著下调,Th17细胞比例显著升高;（2） Fut8+/-母鼠所哺育的子鼠肠道菌群组成有明显改变,主要表现为罗伊氏乳杆菌、约氏乳杆菌比例显著降低;（3）以罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌干预食物过敏子鼠后发现其过敏指标下降,派氏结RORγt Treg细胞比例上调。结论:母乳核心岩藻糖基可能通过调节子代肠道菌群,特别是罗伊斯乳杆菌和约氏乳杆菌的优势生长,间接的调节了肠道RORγt Treg的增殖分化,从而促进免疫耐受的建立;深入机制有待探究。本研究为开发防治新生儿食物过敏的微生态制剂提供新思路。

关键词：核心岩藻糖基转移酶肠道菌群 RORγt+ Treg细胞免疫耐受

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HEK293T细胞中Wnt/β-catenin信号途径与核心岩藻糖基化的交互作用

HEK293T细胞中Wnt/β-catenin信号途径与核心岩藻糖基化的交互作用

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第五届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会

作者：郭笑寒柳林华靳利远张嘉宁大连医科大学生物化学与分子生物学教研室糖生物学研究所大连理工大学生命与医药学院

岩藻糖基转移酶8(Fucosyltransferases 8,FUT8)又称为核心岩藻糖基转移酶,识别N-糖链与天冬酰胺相连的核心Glc NAc,将岩藻糖基从供体GDP-Fucose转移至此位置,形成?1,6糖苷键。Wnt信号通路在细胞增殖、分化、维持成体稳态、干细胞自我更... 详细信息

岩藻糖基转移酶8(Fucosyltransferases 8,FUT8)又称为核心岩藻糖基转移酶,识别N-糖链与天冬酰胺相连的核心Glc NAc,将岩藻糖基从供体GDP-Fucose转移至此位置,形成?1,6糖苷键。Wnt信号通路在细胞增殖、分化、维持成体稳态、干细胞自我更新等生理过程发挥着重要作用,同时在肝癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、毛囊癌等多种疾病中同时出现Wnt/β-catenin信号途径过度激活和FUT8表达异常,但此二者之间是否存在协同关系尚未明确。本实验结果表明,在HEK293T细胞中激活Wnt/β-catenin信号途径后,核心岩藻糖基转移酶FUT8蛋白表达水平和酶催化活性均上升。有趣的是,反过来过度表达FUT8时,β-catenin泛素化水平降低,在细胞内以及核内β-catenin的表达水平上调,因而Wnt/β-catenin信号途径被激活。进一步的克隆形成实验表明,FUT8的过度表达能够同时促进细胞增殖。以上结果提示:FUT8的表达可能导致Wnt/β-catenin信号途径中β-catenin或其他重要分子发生核心岩藻糖基化修饰,阻碍β-catenin发生磷酸化和泛素化修饰,从而抑制β-catenin经由蛋白酶体途径降解,导致其在细胞内累积,并由此激活Wnt/β-catenin信号途径。因此,在HEK293T细胞中Wnt/β-catenin信号通路和FUT8之间存在有正反馈的交互作用。

关键词：核心岩藻糖基转移酶 FUT8 Wnt/β-catenin信号途径 HEK293T细胞

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