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核仁素诱导自噬促进乳腺癌细胞增殖的作用机制

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医学研究与战创伤救治 2023年第1期36卷 7-12页

作者：李佳莉杨萍彭晨阳任安琦林之昊潘柳齐李安怡武福云湖北医药学院基础医学院十堰442000

目的核仁素Nucleolin(NCL)与多种肿瘤的发生发展密切相关,也是抗肿瘤的重要靶点。文中旨在研究NCL蛋白促进乳腺癌细胞增殖的机制,为乳腺癌的治疗提供新的靶点及治疗策略。方法NCL过表达实验分为4组:4TO组(细胞转染pcDNA/4T0空载体)、4TO... 详细信息

目的核仁素Nucleolin(NCL)与多种肿瘤的发生发展密切相关,也是抗肿瘤的重要靶点。文中旨在研究NCL蛋白促进乳腺癌细胞增殖的机制,为乳腺癌的治疗提供新的靶点及治疗策略。方法NCL过表达实验分为4组:4TO组(细胞转染pcDNA/4T0空载体)、4TO-NCL组(细胞转染4TO-NCL过表达载体)、4TO+Rapamycin组(细胞转染pcDNA/4T0后加入雷帕霉素处理)、4TO-NCL+Rapamycin组(细胞转染4TO-NCL过表达载体后加入雷帕霉素处理)。NCL敲低表达实验也分为4组:siRNA组(细胞转染对照siRNA)、NCLsiRNA组(细胞转染NCL siRNA)、siRNA+Rapamycin组(细胞转染siRNA后加入雷帕霉素处理)、NCLsiRNA+Rapamycin组(细胞转染NCL siRNA后加入雷帕霉素处理)。分别检测NCL过表达和敲低表达对乳腺癌细胞自噬相关蛋白表达的影响。NCL对自噬小体形成的影响,实验分为4组:GFP组(转染带有绿色荧光蛋白标签的GFP空载体)、GFP-NCL组(转染带有绿色荧光的NCL融合蛋白的GFP-NCL质粒)、GFP+Rapamycin组(转染带有绿色荧光蛋白标签的GFP空载体24 h后,加入Rapamycin处理细胞12 h)、GFP-NCL+Rapamycin组(转染带有绿色荧光的NCL融合蛋白的GFP-NCL质粒24 h后,加入Rapamycin处理细胞12 h)。NCL过表达实验分为4组:pcDNA/4T0组(细胞转染pcDNA/4T0空载体)、pcDNA/4T0-NCL过表达组(细胞转染4TO-NCL过表达载体)、pcDNA/4T0+3-MA组(细胞转染pcDNA/4T0空载体质粒后加入3-MA处理)、pcDNA/4T0-NCL+3-MA组(细胞转染4TO-NCL过表达载体后加入3-MA处理)。NCL敲低表达实验也分为4组:siRNA组(细胞转染对照siRNA)、NCL siRNA组(细胞转染NCL siRNA)、siRNA+3-MA组(细胞转染siRNA后加入3-MA)、NCLsiRNA+3-MA组(细胞转染NCL siRNA后加入3-MA)。MTT实验、EdU实验及细胞划痕实验检测NCL对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。结果免疫印迹结果显示,4TO-NCL过表达组与4TO组相比,P62的表达降低,Beclin的表达水平明显升高。MTT结果显示,与4T0组细胞活力(103.60±2.88)相比,4T0-NCL组(116.70±3.34)相对增强(P<0.05);pcDNA/4T0+3-MA组、pcDNA/4T0-NCL+3-MA组细胞活力(54.61±11.59、67.02±13.21)较pcDNA/4T0组、pcDNA/4T0-NCL组明显减弱(P<0.05)。NCL敲低表达得到了相反的结果。EdU实验结果与MTT结果一致。pcDNA/4TO-NCL组细胞的迁移率明显强于pcDNA/4TO组(P<0.0001);pcDNA/4TO-NCL+3-MA组细胞的迁移率较pcDNA/4TO-NCL组明显下降(P<0.05)。结论NCL蛋白与乳腺癌密切相关,并通过诱导自噬促进细胞的增殖,NCL作为乳腺癌诊断及治疗的重要靶点对临床应用具有重要意义。

关键词：核仁素乳腺癌细胞自噬增殖

核仁素在脓毒症小鼠心肌损伤中的表达及其作用

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中华医学杂志 2019年第1期99卷 57-61页

作者：蒋碧梅梁鹏飞唐玉婷孙慧陈诚肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学系长沙410008

目的探讨核仁素在脓毒症小鼠心肌损伤中的表达及其作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型。实验动物随机分为4组:野生鼠C57BL/6+假手术组(WT+Sham)、WT鼠+脓毒症组(WT+CLP)、心肌特异性过表达转基因鼠(TG鼠)+假手术组... 详细信息

目的探讨核仁素在脓毒症小鼠心肌损伤中的表达及其作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型。实验动物随机分为4组:野生鼠C57BL/6+假手术组(WT+Sham)、WT鼠+脓毒症组(WT+CLP)、心肌特异性过表达转基因鼠(TG鼠)+假手术组(TG+Sham)及TG鼠+脓毒症组(TG+CLP)。Western blotting观察脓毒症术后0、12、24、48 h核仁素的表达情况;术后24 h检测血流动力学指标、血清心肌损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白(cTnI)水平、心肌细胞中活性氧(ROS)及心肌组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平的变化情况。两组间数据比较采用t检验。结果与WT+Sham组相比,WT+CLP组心肌组织中核仁素表达明显升高(2.57±0.34比1.00±0.15,t=7.468,P核仁素表达上调,心肌特异性过表达核仁素可减轻脓毒症小鼠中氧化应激所致的心肌损伤和心功能障碍,降低其死亡率。

关键词：脓毒症小鼠心肌损伤核仁素氧化应激

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核仁素在肺动脉高压中的表达及作用初探

核仁素在肺动脉高压中的表达及作用初探

作者：王舒馨中南大学

学位级别：硕士

背景及目的:肺动脉高压(pulmonary artery hypertension,PAH)指在海平面、静息状态下通过右心漂浮导管测得平均肺动脉压升高,其恒定值≥25mm Hg。这是一种常见的心血管疾病,全球有1.0亿人患病,5年生存率仅为50%,故具有“心血管系统疾病... 详细信息

背景及目的:肺动脉高压(pulmonary artery hypertension,PAH)指在海平面、静息状态下通过右心漂浮导管测得平均肺动脉压升高,其恒定值≥25mm Hg。这是一种常见的心血管疾病,全球有1.0亿人患病,5年生存率仅为50%,故具有“心血管系统疾病中的癌症”一称。PAH的发病机制还不完全清楚,已知的机制主要包括肺血管内皮细胞损伤、血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)增殖、肺血管自主神经调节异常、细胞因子和炎症介质释放失衡等。核仁素(nucleolin,C23)是细胞内含量丰富的一种多功能RNA结合蛋白。本课题组前期研究发现,核仁素在心血管系统中发挥了重要作用,如减轻心脏缺血再灌注损伤,抑制心肌细胞凋亡,改善心肌梗死等。但核仁素在肺动脉高压发生、发展中是否有作用以及发挥何种作用尚不清楚。因此,本研究首先收集了临床肺动脉高压患者内膜剥离手术的内膜赘生物样本,观察肺动脉高压患者内膜组织中核仁素的表达情况,再采用野百合碱(monocrotaline,MCT)构建大鼠肺动脉高压模型,观察核仁素在肺动脉中的时空表达情况,并探讨其对血小板衍生生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)所致血管平滑肌细胞增增、迁移的影响。方法:收集肺动脉高压患者行肺动脉内膜环剥术后的内膜赘生物及血清;采用MCT构建大鼠肺动脉高压模型;采用PDGF-BB构建血管平滑肌细胞肺动脉高压细胞模型;组织块石蜡包埋切片、免疫荧光技术检测核仁素的表达及定位情况;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中核仁素和PDGF-BB的含量;蛋白质印迹(western blot,WB)、实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测核仁素的表达情况;采用核仁素过表达载体及RNA干扰技术,探讨核仁素对对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞增增、迁移的影响。结果:(1)组织块石蜡包埋切片、免疫荧光技术检测发现核仁素在肺动脉高压患者内膜组织中表达丰富;(2)核仁素与肺动脉血管平滑肌细胞和血管内皮细胞均存在共定位,且主要存在于血管平滑肌细胞中;(3)在PAH大鼠模型中,核仁素在肺动脉组织中的表达上升;(4)ELISA实验发现核仁素和PDGF-BB在肺动脉高压患者和肺动脉高压大鼠血清中的含量均上升;(5)PDGF-BB处理的VSMC细胞,细胞活力升高,细胞增殖、迁移能力提升,核仁素表达上调;(6)核仁素过表达促进PDGF-BB所致VSMC细胞增殖、迁移;而核仁素敲低能显著抑制PDGF-BB所致VSMC细胞的增殖、迁移。结论:核仁素在肺动脉高压患者内膜组织中表达丰富,主要存在于肺动脉血管平滑肌细胞中;核仁素通过促进血管平滑肌细胞增殖、迁移,促进肺血管重塑,参与肺动脉高压的发生、发展。图39幅,表5个,参考文献77篇

关键词：肺动脉高压核仁素血管平滑肌细胞增殖迁移

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核仁素在心血管疾病中的研究进展

中国细胞生物学学报 2022年第11期44卷 2164-2170页

作者：涂均楚王燕丽陆琳吴诚洁张瑜李杨欣苏州大学医学院心血管病研究所苏州大学附属第一医院心脏大血管外科苏州215006

心血管疾病是目前危害全球人类健康的首要风险因素。传统的治疗手段虽能延长患者寿命,但也存在着诸多风险,因此对于心血管疾病的治疗人们需要寻找更为有效的靶点。核仁素是一类广泛表达且高度保守的蛋白质,在多种心血管疾病病理过程中... 详细信息

心血管疾病是目前危害全球人类健康的首要风险因素。传统的治疗手段虽能延长患者寿命,但也存在着诸多风险,因此对于心血管疾病的治疗人们需要寻找更为有效的靶点。核仁素是一类广泛表达且高度保守的蛋白质,在多种心血管疾病病理过程中异常表达,直接影响细胞的相关功能,提示核仁素是心血管疾病的潜在治疗靶点。该文就核仁素在心血管疾病发生、发展中的作用加以综述。

关键词：核仁素心血管疾病分子调控机制

核仁素在血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞表型转化中的作用

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中国病理生理杂志 2019年第10期35卷 1753-1761页

作者：方立黄钦张银妆黄芳苑聪刘伟伟长沙市第一医院心血管内科二病区

目的:探讨核仁素在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化中的作用。方法:以AngⅡ诱导大鼠VSMCs表型转化为模型,观察AngⅡ对VSMCs表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙调理蛋白(calponin)、平滑肌蛋白22α(S... 详细信息

目的:探讨核仁素在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化中的作用。方法:以AngⅡ诱导大鼠VSMCs表型转化为模型,观察AngⅡ对VSMCs表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙调理蛋白(calponin)、平滑肌蛋白22α(SM22α)和骨桥蛋白(OPN)mRNA和蛋白表达的影响,并观察VSMCs表型转化时核仁素mRNA和蛋白的时空表达模式;进一步采用核仁素基因转染及RNA干扰技术观察核仁素对上述VSMCs表型转化标志物mRNA和蛋白表达的影响。结果:不同浓度的AngⅡ刺激VSMCs不同时间后,VSMCs收缩表型标志物α-SMA、calponin和SM22α的mRNA和蛋白表达逐渐减少,而合成表型标志物OPN的mRNA和蛋白表达逐渐增加(P核仁素的mRNA和蛋白表达在一定程度上逐渐升高;AngⅡ可诱导核仁素从细胞核向细胞浆移位;核仁素过表达可促进AngII诱导的VSMCs表型转化,核仁素表达下调后,其促进表型转化作用被解除。结论:核仁素具有促进AngII诱导的VSMCs表型转化的作用,核仁素的表达上调和移位参与AngII诱导的VSMCs表型转化。

关键词：核仁素血管紧张素Ⅱ 血管平滑肌细胞表型转化

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核仁素在结肠癌组织中的表达及临床意义

临床医学进展 2024年第3期14卷 2182-2195页

作者：曲竑宇李泽群刘学超李毅牛兆建青岛大学附属医院胃肠外科山东青岛

目的:核仁素(Nucleolin, NCL)已被证明在肿瘤中发挥重要作用,但结肠癌中NCL表达情况尚不明确。本研究旨在探究NCL在结肠癌中的表达情况与结肠癌临床病理特征以及预后的关系。方法:回顾性分析了青岛大学附属医院胃肠外科的184例结肠癌患... 详细信息

目的:核仁素(Nucleolin, NCL)已被证明在肿瘤中发挥重要作用,但结肠癌中NCL表达情况尚不明确。本研究旨在探究NCL在结肠癌中的表达情况与结肠癌临床病理特征以及预后的关系。方法:回顾性分析了青岛大学附属医院胃肠外科的184例结肠癌患者病历资料。采用免疫组织化学法检测研究对象组织标本的NCL表达情况。使用SPSS软件进行统计学分析。采用卡方检验比较NCL表达与临床特征间的关系。绘制生存曲线比较组间生存差异。使用Cox比例风险模型进行单因素和多因素分析。结果:细胞核NCL的高低表达与患者的脉管侵犯、T分期、N分期以及TNM分期有关;细胞膜NCL的高低表达与肿瘤大小、大体类型、脉管侵犯、T分期、N分期、M分期和TNM分期有关。与NCL高表达患者相比,NCL低表达患者预后总生存期更好。单因素Cox分析结果显示,肿瘤部位、肿瘤大小、脉管侵犯、TNM分期、细胞核NCL表达情况、细胞膜NCL表达情况为结肠癌患者总生存期的影响因素。多因素结果发现:肿瘤部位、TNM分期、NCL表达情况是影响结肠癌患者生存的独立预后因素。结论:结肠癌组织中NCL的高表达会导致较差的预后。膜NCL高表达与肿瘤的侵袭性相关。NCL与结肠癌患者的OS密切相关,是影响结肠癌患者预后的独立危险因素。

关键词：核仁素结肠癌亚细胞定位生存分析预后

核仁素表达量增高与宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变的病理分级正相关

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南方医科大学学报 2015年第10期35卷 1511-1514页

作者：蒙国照资源李红全黄铭高婷湘南学院病理学教研室//附属医院病理科湖南郴州423000

目的比较核仁素在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织表达的差异,探讨核仁素表达增高在宫颈鳞癌发生发展中的作用。方法用免疫组化检测50例宫颈鳞癌、65例宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中核仁素的表达,比较核仁素在3种组织中表达... 详细信息

目的比较核仁素在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织表达的差异,探讨核仁素表达增高在宫颈鳞癌发生发展中的作用。方法用免疫组化检测50例宫颈鳞癌、65例宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中核仁素的表达,比较核仁素在3种组织中表达的差异,并分析核仁素表达水平与宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变病理分级的关系。结果宫颈鳞癌核仁素阳性表达率显著高于宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织,宫颈上皮内瘤变核仁素阳性表达率显著高于正常宫颈组织,P核仁素表达量在宫颈鳞癌组织(7.6±0.3)显著高于宫颈上皮内瘤变(6.1±0.2)和正常宫颈组织(3.0±0.2),P核仁素表达量在中-低分化宫颈鳞癌(7.9±0.1)显著高于高分化鳞癌(7.0±0.2),在高级别上皮内瘤变(6.0±0.1)显著高于低级别上皮内瘤变组织(4.0±0.2),P核仁素表达量增高,核仁素表达量增高与宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变的病理分级呈正相关。

关键词：核仁素 CIN 宫颈鳞癌

核仁素调控钙通道Orai1活化促进乳腺癌细胞增殖机制研究

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核仁素调控钙通道Orai1活化促进乳腺癌细胞增殖机制研究

作者：谷春明湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:乳腺癌在女性恶性肿瘤中排名第一,其发病机制极其复杂,其中钙信号异常与肿瘤的发生发展密切相关。细胞内钙离子是介导各种细胞功能的重要的第二信使,钙稳态失衡是许多疾病发生的基础。因此,细胞钙离子浓度受钙离子通道、钙离子交... 详细信息

背景:乳腺癌在女性恶性肿瘤中排名第一,其发病机制极其复杂,其中钙信号异常与肿瘤的发生发展密切相关。细胞内钙离子是介导各种细胞功能的重要的第二信使,钙稳态失衡是许多疾病发生的基础。因此,细胞钙离子浓度受钙离子通道、钙离子交换器以及钙泵等严格控制。Orai1蛋白是细胞内非常重要的一个钙通道。Orai1介导的钙内流是非兴奋细胞钙离子进入胞内的最主要的方式,称为钙库调控的钙内流（SOCE）。已有报道指出在乳腺癌中Orai1常常是过度表达和活化,然而其分子机制尚不清楚。我们前期研究证明了核仁素Nucleolin（NCL）是Orai1新的相互作用蛋白,且与乳腺癌密切相关。目的:研究Orai1和NCL之间的相互作用机制,以及它们在乳腺癌发展中发挥的作用,从而为NCL与Orai1这两个抗肿瘤靶点的临床应用提供更多的理论基础。方法:Pull-down及质谱鉴定Orai1与NCL相互作用、Western-blot和Co-IP检测NCL与Orai1的结合;Pull-down和免疫荧光实验检测NCL与Orai1的具体作用区域;免疫组化检测NCL在癌旁组织与乳腺癌之间的表达差异;Western-blot分析PCNA、AKT、P-AKT、PKC和P-PKC蛋白的表达;MTT、集落形成、EDU及划痕实验检测乳腺癌细胞的增殖情况;钙成像和共聚焦荧光测钙实验检测细胞中钙离子的变化;裸鼠荷瘤实验检测Orai1多肽和钙通道抑制剂2-APB对乳腺癌细胞增殖的影响;使用方差分析和t检验（SPSS 20.0）进行统计分析,P＜0.05判断是否具有统计学意义。结果:质谱鉴定发现NCL是Orai1新的相互作用蛋白,Western-blot证明NCL能够与Orai1的N端结合。Pull-down和免疫荧光实验证明NCL的N端和C端可以与Orai1相互作用。免疫组化实验结果表明NCL在乳腺癌组织表达水平更高。Western-blot实验显示NCL过表达促进PCNA的表达,且P-AKT和P-PKC表达水平升高。MTT实验、克隆形成实验、EDU实验以及划痕实验显示NCL过表达可以促进乳腺癌细胞的增殖。钙成像实验和共聚焦荧光测钙实验检测结果显示NCL可以激活Orai1促进钙离子内流。裸鼠荷瘤实验证明利用合成的Orai1多肽阻断NCL-Orai1相互作用以及利用钙通道抑制剂2-APB阻断Orai1活化导致裸鼠皮下瘤瘤体和重量减少。结论:NCL通过与Orai1相互作用激活钙库调控的钙内流,从而促进乳腺癌细胞的增殖,抑制Orai1活化及阻断NCL-Orai1相互作用能够抑制乳腺癌细胞增殖。

关键词：钙库调控的钙内流钙通道核仁素增殖乳腺癌

核仁素对糖尿病性心肌病小鼠心肌细胞凋亡的影响

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中南大学学报（医学版） 2017年第3期42卷 241-245页

作者：刘梅冬孙俪蒋碧梅谭斯品刘可肖献忠中南大学湘雅医学院病理生理学系长沙410078

目的:探讨核仁素对糖尿病性小鼠心肌病心肌细胞凋亡的影响。方法:小鼠给予高脂高糖饲料喂养,第5,6周分别予链脲佐菌素60 mg/kg腹腔注射,构建2型糖尿病模型;实验分为4组:野生型小鼠对照组、核仁素转基因小鼠对照组、野生型小鼠糖尿病组... 详细信息

目的:探讨核仁素对糖尿病性小鼠心肌病心肌细胞凋亡的影响。方法:小鼠给予高脂高糖饲料喂养,第5,6周分别予链脲佐菌素60 mg/kg腹腔注射,构建2型糖尿病模型;实验分为4组:野生型小鼠对照组、核仁素转基因小鼠对照组、野生型小鼠糖尿病组、核仁素转基因小鼠糖尿病组;第8周末检测糖尿病相关指标;第20周末,采用HE染色观察心肌形态学改变;TUNEL染色和caspase-3活性检测心肌细胞凋亡程度。结果:糖尿病组小鼠空腹血糖值较野生型对照组明显升高;与野生型对照组相比,野生型糖尿病组小鼠心肌HE染色显示细胞排列紊乱,部分肌纤维出现断裂及溶解,TUNEL染色和caspase-3活性检测显示心肌细胞凋亡明显增加。与野生型糖尿病组小鼠相比,转基因糖尿病组小鼠心肌形态学改变明显减轻,心肌细胞凋亡明显减少。结论:核仁素过表达可抑制糖尿病性心肌病中心肌细胞凋亡的发生。

关键词： 2型糖尿病心肌病核仁素细胞凋亡转基因小鼠