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作者：付瑜瑜赣南医学院

学位级别：硕士

背景:BAF(Brg/Brm-associated factors)复合体是一种依赖于ATPase的多亚基染色质重构体,可通过招募表观遗传因子重塑染色质,从而调控特定位点的基因组表达。研究表明,BAF复合体在维持正常的生物体功能中发挥重要作用,尤其是神经发育过程... 详细信息

背景:BAF(Brg/Brm-associated factors)复合体是一种依赖于ATPase的多亚基染色质重构体,可通过招募表观遗传因子重塑染色质,从而调控特定位点的基因组表达。研究表明,BAF复合体在维持正常的生物体功能中发挥重要作用,尤其是神经发育过程,包括神经干细胞的自我更新和增殖,树突发育和神经回路形成等。BAF复合物的核心亚基BAF155和BAF170维持着该复合物的完整性,当BAF155和BAF170被敲除后,所有其他已知的BAF亚基从复合体中解离,并通过蛋白酶体途径降解,从而影响神经细胞的染色质调控和基因表达。但是,目前对于BAF复合体中的核心亚基BAF155的调控机制尚不明确。课题组前期研究表明,E3泛素连接酶TRIM21可能与BAF155存在潜在的物理相互作用,但是,这种相互作用及其生物学意义也有待于进一步的挖掘。我们假设TRIM21通过物理相互作用并调节BAF155蛋白质降解,从而影响BAF155的生物学功能。因此了解TRIM21如何调节染色质重塑因子BAF155蛋白质水平及功能的研究,有助于揭示BAF155的稳态调控机制,对于理解TRIM21突变或/和BAF155突变所涉及的神经系统相关疾病至关重要。目的:通过探究E3泛素连接酶三基序蛋白21(tripartite motif-containing protein 21,TRIM21)与染色质重塑因子BAF155的相互作用,明确TRIM21在调控BAF155稳态的具体分子机制。方法:1.构建实验所需质粒,本研究中使用的质粒:p CAGGSBS-BAF155、pCMV-mycnuc-BAF155、TRIM21、HA-TRIM21、HA-TRIM21-△RING、HA-TRIM21-△B-BOX、HA-TRIM21-△SPRY、HA-TRIM21-△PRY、Control-shRNA、TRIM21-shRNA#1、TRIM21-shRNA#2、TRIM21-shRNA#3质粒均赠自Tran Tuoc博士,pcDNA-3xHA-Ub质粒赠自李玉梅博士,pcDNA3.1-3xHA-Ub-K48R和pcDNA3.1-3xHA-Ub-K63R通过PCR法突变生成。pCMV-myc-nuc-BAF155(1-956 aa)、(1-752 aa)、(1-608 aa)、(1-377aa)、(402-1105 aa)、(596-1105 aa)、(595-956 aa)等质粒通过扩增BAF155基因的不同片段(来自pCMV-myc-nuc-BAF155的扩增产物),插入由SalⅠ和NotⅠ酶切的pCMV-mycnuc载体构成。pcDNA3.1-HA-TRIM21-LD(C16A、C31A和H33W)表达质粒通过PCR诱导的突变法构建,将TRIM21-LD cDNA片段插入由EcoRI和XhoI酶切的pcDNA3.1-HA空载体(赠自Hueng-Sik Choi教授)构成。2.通过免疫共沉淀技术(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)检测TRIM21与BAF155的物理相互作用。在人胚肾细胞(HEK293T)中共转染过表达的HA-TRIM21与MycBAF155蛋白的真核表达质粒,通过Myc抗体免疫沉淀Myc-BAF155蛋白,检测共沉淀复合物中是否有HA-TRIM21的存在,从而确定细胞外源性的HA-TRIM21与MycBAF155是否存在相互作用;同样在HEK293T中提取全细胞裂解物,通过BAF155的抗体免疫沉淀BAF155,再通过蛋白质印迹技术检测TRIM21蛋白是否被共沉淀,从而确定细胞内源性的TRIM21与BAF155是否存在相互作用。3.通过蛋白质印迹技术(Western Blot,WB),在人胚肾细胞(HEK293T)和小鼠脑神经瘤细胞(Neuro-2A),检测过表达或敲低TRIM21对BAF155蛋白的影响。分别在HEK293T和Neuro-2A细胞中过表达或者敲低TRIM21基因,通过蛋白酶体抑制剂MG132处理后,经Western Blot检测BAF155在不同处理条件下的蛋白水平变化,以此探究TRIM21参与BAF155稳态调控的具体分子机制。结果:***21与BAF155存在相互作用当HEK293T过表达Myc-BAF155和HA-TRIM21时,Myc抗体将Myc-BAF155与HA-TRIM21免疫共沉淀,表明细胞外源性BAF155与TRIM21相互作用。同时提取HEK293T全细胞裂解物,用特异性BAF155抗体免疫沉淀BAF155,在共沉淀复合物中检测到TRIM21蛋白,说明细胞内源性BAF155与TRIM21相互作用。2.过表达/敲低TRIM21可降低/升高BAF155的蛋白表达水平。在Neuro-2A细胞

关键词：核小体重塑染色质重塑复合物SWI/SNF E3泛素连接酶 TRIM21 BAF155

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LSD1与肿瘤转移的研究进展

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广东医学 2016年第14期37卷 2211-2214页

作者：董奇丁杰贵州省人民医院胃肠外科贵阳550002

表观遗传是一种不基于DNA序列差异的核酸遗传,其能对基因产生可逆化修饰而激活或阻断基因的转录与翻译,在肿瘤的发生、增殖、侵袭转移甚至耐药的过程中发挥重要作用。表观遗传学的发展改变了人们对基因组的认识,不仅基因的结构包含遗传... 详细信息

表观遗传是一种不基于DNA序列差异的核酸遗传,其能对基因产生可逆化修饰而激活或阻断基因的转录与翻译,在肿瘤的发生、增殖、侵袭转移甚至耐药的过程中发挥重要作用。表观遗传学的发展改变了人们对基因组的认识,不仅基因的结构包含遗传信息,其修饰也可记载遗传信息。目前已知的表观遗传修饰主要包括：DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA（Micro RNA）及核小体重塑等。

关键词：肿瘤转移 LSD1 核小体重塑表观遗传侵袭转移甲基化酶雄激素受体乳腺癌细胞组蛋白修饰 DNA

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姜黄素对脑卒中预防的表观遗传影响

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中国现代医药杂志 2016年第9期18卷 98-101页

作者：陈宇虹汤永红南华大学附属第二医院神经内科湖南衡阳421001

脑卒中是因血液供应中断导致脑功能丧失的神经功能缺损症候群,可分为缺血和出血两大类。缺血性脑卒中的治疗手段包括溶栓、抗血小板药物、手术和卒中单元管理,对脑卒中的保护性治疗缺少循证医学证据。Alamy等[1]的研究发现,膳食成分对... 详细信息

脑卒中是因血液供应中断导致脑功能丧失的神经功能缺损症候群,可分为缺血和出血两大类。缺血性脑卒中的治疗手段包括溶栓、抗血小板药物、手术和卒中单元管理,对脑卒中的保护性治疗缺少循证医学证据。Alamy等[1]的研究发现,膳食成分对大脑正常运转有较大影响,而姜黄素表现出对表观遗传的影响。

关键词：表观遗传卒中单元血管保护作用神经功能缺损保护性治疗核小体重塑生物利用度脑功能快速代谢神经保护作用

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MTA1在喉鳞癌中的表达及其与淋巴转移关系的研究

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中国药物与临床 2016年第10期16卷 1460-1461页

作者：张海利温树信高伟张春明冯彦山西医科大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科太原030001

喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,其发病率目前有明显增长趋势,病死率较高。喉癌的病理类型以鳞状细胞癌为主[1],其主要以局部浸润转移及颈部淋巴结转移为主,是影响其预后的主要因素之一。MTA1是通过差异c DNA杂交技术从具有转移潜能... 详细信息

喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,其发病率目前有明显增长趋势,病死率较高。喉癌的病理类型以鳞状细胞癌为主[1],其主要以局部浸润转移及颈部淋巴结转移为主,是影响其预后的主要因素之一。MTA1是通过差异c DNA杂交技术从具有转移潜能的鼠乳腺癌细胞株中克隆出,并将其命名为肿瘤转移相关抗原1[2];是核小体重塑和脱乙酰基复合物（Nu RD）的成员，

关键词：喉鳞癌 MTA1 核小体重塑颈部淋巴结转移染色质重塑脱乙酰基肿瘤转移淋巴转移转移潜能鳞状细胞癌

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